UNIVERSITATEA DE MEDICIN I FARMACIE CAROL DAVILA FACULTATEA DE FARMACIE BUCURETI

TEZA DE DOCTORATREZUMAT

TIPUL PSIHONEUROENDOCRIN ADRENERGIC. CERCETRI FARMACOLOGICE EXPERIMENTALE

Doctorand: ef lucrri farm. ANDREEA LETI IA ARSENE (NI ULESCU)

Conductor tiin ific: Prof. Dr. Farm. AURELIA NICOLETA CRISTEA

BUCURETI 2007

CUPRINSINTRODUCERE PARTEA TEORETIC CAPITOLUL 1 1. SISTEMELE CATECOLAMINERGICE I MECANISMELE REGLRII ADAPTATIVE NEURONALE 1.1. BIOCHIMIA SISTEMULUI CATECOLAMINERGIC (ADRENERGIC I DOPAMINERGIC) 1.2. SISTEMUL ADRENERGIC 1.2.1. Distribu ia sistemului adrenergic 1.2.2. Receptorii adrenergici i efectele activrii 1.2.3..Receptorii 3-adrenergici 1.2.4. Polimorfismul genetic al receptorilor adrenergici 1.3. SISTEMUL DOPAMINERGIC 1.3.1. Distribu ia sistemului dopaminergic 1.3.2. Receptorii dopaminergici CAPITOLUL 2 2. SISTEMELE INDOL-ERGICE CA TRADUCTORI INFORMA IONALI NEUROENDOCRINI 2.1. DUALITATEA SEROTONINEI. NEUROMEDIATOR I HORMON LOCAL 2.1.1. Distribu ia serotoninei n organismul uman 2.1.2. Metabolismul serotoninei 2.1.3. Receptorii serotoninergici 2.1.4. Polimorfismul genetic al receptorilor serotonin-ergici 2.2. SISTEMUL MELATONIN-ERGIC, MESAGER ENDOCRIN TEMPORAL 2.2.1. Glanda epifiz (pineal) 2.2.2. Metabolismul melatoninei 2.2.3. Receptorii melatoninei 2.2.4. Implica iile fiziologice ale melatoninei CAPITOLUL 3 3. SISTEMELE AMINOACID-ERGICE I NEUROPEPTID-ERGICE. MODULAREA TRANSMITERII SINAPTICE 3.1. ASPECTE MODERNE ALE STATUSULUI GABA-ERGIC NEURONAL 3.1.1. Distribu ia sistemului GABA-ergic 3.1.2. Metabolismul acidului -amino butiric 3.1.3. Receptorii GABA 3.1.4. Efecte biologice mediate prin acid -aminobutiric 3.2. ACTUALIT I PRIVIND NEUROPEPTIDELE IMPLICATE N PERCEPEREA DURERII 3.2.1 Proopiomelanocortina precursorul esen ial al neuropeptidelor implicate n perceperea durerii 3.2.2. Dinorfinele, hormoni ai perceperii durerii 3.2.3 Endorfinele n perceperea durerii

3.2.4 Enkefalinele i perceperea durerii 3.2.5 Nociceptina (Orfanina FQ) CAPITOLUL 4 4. TIPOLOGIA PSIHONEUROENDOCRIN COMPORTAMENTAL, FACTOR AL VARIABILIT II BIOLOGICE I FARMACOLOGICE 4.1. ASPECTE GENERALE PRIVIND VARIABILITATEA BIOLOGIC I FARMACOLOGIC 4.1.1. Mecanismele variabilit ii farmacologice 4.1.2. Tipurile de variabilitate farmacologic 4.2. TIPOLOGIA PSIHONEUROENDOCRIN COMPORTAMENTAL, FACTOR AL VARIABILIT II BIOLOGICE I FARMACOLOGICE 4.2.1.Studii clinice de investigare a tipologiei psihoneuroendocrine comportamentale adrenergice 4.2.2.Studii clinice i experimentale de investigare a tipului psihoneuroendocrin opioid, comparativ cu tipul adrenergic 4.2.3.Tipul serotoninergic CERCETRI PERSONALE CAPITOLUL 1 1. MATERIALE I METODE 1. 1. METODE EXPERIMENTALE FARMACOLOGICE 1.1.1. Testul stimulului termic (hot-plate test) 1.1.2. Testul nnotului for at (testul disperrii, forced swimming test) 1.1.3. Contrac ia neurogen a vasului deferent, izolat de la oarece 1.2. METODE BIOCHIMICE DE INVESTIGARE A DINAMICII UNOR PARAMETRII CORELA I CU SISTEMUL ADRENERGIC 1.2.1. Determinarea cantitativ a acidului -aminobutiric din esutul cerebral 1.2.2. Determinarea activit ii monoaminoxidazei mitocondriale cerebrale 1.2.3. Dozarea proteinelor totale prin metoda Folin Cioclteu (modificat de Lowry) 1.2.4. Determinarea susceptibilit ii la peroxidare lipidic a frac iei mitocondriale izolat din creierul de oarece 1.2.5. Determinarea activit ii superoxiddismutazei neuronale 1.2.6. Separarea i determinarea cantitativ, simultan, a noradrenalinei, serotoninei i dopaminei din omogenatul de creier, prin cromatografie de lichide de nalt performan 1..3. METODE DE PRELUCRARE STATISTIC A DATELOR EXPERIMENTALE CAPITOLUL 2 2. IDENTIFICAREA TIPOLOGIILOR PSIHONEUROENDOCRINE A I O 2.1. METODE DE DIFEREN IERE, CLINIC I EXPERIMENTAL, A TIPURILOR PSIHONEUROENDOCRINE COMPORTAMENTALE A I O 2.1.1. Diferen ierea tipurilor psihoneuroendocrine A i O n studii clinice pe baza chestionarului de personalitate 2.1.2. Diferen ierea tipurilor psihoneuroendocrine A i O n studii clinice pe baza sensibilit ii dureroase 2.1.3. Diferen ierea experimental a tipurilor psihoneuroendocrine A i O pe baza sensibilit ii dureroase 2.1.4 Concluzii 2.2. DISTRIBU IA GAUSSIAN A TIPURILOR PSIHONEUROENDOCRINE A I O, UTILIZND CRITERIUL SENSIBILIT II DUREROASE, N MODELE ANIMALE

CAPITOLUL 3 3. CERCETRI EXPERIMENTALE PRIVIND DINAMICA TONUSULUI TIMIC AL TIPURILOR PSIHONEUROENDOCRINE ADRENERGIC I OPIOID 3.1.STUDII PRIVIND TONUSUL TIMIC N STRES ACUT LA TIPURILE ADRENERGIC I OPIOID 3.1.1. Obiectivele cercetrii 3.1.2. Curba frecven - distribu ie de selec ie 3.1.3. Repartizarea pe loturi 3.1.4. Rezultate i discu ii 3.2. CERCETAREA TONUSULUI TIMIC AL TIPULUI INTERMEDIAR, ECHILIBRAT (TIPUL N) DUP ADMINISTRAREA UNEI DOZE FIZIOLOGICE DE ADRENALIN 3.2.1. Obiectivele cercetrii 3.2.2. Curba frecven - distribu ie de selec ie 3.2.3. Repartizarea pe loturi 3.2.4. Rezultate i discu ii 3.3. CRONOVARIABILITATEA CIRCADIAN A TONUSULUI TIMIC, N CADRUL FIECRUI TIP PSIHONEUROENDOCRIN 3.3.1. Obiectivele cercetrii 3.3.2. Curba frecven - distribu ie de selec ie 3.3.3. Repartizarea pe loturi 3.3.4. Rezultate i discu ii 3.4. CERCETAREA VARIABILIT II EFECTULUI ANTIDEPRESIV AL IMIPRAMINEI, FLUOXETINEI I A LITIULUI LA TIPURILE PSIHONEUROENDOCRINE ADRENERGIC I OPIOID 3.4.1. Obiectivele cercetrii 3.4.2. Curba frecven - distribu ie de selec ie 3.4.3. Repartizarea pe loturi 3.4.5. Rezultate i discu ii 3.5. CONCLUZII CAPITOLUL 4 4. CERCETRI EXPERIMENTALE ASUPRA DINAMICII ACTIVIT II MONOAMINOXIDAZEI MITOCONDRIALE CEREBRALE LA TIPURILE PSIHONEUROENDOCRINE ADRENERGIC I OPIOID 4.1. EVALUAREA ACTIVIT II MONOAMINOXIDAZEI MITOCONDRIALE CEREBRALE LA TIPURILE ADRENERGIC I OPIOID, N STARE BAZAL 4.1.1. Curba frecven - distribu ie de selec ie 4.1.2. Repartizarea pe loturi 4.1.3. Rezultate i discu ii 4.2. EVALUAREA ACTIVIT II MONOAMINOXIDAZEI MITOCONDRIALE CEREBRALE LA TIPURILE ADRENERGIC I OPIOID, DUP STRES ACUT 4.2.1. Curba frecven - distribu ie de selec ie 4.2.2. Repartizarea pe loturi 4.2.3 Rezultate i discu ii 4.3. CONCLUZII CAPITOLUL 5 5. EVALUAREA STATUSULUI OXIDATIV CELULAR AL TIPURILOR PSIHONEUROENDOCRINE ADRENERGIC I OPIOID 5.1. EVALUAREA PREDISPOZI IEI LA STRES OXIDATIV. SUSCEPTIBILITATEA LA AUTOOXIDARE A MITOCONDRIILOR CEREBRALE PROVENITE DE LA TIPURILE ADRENERGIC I OPIOID

5.1.1. Curba frecven - distribu ie de selec ie 5.1.2. Repartizarea pe loturi 5.1.3. Rezultate i discu ii 5.2. EVALUAREA ACTIVIT II SUPEROXIDDISMUTAZEI CEREBRALE LA TIPURILE PSIHONEUROENDOCRINE ADRENERGIC I OPIOID 5.2.1. Curba frecven - distribu ie de selec ie 5.2.2. Repartizarea pe loturi 5.2.3. Rezultate i discu ii 5.3. Concluzii CAPITOLUL 6 6. CERCETRI EXPERIMENTALE PRIVIND DINAMICA NEURONAL A ACIDULUI AMINOBUTIRIC LA TIPURILE PSIHONEUROENDOCRINE ADRENERGIC I OPIOID 6.1. EVALUAREA CONCENTRA IEI NEURONALE BAZALE A ACIDULUI GAMMAAMINOBUTIRIC (GABA) LA TIPURILE PSIHONEUROENDOCRINE ADRENERGIC I OPIOID 6.1.1. Curba frecven -distribu ie de selec ie 6.1.2. Repartizarea pe loturi 6.1.3. Rezultate i discu ii 6.2. EVALUAREA CONCENTRA IEI NEURONALE A ACIDULUI -AMINOBUTIRIC (GABA) LA TIPURILE PSIHONEUROENDOCRINE ADRENERGIC I OPIOID, DUP INDUCEREA STRESULUI ACUT 6.2.1.. Curba frecven -distribu ie de selec ie 6.2.2.. Repartizarea pe loturi 6.2.3. Rezultate i discu ii 6.3. EVALUAREA CONCENTRA IEI NEURONALE A ACIDULUI -AMINOBUTIRIC (GABA) LA TIPURILE PSIHONEUROENDOCRINE ADRENERGIC I OPIOID, DUP ADMINISTRARE DE PROPRANOLOL 6.3.1. Curba frecven -distribu ie de selec ie 6.3.2. Repartizarea pe loturi 6.3.3. Rezultate i discu ii 6.4. CONCLUZII CAPITOLUL 7 7. EVALUAREA STATUSULUI MONOAMINERGIC NEURONAL AL TIPURILOR PSIHONEUROENDOCRINE ADRENERGIC I OPIOID 7.1. VALIDAREA METODEI DE IDENTIFICARE, SEPARARE I DETERMINARE CANTITATIV, SIMULTAN, A NORADRENALINEI, DOPAMINEI I SEROTONINEI, IN VITRO, PRIN SPECTROMETRIE DERIVAT DE ORDINUL II 7.1.1. Validarea metodei de determinare spectrometric a serotoninei 7.1.2. Validarea metodei de determinare spectrometric a dopaminei 7.1.3. Validarea metodei de determinare spectrometric a noradrenalinei 7.1.4. Determinarea simultan a serotoninei, dopaminei i a noradrenalinei din amestecuri sintetice 7.2. EVALUAREA CONCENTRA IEI NEURONALE BAZALE A NORADRENALINEI, DOPAMINEI I SEROTONINEI, LA TIPURILE A, N I O PRIN HPLC CU DETEC IE N UV 7.2.1. Curba frecven - distribu ie de selec ie 7.2.2. Repartizarea pe loturi 7.2.3. Rezultate i discu ii 7.3. EVALUAREA CONCENTRA IEI NEURONALE A NA, 5HT I DA, LA TIPURILE A, N I O, DUP STRES ACUT 7.3.1. Curba frecven - distribu ie de selec ie

7.3.2. Repartizarea pe loturi 7.3.3. Rezultate i discu ii 7.4. DINAMICA STATUS-ULUI MONOAMINERGIC NEURONAL AL TIPURILOR A, N I O, DUP STRES ACUT, COMPARATIV CU STAREA BAZAL 7.5. CONCLUZII CAPITOLUL 8 8. CERCETRI EXPERIMENTALE PRIVIND EFECTUL ANALGEZIC AL MELATONINEI LA TIPURILE PSIHONEUROENDOCRINE ADRENERGIC I OPIOID, N TESTUL STIMULULUI TERMIC 8.1. CERCETRI EXPERIMENTALE ASUPRA INTERAC IUNII SISTEMELOR ADRENERGIC I MELATONINERGIC. EFECTELE MELATONINEI ASUPRA INERVA IEI ADRENERGICE A VASULUI DEFERENT, IZOLAT DE LA OARECE 8.2. CERCETRI EXPERIMENTALE PRIVIND EFECTUL ANALGEZIC AL MELATONINEI LA TIPURILE A I O, N FUNC IE DE DOZ 8.2.1. Curba frecven - distribu ie de selec ie 8.2.2. Repartizarea pe loturi 8.2.3. Rezultate i discu ii 8.3. MODELE LINIARE PREDICTIVE PENTRU EFECTUL ANALGEZIC AL MELATONINEI 8.4. CERCETRI EXPERIMENTALE PRIVIND EFECTUL ANALGEZIC AL ASOCIERILOR MELATONIN-ONDANSETRON, MELATONIN-PETIDIN I MELATONIN-TRAMADOL, LA TIPURILE PSIHONEUROENDOCRINE ADRENERGIC I OPIOID 8.4.1. Curba frecven - distribu ie de selec ie 8.4.2. Repartizarea pe loturi 8.4.3. Rezultate i discu ii 8.5. CONCLUZII CAPITOLUL 9 9. BIOVARIABILITATEA SEZONIER A NOCICEP IEI I ANALGEZIEI ENDOGENE N CADRUL TIPOLOGIILOR PSIHONEUROENDOCRINE 9.1. MATERIALE I METODE 9.2. REZULTATE I DISCU II REZULTATE GENERALE I DISCU II CONCLUZII GENERALE BIBLIOGRAFIE

INTRODUCEREProgresele n domeniul farmacologiei moleculare continu s pstreze un ritm extrem de alert i la nceputul mileniului III. Volumul de informa ii acumulat n cadrul acestui domeniu, cu hotare n continu expansiune, precum i tehnologia modern aplicat n cercetrile actuale permit corelarea dezechilibrelor manifestate n metabolismul sistemului nervos central cu diferitele patologii ale acestuia. Neuronii sunt frac iuni anatomice unice, avnd capacitatea de a transmite informa ia n sistem de re ea, ceea ce justific mecanismele dependente de experien cum ar fi memorarea, nv atul sau contiin a. Pentru a putea ndeplini aceste func ii neuronii sunt polariza i, structural i func ional. Acest lucru este evident n alctuirea lor tripartit: corp celular, axon i dendrite. n timp ce corpul cuprinde structura de biosintez (nucleul, ribozomii, reticulul endoplasmatic, aparatul Golgi i mitocondriile pentru stocare de energie), axonul este dotat cu componente moleculare i subcelulare pentru propagarea poten ialului de ac iune de la corpul celular ctre inte ndeprtate; dendritele reprezint un set de termina ii citoplasmatice ramificate care se prelungesc din corpul celular i duc la o mrire a acestuia pentru recep ia de semnal. Legturile structurale pentru transmisia de semnal stau la baza arhitecturii neuronale. n cadrul sistemului nervos matur, n mod normal, circuitele neuronale (neuroarhitectura) sufer modificri adaptative. n cadrul unei celule neuronale sinapsele vechi pot involua (pn la dispari ia lor), cu formarea simultan a unor noi ramifica ii (noi neurite) care vor stabili noi sinapse. Aceste modificri ale arhitecturii neuritice i sinaptice dovedesc marea plasticitate (capacitate) de adaptare a sistemului nervos la condi iile de mediu. Astzi se consider c exist dou clase majore de factori (semnale) intracelulari care regleaz dezvoltarea i adaptarea neuronal: factorii de cretere (factorul de cretere fibroblastic, factorul neutrofic ciliar, etc.) i factorii neurotransmi tori (dopamin, serotonin, acetilcolin, glutamat, etc.). Pierderea echilibrului ntre cele dou sisteme de factori conduce la declanarea strilor patologice. Investigarea sistemului nervos central rmne un domeniu fascinant, acesta constituind o surs inepuizabil de noi descoperiri. Diversitatea naturii umane i unicitatea arhitecturii cerebrale individuale conduce explorrile n acest domeniu pe drumuri subtile i foarte greu de strbtut. Individualitatea statusului celular, imunitar, genetic, etc., a ridicat multiple semne de ntrebare, de-a lungul timpului, i a deschis por ile unor cercetri de mare amploare asupra politipismului uman. Astfel, sub ac iunea unor factori identici, fizici sau emo ionali, oamenii dezvolt rspunsuri fiziologice, comportamentale i emo ionale diferite. Acest fenomen a fost numit politipism. Fenomenul a fost intuit n anii 1980 de ctre Rosenman R.H. care a descris, pentru prima dat, tipul comportamental adrenergic (A). Ulterior, n anii 1990 Cristea A.N. a identificat i a descris tipul opioid (O), opus din punct de vedere comportamental tipului adrenergic, iar n anii 2000 oncologia comportamental a introdus conceptul tipului C, cu predispozi ie genetic spre dezvoltarea cancerului biopsihosocial. Dei cunoscut i descris cu aproape treizeci de ani n urm, tipul adrenergic rmne i astzi un subiect de cercetare controversat, avnd anumite caracteristici care l predispun la apari ia i evolu ia bolilor cardiovasculare: competitivitate, ambi ie accentuat, dorin a persistent de cunoatere, implicarea continu n activit i diverse i multiple, cu sentiment al grabei i urgen ei de timp, iritabilitate, impulsivitate, capacitate redus de deconectare i relaxare, predispozi ie la sindrom depresiv post-stres. Literatura de specialitate recent (2007) aduce noi dovezi care sus in i argumenteaz tabloul fiziopatogenetic al tipului A, prin cercetri moderne care au condus la urmtoarele concluzii: Sensibilitatea receptorilor de tip -adrenergic este mare n cazul tipului A; Disfunc ia receptorilor se coreleaz cu ostilitatea; Numr mic de receptori 2 n trombocite i numr mare de receptori 2 n limfocite;

Modificrile cardiovasculare apar doar n stres i n perioada de refacere imediat urmtoare (poststres); Prevalen a maladiei bipolare printre indivizii de tip A este de aproximativ 65%; Tipul A se caracterizeaz printr-un temperament ciclotimic; Preferin e alimentare: pete, brnz, legume. Tipul comportamental opus, tipul opioid, cu predominen a psihoneuroendocrin a sistemului opioid endogen, descris de ctre Cristea A N n 1993, are urmtoarele caracteristici: defensiv, calm, relaxat, lipsit de agresivitate, introvertit, rezistent la durere, dar cu predispozi ie la sindrom hiperalgic post-stres. n acest context, individualizarea farmacoterapiei n func ie de tipologia psihoneuroendocrin, propus i studiat de Cristea A.N. i colab. ncepnd din 1995, ar putea constitui un pas important pentru o medica ie precis, intit i cu reac ii adverse ct mai pu ine. n acest scop, cercetrile de farmacologie molecular din lume pot s aduc dovezi privind procesele celulare, moleculare care stau la baza fiziopatologiei tipurilor psihoneuroendocrine. Cercetrile experimentale personale efectuate i prezentate n aceast lucrare se ncadreaz n sfera studiilor privind variabilitatea biologic i farmacologic determinat de factorul tipologie psihoneuroendocrin. Tipologia psihoneuroendocrin luat n studiu este tipologia adrenergic. Metodologia de cercetare abordat este la nivel molecular-biochimic. Este investigat status-ul fiziologic al tipologiei psihoneuroendocrine adrenergice n raport cu sistemele semnalizatoare adrenergic, dopaminergic, serotoninergic, GABA-ergic, melatoninergic, precum i cu sistemul enzimatic monoaminoxidazic i cu stresul oxidativ celular. Modularea rspunsului tipologic psihoneuroendocrin este indus prin semnale farmacologice adecvate scopului.

PARTEA TEORETIC

CAPITOLUL 11. SISTEMELE CATECOLAMINERGICE I MECANISMELE REGLRII ADAPTATIVE NEURONALEStudiul metabolismului sistemului nervos central a dobndit, n ultimii ani, o amploare deosebit. Tehnologia modern aplicat n cercetrile actuale a permis corelarea dezechilibrelor aprute n metabolismul sistemului nervos central cu diferitele patologii ale acestuia. Din acest punct de vedere, tabloul patogenetic determinat de dezechilibrul sistemului catecolaminergic a fost ndelung studiat fiind destul de complex, rmnnd destule necunoscute. Catecolaminele sunt mediatori fundamentali pentru majoritatea sistemelor reglatoare ale organismului. Astfel, acestea intervin n reac iile organismului n condi ii de stres, n activitatea psihomotorie, n procesele emo ionale. Dezechilibrul catecolaminelor este corelat cu unele boli endocrine, afec iuni cardiace, precum i afec iuni neurodegenerative sau psihiatrice. Sistemul catecolaminergic include sistemul adrenergic i sistemul dopaminergic. 1.1. BIOCHIMIA SISTEMULUI CATECOLAMINERGIC (ADRENERGIC I DOPAMINERGIC) Sistemul catecolaminergic central cuprinde neuroni cu sediul principal n trunchiul cerebral, cu axoni ascenden i spre hipotalamus i alte zone cerebrale, avnd drept mediatori chimici noradrenalina(NA), adrenalina(A) i dopamina(DA). Hipotalamusul nu con ine pericarionul neuronilor adrenergici[140, 354, 373]. Sistemul catecolaminergic periferic cuprinde ganglionii vegetativi simpatici cu fibre nervoase postganglionare, glandele medulosuprarenale i celulule cromafine din organul Zuckerkandl(situat n bifurca ia aortei) i din diverse alte esuturi(de exemplu celulele glomusului carotidian). Neuronii simpatici periferici sintetizeaz i elibereaz exclusiv noradrenalina(NA), fie n sinapsele cu rol de transmi tor, fie-dac stimularea nervoas este mai puternic sau mai prelungit-n circula ia sangvin cu rol de neurohormon. Norepinefrina sangvin are origine predominant neuronal. Medulosuprarenalele elibereaz direct n circula ia sangvin trei catecolamine: adrenalina(A), noradrenalina(NA) i dopamina(DA), care apar n plasm n concentra ii suficient de mari pentru a provoca efecte tisulare, precum i peptide opioide: metencefalina, leuencefalina i adrenorfina. n trecut A i NA erau considera i hormoni ai medulosuprarenalei, iar DA o substan precursoare. Nu a fost dovedit cu certitudine eliberarea izolat a dopaminei medulosuprarenale n snge i nici existen a unor neuroni periferici exclusiv dopaminergici. 1.2.3. Receptorii 3-adrenergici Investigarea efectelor de tip adrenergic la nivel tisular au relevat rspunsuri biologice de tip adrenergic atipice, diferite de efectele clasice mediate prin receptorii 1 i 2. Aceste observa ii au condus la ipoteza existen ei unor tipuri noi, necunoscute, de receptori adrenergici. Cercetrile ulterioare au eviden iat faptul c acetia fac parte din categoria receptorilor de tip -adrenergic i au fost numi i receptori 3 [89, 94, 176, 192, 194, 214, 264, 284, 298, 397, 436]. Structura receptorului beta3 Receptorul 3-adrenergic apar ine clasei de receptori cupla i cu proteinele G, este format din 408 resturi de aminoacizi i are apte domenii transmembranare formate din aproximativ 22-28 de

resturi de aminoacizi [32]. Secven a extracelurar este glicozilat, iar captul carboxi-terminal este localizat n interiorul celulei. Acest receptor posed situs-uri de fosforilare pentru cel pu in dou kinaze diferite: protein kinaza A (PKA) i kinaza cuplat cu proteina G (GRK). La nivel intracelular receptorul 3 interac ioneaz cu o protein de tip Gs (stimulnd adenilat ciclaza), dar n literatura de specialitate exist dovezi care sus in i interac iuni ale acestui receptor cu proteine de tip Gi. De asemenea, unele studii afirm implicarea unui al doilea mesager secund, inc neidentificat. Distribu ia tisular Tehnologia modern a permis localizarea receptorilor 3 la nivelul esutului adipos (alb i brun), la nivelul intestinului, al miocardului, muchi scheletici i vezic urinar. Efecte biologice [34, 138] Efecte metabolice (metabolism lipidic i glucidic) Efectele biologice mediate prin receptori 3- adrenergici la nivelul adipocitelor s-au dovedit a fi spectaculoase i reprezint subiectul actual de cercetare al multor laboratoare din lume. Astfel, la nivel adipocitar, receptorii 3 ini iaz o adevrat cascad lipolitic, stimulnd eliminarea extra-adipocitar a energiei stocat n depozidele lipidice. De asemenea, experimentele au demonstrat c receptorii 3 induc expresia proteinei mitocondriale necuplate (UCP), molecul cheie n termogeneza metabolic, acest mecanism favoriznd lipoliza. Aceste efecte se coreleaz pozitiv cu activitatea acestor receptori la nivelul metabolismului glucidic. Astfel stimularea receptorilor 3-adrenergici determin o diminuare a glucozei serice i a insulinemiei (efect hipoglicemiant). Importan a receptorilor 3 pentru echilibrarea balan ei energetice precum i pentru men inerea homeostaziei glucozei se coreleaz pozitiv, ceea ce a deschis perspective moderne pentru abordarea farmacoterapeutic a obezit ii i a diabetului zaharat de tip 2. Efecte asupra aparatului digestiv i urinar La nivel intestinal, studiile efectuate au relevat implicarea receptorilor 3 n modularea motilit ii, precum i un efect de protec ie al suprafe ei mucosale. La nivel urinar (vezic urinar) s-au nregistrat efecte de reglare a frecven ei urinare, ceea ce i poate gsi utilitatea terapeutic, n viitor, n tratarea incontinen ei. Efecte asupra miocardului O ipotez foarte interesant i atrgtoare pentru farmacoterapia insuficien ei cardiace a fost emis foarte recent. Astfel, dup identificarea receptorilor 3-adrenergici la nivel miocardic, s-a observat faptul c acetia induc un efect inotrop negativ (scderea contractilit ii miocardice). Insuficien a cardiac se caracterizeaz printr-o hiper-stimulare a receptorilor 1 i 2-adrenergici, ce induc efecte inotrop pozitive, cu consecin a supra-stimulrii muchiului miocardic. n paralel, receptorii 3 sufer o up-reglare cu instalarea efectului inotrop negativ. Acesta pare s reprezinte mecanismul compensator, de protec ie i salvare miocardului n insuficien a cardiac. n plus s-a constatat faptul c receptorii 3 mediaz stimularea NO sintazei i eliberarea monoxidului de azot, ceea ce crete relaxarea diastolic i reduce consumul de oxigen al inimii [351].

Fig.10 Implicarea receptorilor 3 n mecanismele insuficien ei cardiace (dup Stanley W.C., 2001)

CAPITOLUL 22. SISTEMELE INDOL-ERGICE CA TRADUCTORI INFORMA IONALI NEUROENDOCRINISistemul indol-ergic cuprinde sistemul serotoninergic i sistemul melatoninergic. 2.2 SISTEMUL MELATONIN-ERGIC, MESAGER ENDOCRIN TEMPORAL Ritmurile circadiene sunt ritmuri biologice ce se ntind pe o durat de 24 de ore, acestea fiind pilotate de ctre un ceas biologic intern situat in nucleul suprachiasmatic al hipotalamusului. Acesta se materializeaz printr-un grup de neuroni ai hipotalamusului anterior ce func ioneaz pe baza unei activita i electrice si biochimice spontane. El primete informa ii provenite din mediul exterior de la retin si le transmite epifizei prin intermediul unui ganglion cervical superior, precum si efectorilor neurovegetativi ai hipotalamusului. Principalul hormon epifizar care sincronizeaz expresia principalelor efecte fiziologice circadiene este melatonina. Din aceste motive poten ialul fiziopatologic i farmacologic al acestui hormon constituie obiectul cercetrilor moderne privind mecanismele de integrare ale organismelor n marea varietate informa ional a mediului exterior. Secre ia melatoninei este controlat de ctre noradrenalina din termina iile simpatice pineale. Rolul pivotal al acestui neuromediator n biosinteza nocturn a melatoninei este intens studiat n prezent. De asemenea, cele mai recente studii n domeniu au condus la descoperirea unei multitudini de mediatori, cu structuri chimice variate, localizate in celulele pineale i care moduleaz biochimia melatoninei.

Fig.15 Corela iile nervoase, endocrine i paracrine ale glandei pineale(SCN = nucleu suprachiasmatic; IGL = valva intergeniculat talamic; PVN = nucleu hipotalamic paraventricular; IML = nucleu intermedio-lateral ; SCG = ganglion cervical superior ; HCRT = hipocretina ; LHRT = luliberina ; PACAP = peptida activatoare a adenilatciclazei pituitare ; VIP = peptida intestinal vasoactiv ; NPY = neuropeptida Y ; VP = vasopresina ; OT = oxitocina )

(dup Simmoneaux Valerie, 2005)

CAPITOLUL 33. SISTEMELE AMINOACID-ERGICE I NEUROPEPTID-ERGICE. MODULAREA TRANSMITERII SINAPTICE3.2. ACTUALIT I PRIVIND NEUROPEPTIDELE IMPLICATE N PERCEPEREA DURERII Istoria descoperirii neuropeptidelor a nceput n anii 1960-1970 cnd s-a demonstrat c factorii reglatori ai gladei pituitare sunt substan e peptidergice. Neuropeptidele sunt sintetizate de neuroni, eliberate din termina iile lor presinaptice (la fel ca i neurotransmi torii), ac ioneaz n situsurile postsinaptice i sunt adesea numite neuromodulatori putativi. Literatura de specialitate nu mai utilizeaz termenul de neuropeptide n sens restrictiv, deoarece majoritatea neuropeptidelor cerebrale nu influen eaz doar metabolismul neuronal, ci i esuturile non-neuronale. n plus, se pare c neuropeptidele fac legtura ntre sistemul nervos central i sistemele periferice, cele mai importante fiind axele neuroimun i neuroendocrin. Practic neuropeptidele sunt implicate n diverse procese fiziologice, care includ: dezvoltarea, creterea, homeostazia, rspunsurile imune i comportamentul [132, 146, 161, 253, 373]. Neuropeptidele sunt sintetizate din importante molecule precursoare, iar maturizarea precursorilor poate genera biosinteza uneia sau mai multor peptide. Neuropeptidele sintetizate sunt stocate n vezicule i eliberate ca urmare a efectului unui anumit stimul. Literatura de specialitate subliniaz faptul c mai multe neuropeptide diferite pot coexista n acelai neuron, fiind destul de des ntlnit i cazul colocalizrii neuropeptidelor cu neurotransmi torii.

n cazul colocalizrii cu neurotransmi tori, neuropeptidele sunt capabile s modeleze efectele neurotransmi torilor elibera i.

Fig.32 Mecanisme moleculare ale nocicep iei (dup Dale Maureen, 2004)

CAPITOLUL 44. TIPOLOGIA PSIHONEUROENDOCRIN COMPORTAMENTAL, FACTOR AL VARIABILIT II BIOLOGICE I FARMACOLOGICEUn medicament administrat n aceeai posologie, n condi iile similare, la indivizii adul i dintro popula ie omogen ca ras, sex i vrst, declaneaz efecte farmacologice diferite. Acest fenomen reprezint variabilitatea farmacologic ntr-o popula ie relativ omogen, ca expresie fireasc a variabilit ii biologice a rspunsului la oricare stimul. Cauza variabilit ii farmacologice la un medicament este diferit uneori considerabil ntre indivizii unei popula ii. Aceast reactivitate individual la un medicament variaz chiar la acelai individ, n condi ii diferite, n spa iu i la timpi diferi i, n cursul tratamentului. Variabilitatea farmacologic (farmacocinetic, farmacodinamic i farmacotoxicologic) este, prin urmare, de dou tipuri: interindividual (la nivel de popula ie) i, respectiv, intraindividual (la nivel de individ) [123].

4.2. TIPOLOGIA PSIHONEUROENDOCRIN COMPORTAMENTAL, FACTOR AL VARIABILIT II BIOLOGICE I FARMACOLOGICE Cristea A.N. a introdus no iunea de tipologie psihoneuroendocrin n cadrul factorilor generatori de variabilitate biologic i farmacologic [128]. Ne vom referi la urmtoarele trei tipuri psihoneuroendocrine comportamentale, descrise n literatura de specialitate: tipul adrenergic A ; tipul opioid O ; tipul serotoninergic. 4.2.1. Studii clinice de investigare a tipologiei psihoneuroendocrine comportamentale adrenergice Diferen ierea tipologiei adrenergice a fost realizat pentru prima dat de ctre Rosenman R.H. n 1978, prin descrierea unor caracteristici comportamentale specifice care l predispun la apari ia i dezvoltarea bolilor cardiovasculare: competitivitate, ambi ie accentuat, implicarea continu n activit i diverse i multiple, cu sentiment al grabei i urgen ei de timp, iritabilitate, impulsivitate, capacitate redus de deconectare i relaxare [295]. ntr-un studiu clinic desfurat n Canada [228] s-au urmrit, la indivizi de tip A, varia iile parametrilor cardiovasculari dup administrarea, n bolus, a 50g CCK-4 (colecistokinin-tetrapeptid). Acest compus, administrat n maniera prezentat, are proprietatea de a produce simptome de panic (agent panicogen). Varia iile frecven ei cardiace, dup administrare de CCK-4, au fost semnificativ mai mari la tipul A, comparativ cu tipul B. ntr-un spital de psihiatrie din Norvegia (Haukeland University Hospital) a fost realizat un studiu clinic, pe 99 de pacien i interna i pentru tulburri de comportament asociate depresiei [271]. Pacien ii au fost diferen ia i n loturi de tip A i B, pe baza chestionarului Jenkins i s-a urmrit frecven a depresiilor unipolare, bipolare i a migrenei n func ie de tipologia comportamental. Rezultatele studiului au eviden iat urmtoarele aspecte: pacien ii ncadra i n tipologia comportamental adrenergic erau diagnostica i cu depresie bipolar (n propor ie de 65%); tipul A se caracterizeaz printr-un temperament ciclotimic; frecven a crizelor migrenoase nu s-a corelat semnificativ nici cu tipul A, nici cu tipul B. n anul 2007 au fost publicate rezultatele unui studiu clinic extrem de interesant [33] care a urmrit tipul comportamental adrenergic i predispozi ia la boli cardiovasculare, n corela ie cu preferin a pentru o diet pro-aterogen. Studiul s-a desfurat, simultan, n Irlanda de Nord i Fran a i a inclus 10.602 voluntari. S-a eviden iat, astfel, preferin a adrenergicilor pentru produse lactate i legume n Irlanda de Nord, n timp ce tipul A din Fran a prefer dieta pe baz de pete i legume. Practic, se poate afirma c adrenergicul nu are o diet pro-aterogen, deci alimenta ia nu este factor de risc pentru predispozi ia la afec iuni cardiovasculare ale tipului A. O serie de studii clinice au investigat poten a antagonismului sistemelor simpatic/parasimpatic la tipul A, comparativ cu tipul B. n acest scop au fost evalua i parametrii cardiovasculari specifici (de ex. amplitudinea undei T din electrocardiogram) dup administrarea unor medicamente simpatomimetice (isoproterenol, noradrenalin, etc.). n toate cazurile revenirea n limite normale, fiziologice, a parametrilor cardiovasculari studia i s-a realizat mult mai repede (semnificativ) n cazul tipului B, ceea ce sugereaz un antagonism redus parasimpatic n cazul tipului adrenergic [285]. 4.2.2. Studii clinice i experimentale de investigare a tipului psihoneuroendocrin opioid, comparativ cu tipul adrenergic

Dup emiterea ipotezei privind existen a tipului opioid (O) ca tip opus/complementar tipului adrenergic (Cristea A.N., 1993), au fost ini iate cercetri pentru caracterizarea comparativ a acestor dou tipologii. Analgezia, statusul catecolaminergic i sindromul post-stres, n stres acut i cronic la tipul O, comparativ cu tipul A [105, 107, 121, 129] S-au realizat studii clinice i experimentale pentru stabilirea unor corela ii ntre reac iile psihosomatice, analgezie i dinamica urinar a catecolaminelor, n stresul acut i cronic, comparativ, pentru cele dou tipuri psihoneuroendocrine. Rezultatele ob inute prin studii clinice au fost n perfect concordan cu datele furnizate de cercetrile experimentale (pe animale de laborator) i eviden iaz urmtoarele aspecte: n stres acut, status-ul catecolaminergic al tipului A este mult mai mare, comparativ cu tipul O (concentra iile catecolaminelor excretate urinar sunt semnificativ mai mari la tipul A, comparativ cu tipul O); n stres cronic, dinamica status-ului catecolaminergic sufer modificri interesante n func ie de tipologie: adrenergicul epuizeaz catecolaminele propor ional cu durata stresului, n timp ce opioidul se tonific printr-un status catecolaminergic exacerbat (concentra ii semnificativ mai mari ale catecolaminelor urinare la tipul O, comparativ cu tipul A, n stres cronic); reactivitatea cardiovascular n stres a fost mult mai mare la tipul A, comparativ cu tipul O (presiune arterial sistolic i frecven cardiac semnificativ mai mari la tipul A, comparativ cu tipul O); sensibilitatea dureroas bazal este semnificativ diferit la cele dou tipuri psihoneuroendocrine (hipersensibilitate la durere pentru tipul A, comparativ cu o hiposensibilitate dureroas n cazul tipului O) n stres acut, adrenergicul manifest o tendin marcat de cretere a analgeziei endogene; n stres cronic, opioidul devine hipersensibil la durere, iar adrenergicul manifest simptomatologie depresiv. Aceste observa ii experimentale au demonstrat existen a a dou tipuri diferite de indivizi care se disting prin: sensibilitate dureroas bazal diferit (hipersensibilitate caracteristic tipului A i hiposensibilitate pentru tipul O); analgezie endogen nalt n stres acut i sindrom depresiv n stres cronic, caracteristice tipului A (probabil consecin a epuizrii depozitelor de catecolamine); sindrom hiperalgic n stres cronic, caracteristic tipului O (probabil consecin a epuizrii opioidelor endogene descrcate n timpul stresului sus inut). Pragul convulsivant al tipurilor psihoneuroendocrine A i O [116] O serie de cercetri experimentale au avut drept scop analiza electrofiziologic a tipurilor A i O, pentru stabilirea rezisten ei la electrooc i la convulsivantele chimice (de tipul stricninei). n acest scop s-au determinat procentele de letalitate dup electrooc i DL50 ale stricninei, pentru fiecare tip psihoneuroendocrin. Rezultatele experimentale au eviden iat un prag convulsivant sczut la tipul A i nalt la tipul O, n ambele cazuri. Evaluarea poten ialului toxicomanogen al tipurilor psihoneuroendocrine A i O [113] Pornind de la ideea c tipurile A i O se deosebesc n privin a mecanismelor analgeziei endogene, au fost ini iate o serie de cercetri experimentale pentru verificarea predispozi iei tipologice pentru toxicomanie. n acest sens s-au evaluat, pe animale de tip A i O, urmtorii parametrii definitorii pentru toxicomanie: dependen a psihic;

dependen a fizic (exprimat prin sindrom de abstinen ); toleran a la morfin. Pe parcursul cercetrilor tipul opioid s-a detaat semnificativ de tipul adrenergic prin: cel mai intens efect analgezic dup administrarea morfinei; cea mai mare intensitate i vitez de instalare a toleran ei la morfin; cea mai puternic dependen psihic cea mai redus dependen fizic, eviden iat prin sindromul de sevraj.

Variabilitatea efectului analgezic i hiperalgic al unor medicamente, n func ie de tipologia psihoneuroendocrin A i O [109, 117, 267] Au fost efectuate numeroase studii experimentale care au demonstrat faptul c tipologia psihoneuroendocrin este un factor de importan major pentru farmacoterapia durerii. Astfel, s-a urmrit, la tipurile A i O, efectul analgezic al urmtoarelor medicamente: analgezice antipiretice: acid acetilsalicilic, paracetamol, metamizol; analgezice morfinomimetice: petidina, pentazocina, codeina, tramadol; clomipramina (antidepresiv cu efect analgezic); s-a cercetat, de asemenea, efectul hiperalgic al nitroglicerinei. Tipul opioid s-a detaat de tipul adrenergic printr-o reactivitate marcant att la analgezicele antipiretice, ct i la cele morfinomimetice (DE50 semnificativ mai mici). Tipul O a rspuns intens la tramadol (analgezic cu mecanism mixt: monoaminergic i opioidergic) i la pentazocin (agonist al receptorilor opioizi k), n timp ce adrenergicul a dezvoltat o reactivitate crescut pentru clomipramin (agonist al receptorilor 2 presinaptici). Tipul A a prezentat o sensibilitate crescut la efectul hiperalgic al nitroglicerinei. 4.2.3. Tipul serotoninergic n literatura de specialitate recent sunt prezentate cteva studii clinice care investigheaz implica iile psihologice i comportamentale ale sistemului serotoninergic. Studiile clinice efectuate au pornit de la observa ia c unele substan e cu efect asupra sistemului serotoninergic (LSD, psilocibin, mescalin) produc distorsionare a realit ii, halucina ii, extaz religios i experien e mistice [68, 287, 365]. Neuronii serotoninergici centrali sunt concentra i n nucleul rafeu, de unde i trimit proiec iile ctre hipotalamus, sistem limbic, striat i neocortex. Eliberarea serotoninei din depozite i vehicularea ctre diferitele regiuni ale sistemului nervos este modulat prin autoreceptorii presinaptici 5HT1A. Tehnologia modern permite studierea acestor receptori in vivo, cu ajutorul tomografiei cu emisie de pozitroni (TEP) [30, 101, 356]. Subiec ii inclui n studiile men ionate au fost expui acestui tip de tomografie i s-au nregistrat valorile individuale ale densit ii receptorilor 5HT1A n diferite zone ale sistemului nervos central (nucleul rafeu, hipocamp, neocortex, sistem limbic). De asemenea, subiec ii au rspuns la Chestionarul de Temperament i Caracter (238 de ntrebri). Analiznd datele furnizate prin aceste studii clinice, s-a putut concluziona c predominen a sistemului serotoninergic (densitate mare de receptori 5HT1A) se asociaz semnificativ cu un temperament religios, o personalitate ce declar percep ii extrasenzoriale i mistice.

CERCETRI PERSONALE

CAPITOLUL 11. MATERIALE I METODEExperimentele au fost efectuate pe colectivit i de oareci albi, masculi, n greutate de 18-25 g, sua Balb/c (cosangvini). Acestea au fost transportate din Biobaza Universit ii de Medicin i Farmacie Carol Davila, Bucureti, n spa iul aferent Facult ii de Farmacie i au fost lsate n repaus timp de 24h pentru a se obinui cu noul habitat i cu regimul de hran. Hrnirea animalelor s-a efectuat la ora 8.00 a.m. i la ora 17.00 p.m., iar ap au primit din biberoane, ad libitum. Au fost gzduite n borcane de sticl cu diametrul de 16cm i nl imea de 16cm, 20 animale/borcan. 1. 1. METODE EXPERIMENTALE FARMACOLOGICE 1.1.1.Testul stimulului termic (hot-plate test) Pentru determinarea experimental a sensibilit ii dureroase a animalelor de laborator (oareci, obolani), literatura de specialitate [242, 367, 368, 405] include n categoria modelelor experimentale actuale testul stimulului termic (hot-plate test). Bazele experimentale ale acestei metode se regsesc n note bibliografice clasice de farmacologie experimental, metodologia suferind unele modificri, n timp, odat cu evolu ia aparaturii i a tehnologiei.Testul stimulului termic se utilizeaz, uzual, n laboratoarele de farmacologie experimental pentru determinarea efectului analgezic al substan elor medicamentoase, precum i pentru stabilirea mecanismelor nocicep iei. 1.1.2. Testul nnotului for at (testul disperrii, forced swimming test) Pentru investigarea experimental a depresiei, precum i a efectului antidepresiv al medicamentelor, n literatura de specialitate [127] este citat un test specific, numit testul nnotului for at, sau testul disperrii. n cadrul acestui model experimental, animalele sunt introduse ntr-un vas de sticl (fig.37) cu diametrul i nl imea de 30 cm, care con ine ap nclzit la 23C. Animalele sunt lsate, timp de 2 minute, s se acomodeze cu noul mediu, apoi se determin timpul de imobilizare timp de 4 minute. 1.1.3. Contrac ia neurogen a vasului deferent, izolat de la oarece1 Vasul deferent este frac iunea anatomic ce leag epididimul de uretr. Din punct de vedere func ional, vasul deferent posed o inerva ie adrenergic extrem de dens, realizat, n special, prin receptori de tip -adrenergic. Din aceste motive vasul deferent constituie un model farmacologic experimental extrem de util pentru investigarea medicamentelor simpatomimetice, respectiv simpatolitice [88]. Studiile se efectueaz pe baie de organ cu capacitatea de 5ml, n solu ie Krebs aerat (95% O2 i 5% CO2). Pe tot parcursul experimentului temperatura solu iei Krebs trebuie s fie 37C. Pregtirea materialului biologic Animalul este sacrificat i se izoleaz vasul deferent. Aceast opera ie trebuie efectuat cu mare aten ie, astfel nct frac iunea anatomic izolat s fie aganglionar (la nivel prostatic este localizat i Metodologia experimental prezentat la acest subpunct se utilizeaz n Laboratorul Prof. Thomas Cunnane, Departamentul de Farmacologie al Universit ii Oxford, Marea Britanie1

ganglionul hipogastric). Se ndeprteaz, de asemenea i esuturile conjunctive adiacente. Dup izolare, preparatul biologic este lsat n repaus, n solu ie Krebs, timp de 60 de minute, pentru stabilizare. Studiile de contrac ie n baia de organ ce con ine canalul deferent se introduc substan ele de testat (simpatomimetice sau simpatolitice). Simpatomimeticele determin contrac ii bifazice, specifice ale vasului, contrac ii mediate prin receptorii adrenergici. O contrac ie bifazic a oricrui vas deferent este alctuit din dou faze: faza twitch, rapid, purinergic, n care se descarc ATP (fig. 38); faza hump, lent, foarte bine reprezentat, n care se descarc noradrenalin (fig.38 ). Baia de organ este cuplat la un sistem de achizi ii de date, cu ajutorul cruia se nregistreaz amplitudinea oscila iilor fazelor descrise anterior, precum i durata acestora. Aceti parametrii reflect ac iunea substan ei medicamentoase asupra receptorilor adrenergici ai vasului deferent.

twitch (rapid, purinergic)

hump (lent, noradrenergic)

Fig.38 Componentele contrac iei bifazice a vasului deferent, mediat prin receptori de tip adrenergic 1.2. METODE BIOCHIMICE DE INVESTIGARE A DINAMICII UNOR PARAMETRII CORELA I CU SISTEMUL ADRENERGIC 1.2.1. Determinarea cantitativ a acidului -aminobutiric din esutul cerebral Determinarea concentra iei neuronale de acid aminobutiric din esutul cerebral, se bazeaz pe proprietatea acestuia de a forma cu ninhidrina, la pH alcalin i n prezen a glutamatului un compus fluorescent [358]. Metoda utilizat este spectrofluorimetria. n urma activrii la lungimea de und de 370 nm, emisia solu iilor de analizat prezint un maxim de intensitate la = 453 nm. 1.2.2. Determinarea activit ii monoaminoxidazei mitocondriale cerebrale [70, 297] Monoaminoxidaza (MAO) este o protein enzimatic localizat la nivelul membranei externe mitocondriale i face parte din clasa oxidoreductazelor (monoamin : O2 oxidoreductaza, EC:1.4.3.4). Rolul biologic al acestei enzime se datoreaz implicrii sale n catabolismul monoaminelor biologic active: adrenalin, noradrenalin, serotonin, dopamin, tiramin, triptamin, etc. Din punct de vedere biochimic, monoaminaoxidaza catalizeaz dezaminarea oxidativ a acestor compui endogeni, avnd un rol important n reglarea metabolismului catecolaminelor i a serotoninei n creier i n alte esuturi.

1.2.4. Determinarea susceptibilit ii la peroxidare lipidic a frac iei mitocondriale izolat din creierul de oarece [297] Pentru determinarea peroxizilor organici, este in mod curent utilizat o metod indirect propus de F. Bernheim i care, dup nenumrate modificri a rmas i astzi la baza determinrilor de peroxizi. Acidul tiobarbituric (TBA) reac ioneaz la fierbere cu malonil dialdehida (MDA) compus rezultat din descompunerea peroxizilor lipidici. Produsul rou rezultat are un maxim la 532 nm i are un coeficient molar de absorb ie 1,56 x 105 cm2 mmol-1. Metoda de evaluare a susceptibilit ii la peroxidare a frac iei mitocondriale izolat din creierul de obolan se bazeaz pe generarea, sub ac iunea unui sistem prooxidant a MDA i a altor produi de peroxidare lipidic evalua i prin reac ia cu TBA. Prin condensarea MDA cu acidul tiobarbituric rezult compui colora i n roz, intensitatea colora iei probelor fiind direct propor ional cu gradul de peroxidare lipidic a membranelor mitocondriale. 1.2.6. Separarea i determinarea cantitativ, simultan, a noradrenalinei, serotoninei i dopaminei din omogenatul de creier, prin cromatografie de lichide de nalt performan 2 Presupune mai multe etape: 1.Sacrificarea animalelor prin decapitare i exanghinare. esutul cerebral se izoleaz rapid pe baie de ghea i se spal de snge cu o solu ie NaCl 9. 2.Ob inerea omogenatului de creier, dup izolare i cntarire, pe baie de ghea . esutul cerebral se cntrete, se introduce ntr-un omogenizator de tip Potter, se adaug HClO4 0,1 M i se ob ine omogenatul de esut cerebral. Acesta se centrifugheaz timp de 15 minute la 15.000 rpm. Se re ine supernatantul care se injecteaz n etapele urmatoare. Metoda cromatografic utilizat a fost o metod izocratic cu faze inversate i detec ie n UV [347]. Determinrile s-au efectuat folosind un cromatograf VARIAN tip PROSTAR cu pomp cuaternar i detector UV-VIS cu ir de diode (diode array). 1.3. METODE DE PRELUCRARE STATISTIC A DATELOR EXPERIMENTALE

Pentru analiza statistic a datelor s-au utilizat programele software SPSS (Statistical Package for the Social Sciences), STATISTICA i, respectiv, Microsoft Excel. Pentru analiza irurilor de date ob inute s-au determinat urmtorii parametrii: media aritmetic a valorilor din irul de date; devia ia standard (SD); varian a (modul n care sunt mprtiate valorile din grupul de date n jurul valorii medii; probabilitatea (p). n cazul grupurilor de date cu dispersie normal s-au utilizat testele t Student i ANOVA, dup cum urmeaz: testul t Student, care permite evaluarea semnifica iei statistice prin compararea grupurilor de date dou cte dou; testul ANOVA, care permite evaluarea semnifica iei statistice prin compararea, concomitent, global a celor trei loturi de animale. Interpretarea statistic a rezultatelor analizate prin cele dou teste a fost urmtoarea: dac p litiul (Timob=44.510.4sec) (fig. 62); n cazul tipului psihoneuroendocrin normal, echilibrat, efectul antidepresiv al medicamentelor administrate variaz n ordinea imipramin (Timob=65.4519.48sec) > fluoxetin (Timob=81.1321.69sec) > litiul (Timob= 9320.82sec)(fig. 63); n cazul tipului psihoneuroendocrin opioid, efectul antidepresiv al medicamentelor administrate variaz n aceeai ordine ca n cazul tipului A, respectiv fluoxetin (Timob=59.1814.66sec) > imipramin (Timob=83.4519.90sec) > litiul (107.721.5sec) (fig. 64).

sensibilitate dureroas efect antidepresiv

sensibilitate dureroas efect antidepresiv

tipul A

tipul N

tipul O

tipul A

tipul N

tipul O

Fig.65 Corelarea sensibilit ii dureroase (exprimat ca timp de salt de pe placa fierbinte, Ts), expresie a tipului psihoneuroendocrin, cu efectul antidepresiv al imipraminei (10mg/kgc, ip, timp de 10 zile) (exprimat prin timpul de imobilizare, Timob)

Fig.66 Corelarea sensibilit ii dureroase (exprimat ca timp de salt de pe placa fierbinte, Ts), expresie a tipului psihoneuroendocrin, cu efectul antidepresiv al fluoxetinei (10mg/kgc, ip, timp de 10 zile) (exprimat prin timpul de imobilizare, Timob)

sensibilitate dureroas efect antidepresiv

tipul A

tipul N

tipul O

Fig.67 Corelarea sensibilit ii dureroase (exprimat ca timp de salt de pe placa fierbinte, Ts), expresie a tipului psihoneuroendocrin, cu efectul antidepresiv al litiului (70mg/kgc, ip, timp de 10 zile) (exprimat prin timpul de imobilizare, Timob) Analiza statistic a rezultatelor din cadrul aceleiai tipologii psihoneuroendocrine dar ntre loturile de animale tratate cu diferite substan e (de ex. lotul O tratat cu imipramin i lotul O tratat cu litiu) a oferit semnifica ie biologic n toate cazurile cu excep ia tipului adrenergic. n acest caz, efectul antidepresiv al diferitelor medicamente nu s-a diferen iat statistic dect pentru lotul A imipramin/lotul A litiu (p