PRACTICA N°3

IDENTIFICACION DE PROTEINAS Y AMINOACIDOS

1. REACCION DE BIURET

Numerar 7 tubos y agregar

2ml de las 7 soluciones a

trabajar.

Adicionar 2ml de NaOH al 10 %

Adicionar 3 gotas de CuSO4 al 1%

Se observa coloración violeta .

FUNDAMENTO :

Consiste en tratar una proteína o péptido con Cu++ en medio alcalino, produciéndose una coloración violácea por formación de un complejo de coordinación entre el Cu++ y los pares electrónicos libres de los nitrógenos de los grupos amino de la unión peptídica. Son necesarias por lo menos dos uniones peptídicas para que tenga lugar la reacción.

RESULTADOS

SOLUCIONES

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6

SOLUCIONES RESULTADOS1° Agua destilada +

2° Gelatina +++3° Caseina ++4° Albumina ++++5° MP1 Color amarillo claro6° MP2 Color celeste

2. REACCION XANTOPROTEICA

Enumerar 7 tubos de ensayo y agregar 2ml de agua, peptina, gelatina, caseína albumina, mp1, mp2.

Adicionar 1ml de ácido nítrico

FUNDAMENTO:

Esta reacción se debe a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado. Generalmente, se forma primero un precipitado blanco que cambia a amarillo al calentarlo.

El color se empieza a tornarse anaranjado cuando la solución se vuelve básica. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos, tirosina, fenilalanina y triptofano, obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalino (formación del ácido pirámico o trinitrofenol).

En esta prueba se produce la nitración del anillo bencénico presente en dichos aminoácidos.

Se lleva a calentamiento las muestras que no cambiaron de color cuando se adiciono acido nítrico

Dejar enfriar y adicionar 15gts de NH4OH, se visualiza la interfase color amarillo – naranja.

RESULTADOS

SOLUCIONES

3. REACCION DEL MILLON

Enumerar 7 tubos de ensayo y agregar 2ml de agua, , gelatina, caseína albumina, mp1, mp2.

GELATINA

CASEINA

ALBÚMINA

SOLUCIONES RESULTADOS1° Agua destilada NO REACCIONO2° Peptina -3° Gelatina +4° Caseina ++5° Albumina ++++6° MP1 NO REACCIONO7° MP2 NO REACIONO

FUNDAMENTO:

Adicionar 5 gotas del reactivo de millón

Se lleva a calentamiento.

Se visualiza la coloración roja es indicativo de reacción positiva

Reconoce residuos fenólicos, es decir aquellas proteínas que contengan tirosina. Las proteínas se precipitan por acción de los ácidos inorgánicos fuertes del reactivo, dando un precipitado blanco que se vuelve gradualmente rojo al calentar.

SOLUCIONES

1° 2° 3° 4° 5° 6° 7°

4. REACCION DE NINHIDRINA

(Identifica grupos amino)

SOLUCIONES RESULTADOS1° Agua destilada No reacciono2° Peptina -3° Gelatina Rojo4° Caseina Precipitado rojizo5° Albumina Precipitado rojizo6° MP1 Color amarillo verduzco7° MP2 No reacciono

Numerar 7 rectángulos y agregar 3 gotas de agua, gelatina, caseína, albumina, M.P 1, M.P 2

Añadir 1 gota de ninhidrina en butanol al 0.1% Colocar los papeles al horno a 110ªc por 5 minutos Si se observa unas manchas de color purpura- rosado es indicativo que la reacción es

positiva

Agua gelatina caseína albumina M.P 1 M.P 2

SOLUCIÓN RESULTADOAgua destilada No reacciono

Gelatina +Caseína No reacciono

Albumina ++M.P 1 No reaccionoM.P 2 +

CUESTIONARIO

1. LA REACCIÓN XANTOPROTEICA SE PUEDE CONSIDERAR UNA REACCIÓN GENERAL PARA TODAS LAS PROTEÍNAS? CUALQUIERA QUE SEA SU RESPUESTA FUNDAMENTE PORQUE.

No, debido a que esta reacción (xantoproteica) se realiza para identificar aminoácidos de tipo aromático o que contengan anillo aromático o bencénico, como lo son la fenilalanina, tirosina y triptófano. Esta reacción con estos aminoácidos o proteínas que los contienen, por calentamiento con ácido nítrico concentrado dan nitrocompuestos de color amarillo

En conclusión para poder reconocer aminoácido en general seria el reactivo de la ninhidrina, ya que esta interacciona con el grupo “alfa amino” de los aminoácidos, péptidos, proteínas y se identifica con la formación del complejo azul violeta (purpura), o rosado

2. EXPLIQUE PORQUE SE TIÑE DE AMARILLO LA PIEL AL CONTACTO CON HNO3.

Lo que sucede es que en la piel ocurre lo que llamamos reacción xantoproteica, que se da por la acción oxidante del ácido nítrico el cual al estar en contacto con la piel reacciona con grupos –SH de la metionina y puentes –S-S- entre cisteína manifestándose en un color amarillento , que luego desaparecerá cuando la piel mude.

3. DETALLE LA COMPOSICIÓN DEL REACTIVO DE MILLÓN

El reactivo de millón está compuesto por :Hg y HNO3

Estos se hallan en la proporción de : 1:3

Siendo diluidos en 2 volúmenes de agua a la solución resultante .

4. ESCRIBA LA REACCIÓN QUÍMICA EFECTUADA EN EL ENSAYO DE REACCIÓN DE NINHIDRINA.

5. ESCRIBA LOS NOMBRES DE OTRAS SUSTANCIAS QUE DEN POSITIVO A LA REACCION DE NINHIDRINA ADEMAS DE PROTEINAS, PEPTIDOS Y AMINOACIDOS.

Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo libre, reaccionaran con la ninhidrina. La positividad se manifiesta por la aparición de un color violáceo o amarillo.

Algunas soluciones de amonio y aminas, dan la coloración característica, aparentemente debido a una oxidación y reducción intramolecular de la ninhidrina en presencia de amoníaco. Los aminoácidos porina e hidroxiprolina, que no poseen grupo amino sino imino (-NH-), dan un color rojo que pasa rápidamente a amarillo.

6. ESCRIBA LA REACCIÓN QUÍMICA DE BIURET.

7. ESCRIBA QUE OTROS AMINOACIDOS RECONOCE EL REACTIVO DE MILLON .

El método se basa en la capacidad de la tirosina (en forma libre o en la composición de las proteínas) que por calentamiento con el reactivo de Millón de formar la sal de mercurio de nitrotirosina, de color rojo-púrpura:Esta reacción es también positiva para los compuestos fenólicos.

OH

CH2 CH COOH

NH2

HNO3

Tirosina Sal de mercurio del derivado nitrado de Tirosina (rojo purpura)

O

CH2

NO2N

CH COOH

NH2

O

OHg

+ HgNO3

CONCLUSIONES

Llegamos a la conclusión que la muestra 2 era algún tipo de proteína ya que esta genero una coloración rosada hacia purpura frente a la ninhidrina.

En la muestra 1 y en la muestra 2 resulto negativa ante la reacción xantoproteica, por lo tanto esto determinaría no es una aminoácido aromático o contiene una anillo bencénico.

Nos dimos cuenta que entre todas las soluciones usadas frente a los reactivos , la que tiene tanto sus proteínas y enlaces en mayor cantidad o en mejor afinidad ha sido la albúmina ya que esta ha reaccionado positivamente siendo la que prevalece en todas las reacciones.