2011-05-31 rezumat in ro

Download 2011-05-31 Rezumat in ro

Post on 03-Feb-2017

219 views

Category:

Documents

2 download

Embed Size (px)

TRANSCRIPT

  • 1

    Universitatea "Babe-Bolyai" Cluj Napoca Universitatea Via Domitia din Perpignan Facultatea de Chimie i Inginerie Chimic Laboratorul IMAGES, EA 4218

    TEZ n cotutel

    pentru obinerea gradului de

    DOCTOR AL UNIVERSITII VIA DOMITIA DIN PERPIGNAN

    DOCTOR AL UNIVERSITII BABE BOLYAI DIN CLUJ-NAPOCA

    Susinut n 24 iunie 2011 de ctre

    Vasilica Adriana LATE

    Sisteme bioanalitice pentru determinarea capacitii antioxidante i a ocratoxinei A n alimente

    -rezumat-

  • 2

    Cuprins

    Partea 1. Sisteme bioanalitice pentru determinarea capacitii antioxidante a alimentelor .......................4

    1 Studiu bibliografic .................................................................................................................................5

    2 Scop .......................................................................................................................................................7

    3 Rezultate originale ................................................................................................................................8

    3.1 Partea experimental ......................................................................................................................8

    3.1.1 Msurtori electrochimice i spectrofotometrice ...................................................................8

    3.1.2 Elaborarea biosenzorului pe baz de peroxidaz din hrean (HRP) ..........................................9

    3.1.3 Elaborarea bioreactorului pe baz de xantin-oxidaz (XOD) ...................................................9

    3.1.4 Metode de referin pentru msurarea capacitii antioxidante .........................................10

    3.1.4.1 Metoda radicalului DPPH ................................................................................................10

    3.1.4.2 Metoda Folin-Cioclteu ..................................................................................................11

    3.2 Rezultate i discuii ........................................................................................................................13

    3.2.1 Caracterizarea biosenzorului pe baz de peroxidaza din hrean (G/HRP-Os) ........................13

    3.2.2 Determinarea capacitii antioxidante folosind cuplajul bioreactor-biosenzor ....................15

    3.2.2.1 Modul "staionar" ...........................................................................................................17

    3.2.2.2 Modul "tranzitoriu".........................................................................................................18

    4 Concluzii ..............................................................................................................................................20

    Partea 2. Sisteme bioanalitice pentru detecia ocratoxinei A n alimente ...................................................21

    1 Studiu bibliografic ...............................................................................................................................22

    1.1 Produsele alimentare contaminate cu ciupercile productoare de OTA .....................................22

    1.2 Efectele toxice ale ocratoxinei A ...................................................................................................23

    1.3 Reglementrile i metodele de referin pentru detecia OTA ....................................................23

    1.3.1 Extracia i purificarea ............................................................................................................23

    1.3.2 Separarea i detecia OTA ......................................................................................................24

    1.4 Teste imunologice pentru depistarea OTA ...................................................................................25

    2 Scop .....................................................................................................................................................26

    3 Rezultate originale ..............................................................................................................................27

  • 3

    3.1 Partea experimental ....................................................................................................................27

    3.1.1 Msurtori electrochimice, spectrofotometrice i cromatografice ......................................27

    3.1.2 Obinerea materialului bio-sensibil .......................................................................................28

    3.1.2.1 Modificarea microbilelor de sticl cu grupri amino......................................................28

    3.1.2.2 Imobilizarea ocratoxinei B pe microbilele de sticl ........................................................29

    3.1.2.3 Legarea anticorpilor anti-OTA i etichetarea acestora cu al doilea anticorp .................29

    3.1.3 Detecia OTA cu testul imunologic de deplasare pe materialul bio-sensibil .........................29

    3.1.3.1 Detecia spectrofotometric ..........................................................................................29

    3.1.3.2 Detecia amperometric cu analiza prin injecie n flux .................................................30

    3.1.4 Metode de extracie i purificare a vinurilor i validarea lor prin HPLC-FD ..........................30

    3.1.4.1 Metoda standard de exctracie i purificare a vinurilor dopate cu OTA ........................30

    3.1.4.2 Extracia i purificarea n faz solid pentru obinerea OTA din vinuri ..........................31

    3.2 Rezultate i discuii ........................................................................................................................31

    3.2.1 Caracterizarea materialului bio-sensibil ................................................................................31

    3.2.1.1 Imobilizarea ocratoxinei B pe microbilele de sticl ........................................................31

    3.2.1.2 Optimizarea testului imunologic prin deplasare pentru detecia OTA ..........................34

    3.2.2 Procedee de purificare a probelor de vin ..............................................................................36

    3.2.3 Detecia OTA in situ n probe de vin ......................................................................................37

    3.2.4 Posibiliti de utilizare a materialului bio-sensibil .................................................................39

    4 Concluzii ..............................................................................................................................................41

    Referine .......................................................................................................................................................42

    Cuvinte cheie:

    capacitatea antioxidant, xantin-oxidaz, peroxidaz din hrean, biosenzor, bioreactor,

    detecie amperometric n flux, ocratoxina A, test imunologic, ocratoxina B, anticorpi,

    microbile de sticl, material bio-sensibil, probe reale de vinuri i sucuri de fructe.

  • 4

    Partea 1. Sisteme

    bioanalitice pentru

    determinarea capacitii

    antioxidante a

    alimentelor

  • 5

    1 Studiu bibliografic

    Metabolismul oxidativ este esenial pentru viaa celular. Cu toate acestea unul dintre efectele

    secundare este producerea de radicali liberi foarte reactivi. Printre acetia se numar radicalul superoxid

    (O2-), radicalul hidroxil (HO), radicalul peroxil (ROO), oxidul nitric (NO) i derivaii acestora, cum ar fi

    apa oxigenat (H2O2), acidul hipocloros (HOCl) i peroxinitritul (ONOO-) [1]. Toi aceti compui sunt

    denumii specii reactive ale oxigenului (SRO). Impactul major al acestor compui asupra organismelor

    este deteriorarea cilor biochimice conducnd, n cele din urm, la mbtrnirea prematur a esuturilor.

    Stresul oxidativ este descris ca dezechilibrul dintre cantitatea de radicali liberi i puterea de

    aprare a sistemului antioxidant compus din enzime de protecie, cum ar fi catalaza, peroxidaza i

    superoxid dismutaza [2]. Aportul zilnic de antioxidani (compui chimici gsii n mod natural n unele

    alimente) ajut la restabilirea acestui echilibru. n acest context, evaluarea capaciti antioxidante a

    sistemelor biologice i a alimentelor ar putea contribui la prevenirea bolilor neurodegenerative i a

    mbtrnirii.

    O metod rapid de cuantificare a capacitii antioxidante a nutrienilor ar putea fi folosit

    pentru a testa calitatea produselor alimentare. Astfel, capacitatea antioxidant poate fi utilizat ca un

    criteriu de selecie a soiurilor, speciilor, a gradului de maturare i a condiiilor de cultur n vederea

    obinerii alimentelor cu coninut ridicat de antioxidani.

    Varietatea metodologiilor folosite pentru evaluarea capacitii antioxidante (CAO) este justificat

    prin diversitatea de substraturi i compoziiile lor. Dintre aceste metode, se disting dou tipuri n funcie

    de abordarea analitic utilizat. Primul tip include metodele bazate pe gradul de inhibare de ctre

    antioxidant a oxidrii lipidelor sau a unei lipoproteine. Al doilea tip se refer la metodele bazate pe

    capacitatea antioxidanilor de a captura radicalii liberi.

    n acest caz, metodele se diversific n funcie de natura radicalilor liberi, care pot fi produi n

    mod natural (SRO), n metabolismul celular, sau sintetizai (cum ar fi 2,2-difenil-1-picrilhidrazil, DPPH sau

    2,2-azinobis(3-ethilbenzotiazolin), ABTS) i n funcie de mijloacele analitice utilizate pentru a monitoriza

    reaciile implicate.