4 、 PCR 产物与质粒酶切

朱旭芬博士浙江大学生命科学学院

1 、实验目的： (p70) 将目的基因与载体 DNA 用适当的限制性内切酶

进行处理，用于 DNA 的体外重组。

2 、实验原理 * ：• 限制性内切酶：命名与写法

• 缓冲液

限制性内切酶

一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将特定的切割点上将 DNA DNA 分子切断。目前已发现的限分子切断。目前已发现的限制酶有制酶有 200200多种。多种。

A ： PCR 产物 ddH2O 2 µl

PCR 30µl(5g)

10×缓冲液 4 µl

Hind III 2 µl

BamH I 2 µl

酶切反应 ( 甲 )

B ：质粒 DNA ： ddH2O 2 µl

pBSSK(0.5µg/µl) 30µl

10×通用缓冲液 4 µl

Hind III (10U/µl) 2 µl

BamH I (10U/µl) 2 µl

1. 在 0.5 ml eppendorf 管中加入下列成分，（定容 40µl ）

2. 混匀，少许离心一下。3. 在 37℃ 条件下反应 2-4 小时以上，或酶切过夜。 4. 取 5 µl 酶切质粒进行凝胶电泳，预检 。

1. 在 eppendorf 管中加入下列成分（定容 40µl ） A: pBSSKChiA ： B: 质粒 DNA ： ddH2O 2 µl ddH2O 2 µl

质粒 （ 5g ) 30µl pET28c(+) (0.5µg/µl) 30µl

10×缓冲液 4 µl 10×通用缓冲液 4 µl

Hind III 2 µl Hind III (10U/µl) 2 µl

BamH I 2 µl BamH I (10U/µl) 2 µl

2. 混匀，少许离心一下。 3. 在 37℃ 条件下反应 2-4 小时以上，或酶切过夜。 4. 取 5µl 酶切质粒进行凝胶电泳，预检 。

（乙）

PCR/ER

pBSSK/ER

酶切后电泳

pBSKSChiA/ER

pET28c(+)/ER

酶切后电泳