11852 cbl aav発現リーフレットp...アデノ随伴ウイルス（aav)発現ツール vol.14...

アデノ随伴ウイルス（AAV)発現ツール

Vol.14リコンビナントウイルスベクターは、遺伝子をターゲット細胞にデリバリーするパワフルなキットです。

セルバイオラボ社では、アデノ髄伴ウイルス、アデノウイルス、レンチウイルス、レトロウイルス発現をトー

タルにサポートする商品をラインアップしています。

アデノ髄伴ウイルスアデノウイルスレンチウイルスレトロウイルス (AAV) (HIV-1, FIV, SIV) (MMLV)

遺伝子発現一過性または安定性一過性一過性または安定性安定性

分裂細胞への感染 Yes Yes Yes Yes

非分裂細胞への感染 Yes Yes Yes No

ターゲット細胞ゲノムへのインテグレート Yes No Yes Yes

ターゲット細胞内の免疫応答 Very Low High Low Moderate

相対的なウイルスの力価 XXX XXXX XXX XX

相対的なトランスダクション効率 XXX XXXX XXX XX

一般的なウイルス遺伝子デリバリーのワークフロー

目的遺伝子のクローニング

Step1

ウイルス発現用プラスミド

ウイルスのパッケージング

Step2

パッケージング用プラスミドおよびパッケージング細胞

p2

タイター測定

Step3

ウイルス定量キット

p5

濃縮および精製

Step4

精製 / 濃縮キット

p6

ターゲット細胞への感染

Step5

トランスダクション試薬

p5

セルバイオラボ社の AAV ヘルパーフリー発現システムは、リコンビナント AAVウイルス粒子をヘルパーウイルスなしで作製するシステムです。感染性 AAV 粒子の作製に必要なアデノウイルス遺伝子は pHelper プラスミド（E2A、E4、VA RNA 遺伝子等）上にあり、ヒト AAV ベクターDNA と共トランスフェクションされます。E1 遺伝子は 293 宿主細胞で恒常的に発現しています。native AAV セロタイプ 1～ 6 に加えて、新規セロタイプDJ および DJ/8 を調製できます。生きたヘルパーウイルスを使用しない本システムは、安全かつ便利なデリバリーシステムです。セルバイオラボ社ではパッケージングからトランスダクションまで AAV発現に必要な試薬をトータルに取りそろえています。当社ホームページ ‘ホーム＞サポート情報＞技術情報’ にて日本語プロトコールをご参照いただけます。

各ウイルスベクターの比較

一般的なウイルス遺伝子デリバリーのワークフロー

AAV-1 AAV-2 AAV-3 AAV-4 AAV-5 AAV-6 AAV-ＤＪＡＡＶ-ＤＪ/8

2 3

ウイルスタンパク質

ターゲット細胞

アデノ随伴ウイルス (AAV) ヘルパーフリー発現システム


特　長● フレキシブル：コンプリートシステムに加えてパッケージングベクター、発現ベクターなどの単品販売あります！

● 選べるセロタイプの種類：6 種類の native AAV セロタイプとメーカー独自の新規セロタイプDJとDJ/8をご用意しています！

● レポーター遺伝子付きコントロール：各セロタイプのプリメイド AAV-GFP コントロールウイルスあります！

新規セロタイプ　AAV-DJ　　in vitroDNA シャッフルテクノロジー（下図）によって 8 種類のネイティブのセロタイプ（AAV-2、 AAV-4、AAV-5、AAV-8、AAV-9、Avian AAV、Bovine AAV、Caprine AAV）を組み合わせたハイブリッドカプシドを調製。高感染性のリコンビナント A A V が得られ、AAV-2 より高効率に様々な細胞・組織に形質導入できます。

　AAV-DJ/8　　in vivoAAV-DJ のヘパリン結合ドメインにおけるポイントミューテーションにより作製。AAV-DJ/8 システムを用いて作製したリコンビナント AAV は心臓及び脳組織に感染する能力において、AAV-8 及び AAV-9 と類似しています。

AAV-2 AAV-4 AAV-5 AAV-8 AAV-9 AvianAAV

BovineAAV

CaprineAAV

DNAシャッフリング

図 1　カプシドDNAファミリーシャッフルによる AAV-DJ の作製

参考文献；Grimm D, Lee JS, Wang L, Desai T, Akache B, Storm TA and Kay MA (2008) J Virol. 82:5887-911.

各セロタイプの in vitro インフェクション比較Cell Line AAV-1 AAV-2 AAV-3 AAV-4 AAV-5 AAV-6 AAV-8 AAV-9 AAV-DJ AAV-DJ/8Huh-7 13 100 2.5 0 0.1 10 0.7 0 500 0.2HEK293 25 100 2.5 0.1 0.1 5 0.7 0.1 500 0.3HeLa 3 100 2 0.1 6.7 1 0.2 0.1 667 0.2HepG2 3 100 16.7 0.3 1.7 5 0.3 ND 1250 0.5Hep1A 20 100 0.2 1 0.1 1 0.2 0 400 0.1911 17 100 11 0.2 0.1 17 0.1 ND 500 0CHO 100 100 14 1.4 333 50 10 1 25000 5COS 33 100 33 3.3 5 14 2 0.5 500 0.3MeWo 10 100 20 0.3 6.7 10 1 0.2 2857 1NIH3T3 10 100 2.9 2.9 0.3 10 0.3 ND 500 0.1A549 14 100 20 ND 0.5 10 0.5 0.1 1000 0.1HT1180 20 100 10 0.1 0.3 33 0.5 0.1 333 0.2Monocytes 1111 100 ND ND 125 1429 ND ND 100 NDImmature DC 2500 100 ND ND 222 2857 ND ND 200 NDMature DC 2222 100 ND ND 333 3333 ND ND 100 NDNote: ND = Not Determined


Step1



Step2


タイター測定

Step3



Step4



Step5


Altemeier, W. A. et al. (2012). Transmembrane and Extracellular Domains of Syndecan-1 Have Distinct Functions in Regulating Lung Epithelial Migration and Adhesion. J. Biol. Chem. 287: 34927-34935. ( 品番：VPK-410-DJ)

引用文献

3 4

AAVヘルパーフリーコンプリート発現システム　ベクター全部入り！ Cell Biolabs, Inc.　　メーカー略号：CBLAAV セロタイプ

品　名

Helper Free Promoterless Expression SystemHelper Free Expression SystemHelper Free Bicistronic Expression System（Puro）Helper Free Bicistronic Expression System（Neo）Helper Free Bicistronic Expression System（Hygro）Helper Free Bicistronic Expression System（GFP）Helper Free Bicistronic Expression System（Blasticidin） scAAV Helper Free Expression SystemHelper Free shRNA Expression System (Puro)**Helper Free shRNA Expression System (GFP)**

AAV-1 AAV-2 AAV-3 AAV-4 VPK-411-SER1 VPK-411-SER2 VPK-411-SER3 VPK-411-SER4 VPK-410-SER1 VPK-410-SER2 VPK-410-SER3 VPK-410-SER4 VPK-415-SER1 VPK-415-SER2 VPK-415-SER3 VPK-415-SER4 VPK-416-SER1 VPK-416-SER2 VPK-416-SER3 VPK-416-SER4 VPK-417-SER1 VPK-417-SER2 VPK-417-SER3 VPK-417-SER4 VPK-418-SER1 VPK-418-SER2 VPK-418-SER3 VPK-418-SER4 VPK-419-SER1 VPK-419-SER2 VPK-419-SER3 VPK-419-SER4 VPK-430-SER1 VPK-430-SER2 VPK-430-SER3 VPK-430-SER4 VPK-412-SER1 VPK-412-SER2 VPK-412-SER3 VPK-412-SER4 VPK-413-SER1 VPK-413-SER2 VPK-413-SER3 VPK-413-SER4

AAV セロタイプ品　名

Helper Free Promoterless Expression SystemHelper Free Expression SystemHelper Free Bicistronic Expression System（Puro）Helper Free Bicistronic Expression System（Neo） Helper Free Bicistronic Expression System（Hygro）Helper Free Bicistronic Expression System（GFP）Helper Free Bicistronic Expression System（Blasticidin）scAAV Helper Free Expression SystemHelper Free shRNA Expression System (Puro)**Helper Free shRNA Expression System (GFP)**

AAV-5 AAV-6 AAV-DJ AAV-DJ/8 VPK-411-SER5 VPK-411-SER6 VPK-411-DJ* VPK-411-DJ-8* VPK-410-SER5 VPK-410-SER6 VPK-410-DJ＊ VPK-410-DJ-8＊

VPK-415-SER5 VPK-415-SER6 VPK-415-DJ＊ VPK-415-DJ-8＊





VPK-430-SER5 VPK-430-SER6 VPK-430-DJ* VPK-430-DJ-8* VPK-412-SER5 VPK-412-SER6 VPK-412-DJ* VPK-412-DJ-8* VPK-413-SER5 VPK-413-SER6 VPK-413-DJ* VPK-413-DJ-8*

商品は全て包装 1kit、希望販売価格￥248,000、貯蔵は 4℃です。 **shRNA 発現システムは希望販売価格￥179,000 です。　　　＊の商品は、アカデミック・非営利団体のお客様のみご購入いただけます。企業のお客様でご購入希望の方におかれましては、恐れ入りますがライセンス契約の必要がございます。　　　　詳細はお問い合わせください。！

AAVヘルパーフリーパッケージングシステム　コンストラクト済み AAVベクターをお持ちの場合に！

品　名品番包装希望販売価格AAV-1 Helper Free Packaging System VPK-401 1 kit ￥195,000AAV-2 Helper Free Packaging System VPK-402 1 kit ￥195,000AAV-3 Helper Free Packaging System VPK-403 1 kit ￥195,000AAV-4 Helper Free Packaging System VPK-404 1 kit ￥195,000AAV-5 Helper Free Packaging System VPK-405 1 kit ￥195,000AAV-6 Helper Free Packaging System VPK-406 1 kit ￥195,000AAV-DJ Helper Free Packaging System VPK-400-DJ＊ 1 kit ￥195,000AAV-DJ/8 Helper Free Packaging System VPK-400-DJ-8＊ 1 kit ￥195,000

Cell Biolabs, Inc.　　メーカー略号：CBL

＊の商品は、アカデミック・非営利団体のお客様のみご購入いただけます。企業のお客様でご購入希望の方におかれましては、恐れ入りますがライセンス契約の必要がございます。　詳細はお問い合わせください。！

構成内容

コンプリート発現システムパッケージングシステム発現ベクター発現ベクター ● － ●pHelper ベクター ● ● －pRep-Cap ベクター ● ● －GFP コントロールベクター ● ● －アプリケーションリコンビナントウイルス調製

に必要なベクター全部入りコンストラクト済み AAVベクターをお持ちの場合はこちら

パッケージングシステムと合わせて

AAVヘルパーフリー発現ベクター　パッケージングシステムをお持ちの場合に！品　名品番包装希望販売価格pAAV-MCS Promoterless Expression Vector VPK-411 10 µg ¥123,000pAAV-MCS Expression Vector VPK-410 10 µg ¥123,000pAAV-IRES-Puro Expression Vector VPK-415 10 µg ¥123,000pAAV-IRES-Neo Expression Vector VPK-416 10 µg ¥123,000pAAV-IRES-Hygro Expression Vector VPK-417 10 µg ¥123,000pAAV-IRES-GFP Expression Vector VPK-418 10 µg ¥123,000pAAV-IRES-Bsd Expression Vector VPK-419 10 µg ¥123,000pscAAV-MCS Expression Vector VPK-430 10 µg ¥123,000pAAV-U6-Puro Expression Vector VPK-412 10 µg ¥89,000pAAV-U6-GFP Expression Vector VPK-413 10 µg ¥89,000

Cell Biolabs, Inc.　　メーカー略号 CBL

国内外に実績多数！

4

Cell Biolabs, Inc.　　メーカー略号：CBLプリメイドAAVコントロールウイルス品　名品番包装希望販売価格AAV1-GFP Control Virus AAV-301 50 µL(1 x 1012 GC/mL) ¥186,000AAV2 Null Control Virus AAV-300 50 µL(1 x 1012 GC/mL) ¥195,000AAV2-Cre Control Virus AAV-310 50 µL(1 x 1012 GC/mL) ¥195,000AAV2-GFP Control Virus AAV-302 50 µL(1 x 1012 GC/mL) ¥186,000AAV2-Luc Control Virus AAV-320 50 µL(1 x 1012 GC/mL) ¥195,000AAV3-GFP Control Virus AAV-303 50 µL(1 x 1012 GC/mL) ¥186,000AAV5-GFP Control Virus AAV-305 50 µL(1 x 1012 GC/mL) ¥186,000AAV6-GFP Control Virus AAV-306 50 µL(1 x 1012 GC/mL) ¥186,000

AAVヘルパーフリーコントロールベクター品　名品番包装希望販売価格pAAV-Cre Control Vector AAV-401 10 µg ¥109,000pAAV-GFP Control Vector AAV-400 10 µg ¥109,000pAAV-LacZ Control Vector AAV-402 10 µg ¥109,000pscAAV-GFP Control Vector AAV-410 10 µg ¥119,000


AAV ヘルパーフリーRep-Cap ベクター　異なるセロタイプをお試しになるときに！品　名品番包装希望販売価格pAAV-RC1 Vector VPK-421 10 µg ¥136,000pAAV-RC2 Vector VPK-422 10 µg ¥136,000pAAV-RC3 Vector VPK-423 10 µg ¥136,000pAAV-RC4 Vector VPK-424 10 µg ¥136,000pAAV-RC5 Vector VPK-425 10 µg ¥136,000pAAV-RC6 Vector VPK-426 10 µg ¥136,000pAAV-DJ Vector VPK-420-DJ* 10 µg ¥136,000pAAV-DJ/8 Vector VPK-420-DJ-8* 10 µg ¥136,000

* の商品は、アカデミック・非営利団体のお客様のみにご購入いただけます。企業のお客様でご購入希望の方におかれましては、恐れ入りますがライセンス契約の必要がございます。詳細はお問い合わせください。！



AAVパッケージングセルライン

品　名品番包装希望販売価格

293AAV Cell Line AAV-100 1vial (1 X 106 cells) ¥90,000

コンプリート発現システムに 293 細胞は含まれていません。高タイターのリコンビナント AAV を得るには、セルバイオラボ社の 293AAV Cell Line をお勧めします。本商品は 293 細胞の派生品で、表面積が広く平らな形状で培養プレートにより強く接着します。その結果、AAVを高収量で得ることができます。

目的の遺伝子をpAAVプラスミドにクローニングし、AAVにパッケージングする受託サービスも承ります。ニュージーランドにあるGeneDetect（GDC）社はAAV調製のスペシャリストです。お客様の目的遺伝子のクローニングからパッケージング・精製まで全て行います。トランスダクションするだけのパッケージングされたウイルスをお届けします。詳細は受託担当までお問い合わせください。

お問い合わせ先： TEL： 03-5632-9615　FAX：03-5632-9618 e-mail：[email protected]

rAVETM 作製受託サービス

国内外に実績多数！

5

QuickTiterTM AAV 定量キット使用目的

原　理

一般的に、AAV ウイルス粒子は DNA ドットブロットや類似の方法で定量しますが、これらの方法は時間がかかるなど難点がありました。QuickTiterTM AAV 定量キットは AAV プレップの核酸含有量を定量するキットで、わずか 2 時間で力価を定量できます。このキットは精製された AAV ならどのタイプでも測定できますが、未精製の場合、AAV-2 と AAV-DJ だけ測定できます。

特　長● わずか 2 時間でプロトコール終了

● 精製 / 未精製ウイルスにも使用可能

● 高感度未精製 AAV-2 上清：1x109 GC/mL（genome copy/mL）精製 AAV サンプル：5x1010 GC/mL

ViraDuctinTM AAV トランスダクションキット使用目的AAV を用いて効率の良い遺伝子導入をいかに行うかは、宿主細胞に依存します。感染率は S 期細胞で最も高くなりますが、S 期細胞は細胞集団としてはごくわずかです。ViraDuctinTM AAV 遺伝子導入試薬では、分裂細胞、非分裂細胞ともに AAV ベクターの導入効率を著しく増加させることができます。非分裂細胞への導入率が最も優れていますが、S 期にも顕著な導入率の上昇がみられます。

特　長● 高効率：宿主細胞への導入効率が著しく増加● 低毒性：細胞生存への顕著な毒性なし● 汎用性：分裂細胞にも非分裂細胞にも使用可能

・ViraBindTM AAV 試薬 A ・ViraBindTM AAV 試薬 B ・QuickTiterTM AAV キャプチャーマトリックス　　　・QuickTiterTM AAV 洗浄試薬・QuickTiterTM 試薬 C ・CyQuant® GR Dye ・QuickTiterTM AAV DNA スタンダード

Cell Biolabs, Inc.　　メーカー略号：CBL品　名品番包装希望販売価格

QuickTiterTM AAV Quantitation Kit VPK-145 1 kit（20 assays）￥111,000

Cell Biolabs, Inc.　　メーカー略号：CBL品　名構成内容品番包装希望販売価格ViraDuctinTM AAV Transduction Kit ・ViraDuctinTM AAV 導入試薬 A（20X） AAV-200 1 kit（10 tests ※）￥66,000 ・ViraDuctinTM AAV 導入試薬 B（100X） AAV-201 1 kit（50 tests ※）￥162,000

ーャチプャキスルイウ、3化消の酸核、2クットススルイウ、1 5、定量

RNAタンパク質 DNA AAV-2

蛍光

酸核のスルイウ質クパンタ性変

4、変性、ウイルスゲノムの放出、回復

酸核のスルイウ質クパンタ性変AAV-2

Bead

2 Day Post-Infection

7 Day Post-Infection

Control

ViraDuctinTM

2,0001,8001,6001,4001,2001,00080060040020002 Day Post-Infection 7 Day Post-Infection

ControlViraDuctinTM

ViraDuctinTM を用いた AAV-GFP の導入効率HeLa 細胞を 50,000 cells/well で 24-well プレートに播き、一晩インキュベーション。細胞を ViraDuctinTM 試薬で処理し 20 時間後に AAV-GFP を感染。

※テスト回数は35 mmの培養ディッシュを用いた場合です。培養プレートや大きなディッシュを用いた場合は、変わることがあります。詳しくはプロトコールをご覧下さい。


Step1



Step2


タイター測定

Step3



Step4



Step5



Step1



Step2


タイター測定

Step3



Step4



Step5


構成内容：

　● 希望販売価格･･･「希望販売価格」は参考であり、販売店様からの販売価格ではございません。記載の希望販売価格は２０１3年5月１日現在の希望販売価格です。予告なしに改定される場合がありますので、ご注文の際にご確認下さい。消費税は含まれておりません。　● 使用範囲･･･記載の商品は全て、「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用等としては使用しないよう、十分ご注意ください。

(11852)

5


ViraBindTM ウイルス精製＆濃縮キット

AAV の精製は、AAV 発現でよい結果を得るために重要なステップです。一般的には塩化セシウム密度差平衡勾配遠心で精製されますが、時間がかかる上、回収率や品質が悪く、ウイルス以外のタンパク質の混入が大きな問題となっています。ViraBind™ AAV 精製キットは独自のマトリックスを利用したワンステップカラムを使ってわずか 3 時間で簡単にウイルス上清から高純度のアデノ随伴ウイルス（AAV-2 とAAV-DJ）を精製できます。

前処理

溶出

濃縮

遠心濃縮チューブ

ウイルス粒子

コニカルチューブ

精製カラム

精製

ViraBind™ ViraBind™

アデノ随伴ウイルス精製キットアデノ随伴ウイルス精製キット（メガ）

精製方法カラムカラム

精製時間 3時間 3時間

精製限界／プレップ（細胞上清） 1×15 cmディッシュ 10 ×15 cmディッシュ

又は2 ×10 cmディッシュ

品名処理量品番包装希望販売価格ViraBindTM アデノ随伴ウイルス精製キット（150 mmディッシュ 1 枚あるいは VPK-140 1 kit（10 preps）￥109,000 100 mmディッシュ 2 枚）× 10ViraBindTM アデノ随伴ウイルス精製キット（メガ） 150 mmディッシュ 10 枚× 2 VPK-141 1 kit（2 preps）￥92,000 150 mmディッシュ 10 枚× 10 VPK-141-5 1 kit（10 preps）ご照会



Step1



Step2


タイター測定

Step3



Step4



Step5


特長● 迅速：わずか3時間でウイルス精製● 高純度：他のタンパク質のコンタミネーションなし● 高回収率：回収率は60%以上

構成内容・ViraBind™ AAV試薬A・ViraBind™ AAV試薬B・AAV精製マトリックス・精製カラム（品番：VPK-140には含まれません）

・精製バッファー・溶出バッファー・濃縮用遠心チューブ

11852 cbl aav発現リーフレットp...アデノ随伴ウイルス （aav)発現ツール vol.14...

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