19 -21 gennaio 2011 cantine ferrari -trento - newmicro-microbiologia e virologia del ... · 2012....
TRANSCRIPT
![Page 1: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/1.jpg)
1919--21 gennaio 2011 21 gennaio 2011
Cantine Ferrari Cantine Ferrari --TrentoTrento
CogliatiCogliati Elisa Elisa VianVian ElisaElisa
![Page 2: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/2.jpg)
Una struttura sanitaria pubblica o
accreditata, senza attività di lucro,
individuata dalla regione di competenza
che ha il compito di conservare e
distribuire tessuti omologhi
![Page 3: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/3.jpg)
Sorta presso lSorta presso l ’’Ospedale di Treviso Ospedale di Treviso nel 1985 nel 1985 èè stata deliberata come stata deliberata come
Banca Regionale nel 2000 Banca Regionale nel 2000
![Page 4: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/4.jpg)
![Page 5: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/5.jpg)
Lo sviluppo delle banche ha portato alla necessità di normare attraverso linee
guida nazionali ed europee gli aspetti organizzativi e procedurali volti alla sicurezza.
Coordinamenti
(legge 91/99)
Coordinamenti Coordinamenti
(legge 91/99(legge 91/99))
Conferenza Stato-Regioni
“linee guida” 23/09/2004
Conferenza StatoConferenza Stato--RegioniRegioni
““linee guidalinee guida”” 23/09/200423/09/2004
“Linee guida” 19/06/2007““Linee guidaLinee guida”” 19/06/200719/06/2007
Decreto legislativo n. 16 “qualità
e sicurezza” 20/01/2010
Decreto legislativo n. 16 Decreto legislativo n. 16 ““qualitqualitàà
e sicurezzae sicurezza”” 20/01/201020/01/2010
![Page 6: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/6.jpg)
Il processo e il trattamento è stato certificato UNI EN ISO 9001:2008 IQ-NET IT/25398
La Banca lavora in conformità alle linea guida nazio nali per i tessuti ed è stata accreditata dal Centro Nazi onale Trapianti
L’accreditamento e la certificazione contribuiscono ad accrescere la sicurezza del donatore, garantendo tramite le verifiche esterne di Enti indipendenti la trasparenza del lavoro svolto
![Page 7: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/7.jpg)
Migliorare la qualità della vita nei pazienti che necessitano di tessuti omologhi attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto
Favorire e promuovere la donazione come scelta consapevole fornendo servizi e interventi a carattere educativo e formativo
Promuovere iniziative di ricerca e innovazione
![Page 8: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/8.jpg)
![Page 9: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/9.jpg)
0
300
600
900
1200
1500
1800
2100
2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010
673
1158
1417
2081
1976
13681376
1517
![Page 10: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/10.jpg)
0
300
600
900
1200
1500
1800
2100
2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010
650540
991
124218751783
11881238
1352
133
167
175
206193
180165
Viventi MT
138
![Page 11: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/11.jpg)
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010
8581697
24313144
4024 43785017 5131
![Page 12: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/12.jpg)
Donatori Heart-beating (HB)
Donatori Non heart-beating (NHB)
Donatori viventi
![Page 13: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/13.jpg)
Microrganismi per deposizione mediante campionamento passivo dell’aria mediante
piastre (ogni fase di lavorazione)col-S Columbia 5% SB
Microrganismi per contatto mediante campionamento su piani di lavoro mediante
piastre (ogni fase di lavorazione)Piastre a contatto TSA+inattivante
![Page 14: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/14.jpg)
![Page 15: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/15.jpg)
Il processo viene monitorato microbiologicamente mediante prelievi istologici e di liquidi in ogni fase del processo
Test per la ricerca di:
- Batteri aerobi- Batteri anaerobi
![Page 16: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/16.jpg)
![Page 17: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/17.jpg)
![Page 18: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/18.jpg)
1. SIEROPOSITIVITA’ PER HIV, HCV, HBV, HTLV, Lue2. INFEZIONI O MALATTIE SISTEMICHE IN ATTO AL MOMENTO DELLA
DONAZIONE3. MALATTIE NEUROLOGICHE4. MALATTIE GENETICHE5. NEOPLASIE MALIGNE IN ATTO O PREGRESSE6. MALATTIE AUTOIMMUNI E DEL COLLAGENE7. INGESTIONE ED ESPOSIZIONE PROLUNGATA A SOSTANZE TOSSICHE E/O
METALLI PESANTI8. MALATTIE EMOPOIETICHE 9. MALATTIE E/O INFEZIONI RESPIRATORIE10. TRATTAMENTI CON..(trasfusioni, chemioterapia, terapia radiante..)11. COMPORTAMENTI SOCIALI A RISCHIO12. VACCINAZIONI (negli ultimi 12 mesi)13. ANAMNESI SOCIALE E/O PATOLOGICA14. CAUSE DI MORTE15. TEMPISTICA DI DONAZIONE
![Page 19: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/19.jpg)
AcAc anti HIV 1/2anti HIV 1/2
AcAc anti HCVanti HCV
HBsAgHBsAg
AcAc anti anti HBcHBc
AcAc anti anti HBsHBs
AcAc anti HTLV I/IIanti HTLV I/II
AcAc anti anti AgAg TREPONEMICOTREPONEMICO
AcAc anti CMV anti CMV IgGIgG
AcAc anti CMV anti CMV IgMIgM
AcAc anti TOXOPLASMA anti TOXOPLASMA IgGIgG
AcAc anti TOXOPLASMA anti TOXOPLASMA IgMIgM
HIVHIV--RNARNA
HBVHBV--DNADNA
HCVHCV--RNARNA
NAT
![Page 20: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/20.jpg)
Esami richiesti in Biologia molecolare
HIV-RNA
HBV-DNA
HCV-RNA
![Page 21: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/21.jpg)
COBAS Ampliscreen HCV Test, v. 2.0COBAS Ampliscreen HIV-1 Test, v. 1.5 COBAS AmpliscreenHBV Test
![Page 22: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/22.jpg)
E' un test qualitativo in vitro per l'identificazione diretta dell'RNA/DNA dei virus nel plasma umano proveniente da donazioni di sangue in vitro e componenti ematici, da plasma destinato alle trasfusioni o a lavorazioni ulteriori e da donatori di organi e tessuti.
E' destinato allo screening di singoli campioni di donatori di plasma umano o di pool di plasma umano comprendenti aliquote equivalenti di donazioni singole; o per lo screening dei donatori di organi a cuore battente o dei donatori cadaverici.
![Page 23: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/23.jpg)
PRINCIPI DELLA PROCEDURA
• Trattamento dei campioni.
• Trascrizione inversa dell'RNA bersaglio per generare DNA complementare (HCV e HIV).
• Amplificazione mediante PCR del cDNA/DNA bersaglio usando primer specifici al virus.
• Ibridazione dei prodotti amplificati mediante sonde oligonucleotidiche specifiche al bersaglio.
• Rilevazione dei prodotti amplificati legati alla sonda mediante determinazione colorimetrica.
![Page 24: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/24.jpg)
Trattamento campioniI campioni devono essere raccolti in provette
contenenti EDTA, CPD, CPDA-1, ACD-A e citrato di sodio al 4%. No in EPARINA che inibisce la PCR.
La procedura MultiPrep viene utilizzata per campioni in pool e singoli campioni di donatori cadaverici (multitessuto).
Una serie comprende 12 campioni ciascuna, includendo un CN MultiPrep COBAS e un CP MultiPrepCOBAS.
Estrazione manuale prevede una centrifugazione ad alta velocità del plasma (1ora) seguita da lisi del virus corpuscolato mediante il Reagente di lisi MultiPrep e da precipitazione del DNA/RNA in alcool.
![Page 25: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/25.jpg)
Trattamento dei campioni
• Il controllo interno MultiPrep del virus viene introdotto in ciascun campione assieme al reagente di lisi e funge da controllo dell'estrazione e dell'amplificazione di ciascun campione e controllo trattato.
• Aree distinte per l'estrazione, fase di pre-amplificazione (preparazione della master-mix) e fase di preparazione dei campioni e dei controlli.
• Pipettatori e forniture sono dedicate alla Banca tessuti per evitare qualsiasi rischio di contaminazione.
![Page 26: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/26.jpg)
PRINCIPI DELLA PROCEDURA
• Trascrizione inversa dell'RNA bersaglio per generare DNA complementare (HCV e HIV).
• Amplificazione mediante PCR del cDNA/DNA bersaglio usando primers specifici al virus.
• Ibridazione dei prodotti amplificati mediante sonde oligonucleotidiche specifiche al bersaglio (denaturazione e ibridazione dell'amplicon con sonda specifica biotinilata).
• Rilevazione dei prodotti amplificati legati alla sonda mediante determinazione colorimetrica (coniugato di
avidina-perossidasi, complesso colorato, la cui assorbanza è misurata a 660nm).
![Page 27: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/27.jpg)
Sensibilità del test
Procedura Multiprep
Procedura Standard
HBV - DNA 5 UI/ ml 20 UI/ ml
PROCEDURA MULTIPREP
PROCEDURA STANDARD
HBV - DNA 5 UI/ ml 20 UI/ ml
HCV - RNA 20 UI/ ml 50 UI/ ml
HIV - RNA 50 copie / ml 100 copie / ml
![Page 28: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/28.jpg)
![Page 29: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/29.jpg)
Relazione dei risultati dello strumento
![Page 30: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/30.jpg)
Interpretazione dei risultati
� Pool primario negativo: tutti i singoli campioni associati sono “negativi all'RNA/DNA del virus”.
� Pool primario positivo: si preparano dei pool secondari più piccoli contenenti i campioni dei donatori associati.
� Le combinazioni positive che diventano negative secondariamente sono di solito dovute a contaminazioni del pool principale.
![Page 31: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/31.jpg)
Interpretazione dei risultati
Interferenza endogenaLivelli elevati di:
BILIRUBINA fino a 20 mg/dl
TRIGLICERIDI fino a 3000 mg/dl
EMOGLOBINA fino a 1,0 g/dl
ALBUMINA fino a 6 g/dl
Non interferiscono con la specificità né con la sensibilità del test
![Page 32: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/32.jpg)
I nostri risultati2010
655 tests di cui: 3 POSITIVI HIV- RNA
1 POSITIVO HCV-RNA
10 POSITIVI HBV-DNA
165 da MULTITESSUTO
20 POOLS APERTI E RIPETUTI: 5 PER HIV
5 PER HCV
10 PER HBV
SEDUTE RIPETUTE PER CI INVALIDO: 8
SEDUTE RIPETUTE PER CP/CN INVALIDI: 3
CAMPIONI NON AMPLIFICABILI: 3 PER HBV-DNA
![Page 33: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/33.jpg)
Confronto attività 2009-2010
![Page 34: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/34.jpg)
Confronto attività 2009-2010
![Page 35: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/35.jpg)
GRAZIE DELL'ATTENZIONE
Anche dai componenti del settore di
biologia molecolare rimasti in laboratorio
![Page 36: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/36.jpg)
![Page 37: 19 -21 gennaio 2011 Cantine Ferrari -Trento - NEWMICRO-Microbiologia e Virologia del ... · 2012. 4. 27. · attraverso il reperimento di tessuti per il trapianto ... trasfusioni](https://reader036.vdocuments.mx/reader036/viewer/2022062607/604f156d70b8900c983a3b79/html5/thumbnails/37.jpg)
ERROR: undefined
OFFENDING COMMAND: COGLIATI-VIAN_Le
STACK:
(12)
/Title
()
/Subject
(D:20110131084537+01’00’)
/ModDate
()
/Keywords
(PDFCreator Version 0.9.5)
/Creator
(D:20110131084537+01’00’)
/CreationDate
(5317841)
/Author
-mark-