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注 2 大腸菌 TOP10 の genotypeF-mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC)Φ80lacZ ∆ M15 ∆lacX74 recA1 deoR araD139 ∆(ara-leu)7697 galUgalK rpsL (StrR) endA1 nupG
注 5 大腸菌 DH5αの genotypeF-Φ80lacZ ∆ M15 ∆(lacZYA-argF) U 169 deoR recA1 endA1 hsdR17 (rK
-, mK+) supE44 λ- thi-1
gyrA96 relA1
注 1pCR-Blunt II-TOPO の遺伝子配置;別紙参照
注 3pSYNGCH の遺伝子配置;別紙参照
注 4pSC11 SBANK の遺伝子配置;別紙参照
SARS ウイルスゲノム RNA
RT-PCR スパイク蛋白質遺伝子 DNA
topoisomerase I によるpCR-Blunt II-TOPO 注 1 への挿入
大腸菌 TOP10 注 2 の形質転換
pSYNGCH 注 3 の EcoR I サイトとXho I サイトとの間への挿入
大腸菌 DH5α注 5 の形質転換
pSC11 SBANK 注 4 の Kpn I サイトと Not I サイトとの間への挿入
昆虫細胞への導入
野生型バキュロウイルスの感染
CV1 細胞への導入
野生型ワクシニアウイルスの感染
マウスへの感染
実 験 の 概 要
pCR-SARS-spike
大腸菌 DH5α注 5 の形質転換
スパイク蛋白質遺伝子 DNA スパイク蛋白質遺伝子 DNA
pSYNGCH-SARS-spike pSC11-SARS-spike
組換え体ワクシニアウイルスの作製
スパイク蛋白質特異的プライマーを用いた PCR
昆虫細胞およびカイコへの接種
SARS スパイク蛋白質の精製
マウスへの接種
組換え体バキュロウイルスの作製
組み換え体バキロウイルス 組み換え体ワクシニアウイルス
血中の抗 SARS スパイク蛋白質抗体の定量
Kpn I と Not I によるスパイク蛋白質遺伝子 DNA の切り出し
注 1PCR 断片クローニング用ベクター pCR-Blunt II-TOPO
注 3バキュロウイルス transfervector pSYNGCH
注 4ワクシニアウイルス transfervector pSC11 SBANK