脂质体 Liposomes

• 脂质体 liposomes 1965 年被英国 Bangham 提出

• 磷脂分散在水中可形成多层囊泡，每一层均为脂质双分子层，各层之间被水相隔开

一、概述 Introductions

脂质体的示意图

脂质体主要由磷脂和胆固醇组成 磷脂由一个亲水的头部和两个疏水的尾部组成

磷脂的结构示意图

载药脂质体的结构示意图

药物被脂质体包封后有以下特点：

1 ．靶向性和淋巴定向性

2 ．长效性

3 ．细胞亲和性与组织相容性

4 ．降低药物毒性

5 ．提高药物稳定性

脂质体在体内与细胞的作用过程

• 吸附 adsorption

• 脂交换 lipid exchange

• 内吞作用 endocytosis

• 融合 fusion

1 ．中性磷脂磷 电中性、化学惰性天然磷脂 磷脂酰胆碱 phosphatidylcholine

合成的磷脂 二棕榈酰胆碱 dipalmitoyl phosphatidyl choline DPP

C

二硬脂酰胆碱 distearoyl phosphatidyl choline DSPC

鞘磷脂 sphingomyelin

磷脂酰乙醇胺 phosphatidylethanolamine

二、制备脂质体的材料 Materials for preparation of liposomes

2 ．负电荷磷脂 负电荷磷脂又称为酸性磷脂

• 磷脂酸 phosphatidic acid, PA

• 磷脂酰甘油 phosphatidyl glycerol, PG

• 磷脂酰肌醇 phosphatidylinositol, PI

• 磷脂酰丝氨酸 phosphatidyl serine,PS

3 ．正电荷脂质

均为人工合成产品

• 硬脂酰胺 stearylamine,SA

• 胆固醇衍生物

4 ．胆固醇 cholesterol

• 自然界生物膜中的另一类重要的组分 • 中性脂质，两亲性分子，亲油性大于亲水性

胆固醇的结构

5 ．长循环膜材料

神经节苷脂 ganglioside GM1• GM1 引入了唾液酸残基增强了膜的稳定性、减少了网状内皮系统细胞对脂质体的摄取，延长了脂质体的体内循环时间

聚乙二醇衍生物 polyethylene glycol derivatives• 聚乙二醇基则增强了脂质体膜的亲水性，阻止网状内皮系统细胞对脂质体的摄取，延长了脂质体的体内循环时间

1 ．薄膜法 最早由 Bangham 报道 • 磷脂等膜材溶于适量的有机溶剂• 脂溶性药物可加在有机溶剂中，然后在减压旋转下除去溶剂，使脂质在器壁形成薄膜，加入含有水溶性药物的缓冲液，进行振摇，则可形成大多室脂质体，其粒径范围约 1-5m 。

三、制备脂质体的方法 Preparation of liposomes

2 ．逆相蒸发法 Reverse-phase evaporation

由 Szoka 提出• 膜材溶于有机溶剂，加入待包封药物的水溶液，进行短时超声，直至形成稳定的 W/O 型乳剂，减压蒸发有机溶剂，形成脂质体。

• 一般为大单层脂质体 • 包封的药物量大它适合于包封水溶性药物及大分子生物活性物质

脂质体膜制备

挤压制备小粒径脂质体

• 通过挤压使脂质体通过固定孔径的滤膜，脂质体粒径变小。该方法需要很低的压力， 689kPa 即可。

• 聚碳酸酯膜（ polycarbonate membrane ），该膜的通道是直的并且大小相同，脂质体容易通过，即使脂质体直径略大于孔径也能通过。一般将脂质体原液稀释至 12μmol/ml 后再过膜，脂质体易通过孔径。

• 脂质体加压通过孔时，其结构发生变化，根据所需脂质体的大小选择膜的孔径。

3 ．主动包封法 Remote loading method

• 从根本上改变了难以制备高包封率脂质体的局面。• 主动包封技术的应用与药物的结构密切相关，不能推广到任意结构的药物，因而受到了限制。

• 弱碱性的药物 采用 pH梯度法、硫酸铵梯度法 • 弱酸性的药物 采用醋酸钙梯度法等。

遥控装载—硫酸铵梯度法包封阿霉素隐形脂质体

根据化学平衡移动原理而设计的，空白脂质体包封阿霉素的前提是：

1. 脂质体膜可透过分子型药物；

2. 离子型化合物较少或几乎不透过脂膜；

3. 硫酸阿霉素的溶度积 << 盐酸阿霉素的溶度积。

硫酸铵梯度法包封阿霉素的步骤

1. 制备脂质材料薄膜——旋转蒸发；2. 用硫酸铵溶液使脂膜水化，形成粗空白脂质体；3. 挤压使通过聚碳酸酯微孔滤膜，较大粒径的脂质

体被“粉碎”成小粒径的脂质体，得空白脂质体；4. 通过透析法或凝胶柱过滤，除去空白脂质体囊泡外部的硫酸铵，从而使脂质体囊泡内、外部的硫酸铵浓度形成了浓度梯度差 (1000倍）；

5. 盐酸阿霉素水溶液与上述空白脂质体混合、 60℃孵育 30min 、不断振摇，即得。

(NH4)2SO4

2NH3 + 2H+ = 2NH4+ + SO4

2-

(DOX-NH2)2SO4

DOX-NH2

gel-like precipitate

2DOX-NH3.CI

2DOX-NH3++2CI-

2DOX-NH2+2HCI

2DOX-NH2

硫酸铵梯度法包封盐酸阿霉素

隐形脂质体的隐形机理

4 ．免疫脂质体制备法

抗体与脂质体结合方法有：

（ 1 ）吸附法

（ 2 ）脂质蛋白融合法

（ 3 ）交联法

1 ．形态、粒径及其分布

2 ．包封率和载药量的测定

3 ．释放度与渗漏率的测定

4 ．药物体内分布的测定

四、脂质体的表征 Characterization of liposomes

1. 脂质体的研究与应用进展

2. 简述脂质体的概念、特点与用途。

3. 简述制备脂质体的常用的材料。

4. 简述 pH梯度法制备载药脂质体的原理和方法。

思考题