Ca 2+ ATPase:”Thus, heat would be derived from the continuous synthesis and hydrolysis of ATP in the mitochondria matrix.”

de Meis, L et al., 2006. JBC

UCP: uncoupler protein. Presente em diversos eucariotos.

Cannon, B., and Nedergaard, J. (2004) Physiol. Rev.

Mecanismo de produção de calor pela UCP: “These types of suggested mechanisms… consequently to stimulation of substrate oxidation/oxygen consumption in the mitochondria (i.e., thermogenesis).”

Cannon, B., and Nedergaard, J. (2004) Physiol. Rev.

Comprovar o mecanismo de produção de calor da UCP por aumento de oxidação de substratos e consumo de oxigênio e comparar com outros ativadores do aumento de metabolismo.

Isolamento mitocondrial de BAT , tubérculos de batata e cérebro de camundongos: centrifugação diferencial em gradiente de percoll .

Consumo de oxigênio: oxigrafia de alta resolução (oroboros)

1- Mitocôndrias na presença de diferentes concentrações de ácido graxo ( ex: ác. linolênico), ativadas por diferentes substratos da CTE ( succinato, piruvato malato). (estado desacoplado)

2- Mitocôndrias na presença de 1mg/mLBSA faf ( quelante de ácidos graxos) e 2mM GDP. (estado acoplado)

Calorimetria: calorímetro do prof Leopoldo. 1- Mitocôndrias na presença de diferentes concentrações de ácido

graxo ( ex: ác. linolênico), ativadas por diferentes substratos da CTE ( succinato,piruvato malato). (estado desacoplado)

2- Mitocôndrias na presença de 1mg/mLBSA faf ( quelante de ácidos graxos) e 2mM GDP. (estado acoplado)

Comparação do calor gerado com diferentes substratos da cadeia transportadora de elétrons

Investigar o calor gerado pelo aumento do metabolismo

Investigar o calor gerado pelo aumento do metabolismo

Hexokinase mitocondrial:

da- Silva, WS et al, 2004. JBC

Camacho-Pereira et al, 2009. Plant. Phisiol

Se a UCP produz calor por aumentar a oxidação de substratos e o consumo de oxigênio, a hexokinase mitocondrial que também aumenta o consumo de oxigênio nos mesmos níveis da UCP, seria um potencial gerador de calor.

Investigar a produção de calor por atividade de hexokinase mitocondrial em mitocondrias isoladas de tubérculos de batata e cérebro de ratos.

Calorimetria: calorímetro do prof Leopoldo. 1- Mitocôndrias na presença de diferentes concentrações

de glicose (batatas) e 2-DOG (para cérebro) na presença de BSA fatty acid free e GDP.

2- Testar o número 1 com diferentes substratos da cadeia transportadora de elétrons.

Ainda não foi verificado a presença de atividade de hexokinase em mitocôndrias isoladas de BAT.

Qualquer sistema que aumente o metabolismo, principalmente o consumo de oxigênio, seria capaz

de produzir calor e participaria do processo de termogênese.