ЛЕКЦІЯ № 1¡ерологічні_реакції.pdf · Сумський державний...
TRANSCRIPT
Сумський державний університет
Медичний інститут
Кафедра мікробіології,вірусології та імунології
Тема: СЕРОЛОГІЧНІ
РЕАКЦІЇ
Лектор: к.б.н. кафедри
Івахнюк Т. В.
ЗНАЧЕННЯ ДІАГНОСТИКИ ЯК ПРОЦЕСУ
РОЗПІЗНАВАННЯ ІНФЕКЦІЙНОЇ ХВОРОБИ
є основою для раціонально та ефективного
лікування хворого;
дозволяє в більшості випадків передбачити
можливі варіанти подальшого перебігу
захворювання та його наслідків;
дозволяє вчасно провести протиепідемічні та
профілактичні заходи.
2
МЕТОДИ ДІАГНОСТИКИ ІНФЕКЦІЙНИХ
ХВОРОБ
Клінічні
анамнестичний
метод (скарги
хворого, анамнез
захворювання,
анамнезжиття та
епідеміологічний
анамнез)
3
Методи специфічної
(лабораторної) та
структурно
функціональної
(інструментальної)
діагностики
4
МЕТОДИ СПЕЦИФІЧНОЇ ДІАГНОСТИКИ
ІНФЕКЦІЙНИХ ХВОРОБ
мікроскопічний
бактеріологічний
біологічний
серологічний
алергологічний
молекулярно-
біологічний
МІКРОСКОПІЧНИЙ МЕТОД
дає змогу виявити
збудника безпосередньо у
матеріалі від хворого за
допомогою різних методів
мікроскопічного
дослідження.
5
РІФ – реакція прямої та
непрямої
імунофлюоресценції
ці реакції відно-
сяться і до експрес-
методів діагностики
РІФ – ПРЯМА РЕАКЦІЯ ІМУНОФЛУОРЕСЦЕНЦІЇ
(МЕТОД КУНСА) Компоненти реакції:
1) Матеріал від пацієнта, в
якому міститься збудник.
2) Специфічна люмінісцента
сироватка, яка містить
антитіла проти відомого
збудника оброблені
флуорохромом.
6
Принцип реакції:
Мікроорганізми оброблені
антитіла міченими флуо-
рохромом, здатні світитися під
люмінесцентним мікроскопом.
РНІФ – НЕПРЯМА РЕАКЦІЯ ІМУНОФЛУОРЕСЦЕНЦІЇ
Компоненти реакції:
1) Матеріал від пацієнта, в якому міститься збудник.
2) Специфічна сироватка, яка містить антитіла проти відомого
збудника.
3) Антиглобулінова сироватка, мічена флуорохромом.
7
Принцип реакції:
На першому етапі мікроорганізми взаємодіють із антитілами
специфічної сироватки. Далі наносять на імунний комплекс
антиглобулінову сироватку, мічену флуорохромом. Імунний
комплекс за допомогою даного конюгату світиться під
люмінісцентним мікросокпом.
8
БАКТЕРІОЛОГІЧНИЙ МЕТОД
дає змогу виявити
збудника безпосередньо у
матеріалі від хворого за
допомогою виділення
чистої культури (ЧК)
бактерій
9
з метою ідентифікації вивчають антигенні властивості
ЧК у РА (реакції аглютинації) на склі
та вивчають токсигенні властивості ЧК у РП (реакції
преципітації) у гелі
РА НА СКЛІ
Компоненти реакції:
1) Чиста культура збудника, виділена від пацієнта.
2) Аглютинуюча специфічна сироватка, яка містить антитіла
проти відомого збудника, отримана шляхом гіперімунізації
кролів.
10
11
Принцип реакції:
У РА антиген приймає
участь у вигляді
корпускулярної частки.
При змішуванні
специфічної аглюти-нуючої
сироватки та ЧК
відбувається склею-вання
АГ мікробів та АТ
сироватки і візуально це
розрізняється виявлення
«пластівців» – імунних
комплексів.
РА НА СКЛІ
12
РП У ГЕЛІ
Компоненти реакції:
1) Чиста культура збудника,
виділена від пацієнта.
2) Антитоксична сироватка, яка
містить антитіла проти екзотоксину
відомого збудника (антитоксини),
отримана шляхом гіперімунізації
коней специфічним анатоксином.
Принцип реакції:
Виділення ЧК бактерій → Смужка фільтрувального паперу
змочена антитоксичною сироваткою → Засів ЧК бактерій від
пацієнтів навколо смужки → Інкубація у термостаті → При
наявності токсигенної культури у місці взаємодії токсину з
антитоксином утворюється лінія преципітації.
БІОЛОГІЧНИЙ МЕТОД
полягає у відтворенні
інфекційної хвороби на
тваринах, вивчають
специфічні зміни у
органах, тканинах, що
спричинені дією мікроба
або токсину.
13
у біологічному методі діагностики правцю, ботулізму,
стафілококової інтоксикації та інших інфекцій може
бути використана РН (реакція нейтралізації)
14
Принцип реакції:
РН токсинів використовується
для ідентифікації бакте-ріальних
екзотоксинів за видовою або
типовою їх приналежністю.
Принцип заснований на здатності
антитоксинів зв'язувати токсин та
блокувати його.
Для постановки реакції токсин
(матеріал від пацієнта, залишки
їжі тощо) змішують з
антитоксич-ними сироватками
та вводять тваринам. При
відповідності типу сироватки та
антитоксинів загибелі тварин не
спостерігають.
РН
СЕРОЛОГІЧНИЙ (ІМУНОЛОГІЧНИЙ)
МЕТОД
метод, який дозволяє
провести діагностику
інфекційного захворю-
вання через виявлення
антитіл до антигенів в
сироватці крові пацієнта
15
Сироватка крові
пацієнта
(АТ?)
+
Діагностичний
антигенний
препарат (АГ)
АТ+АГ
РП
РРА
РНГА
ІФА
та інші
16
РРА (РЕАКЦІЯ РОЗГОРНУТОЇ АГЛЮТИНАЦІЇ)
КІЛЬКІСНИЙ МЕТОД
Компоненти реакції:
1) Сироватка крові
пацієнта (невідоме АТ).
2) Специфічний
діагностику (відомий АГ).
3) Електроліт - фізрозчин.
Принцип реакції:
Відомий АГ (діагностикум - вбитий відомий мікроорганізм)
зв'язується з АТ сироватки крові пацієнта → утворення
«пластівців» – імунних комплексів АГ+АТ
17
РРА (РЕАКЦІЯ РОЗГОРНУТОЇ АГЛЮТИНАЦІЇ)
КІЛЬКІСНИЙ МЕТОД (РЕЗУЛЬТАТ)
18
РНГА (РЕАКЦІЯ НЕПРЯМОЇ ГЕМАГЛЮТИНАЦІЇ)
КІЛЬКІСНИЙ МЕТОД
Компоненти реакції:
1) Сироватка крові пацієнта (АТ?).
2) Специфічний еритроцитарний
діагностикум (відомий АГ фіксований на
еритроциті).
3) Елетроліт - фізрозчин.
Принцип реакції:
Реакція заснована на адсорбції відомого реагенту (АГ) на
поверхні еритроциту. Утворення комплексу АГ-АТ
призводить до склеювання еритроцитів, що легко
враховувати. Таким чином, еритроцити не приймають
участь безпосередньо в утворенні комплексу АГ-АТ, але є
його індикаторами.
19
РНГА (РЕАКЦІЯ НЕПРЯМОЇ ГЕМАГЛЮТИНАЦІЇ)
Позитивна
реакція –
«парасолька»
Негативна
реакція –
«гудзик»
20
РНГА (РЕАКЦІЯ НЕПРЯМОЇ ГЕМАГЛЮТИНАЦІЇ)
21
РЗК (РЕАКЦІЯ ЗВ'ЯЗУВАННЯ КОМПЛЕМЕНТУ)
КІЛЬКІСНИЙ МЕТОД
22
РЗК (РЕАКЦІЯ ЗВ'ЯЗУВАННЯ КОМПЛЕМЕНТУ)
ПРИНЦИП РЕАКЦІЇ:
Позитивна
реакція
Негативна
реакція
РЗК (РЕАКЦІЯ ЗВ'ЯЗУВАННЯ КОМПЛЕМЕНТУ)
РЕЗУЛЬТАТ РЕАКЦІЇ
23
24
ІФА (ІМУНОФЕРМЕНТНИЙ АНАЛІЗ)
Компоненти реакції:
1) Фіксований на твердій фазі відомий антиген.
2) Сироватка крові пацієнта (АТ?).
3) Антиглобулінова сироватка+Фермент (АГС-Ф), яка містить
антитіла проти людських антитіл мічені ферментом, наприклад
пероксидаза хрону.
4) Субстрат.
5) Індикатор.
Високочутлий метод виявлення АТ на
основі реакції АТ-АГ з використанням
мічених ферментами АТ.
25
ІФА (ПОЗИТИВНИЙ РЕЗУЛЬТАТ)
ІФА (НЕГАТИВНИЙ РЕЗУЛЬТАТ)
26
РЕАКЦІЯ ФЛОКУЛЯЦІЇ, ВИКОРИСТОВУЄТЬСЯ ДЛЯ
ВИЗНАЧЕННЯ АКТИВНОСТІ ІМУННИХ
АНТИТОКСИЧНИХ СИРОВАТОК І АНАТОКСИНІВ
Для постановки реакції
флокуляції з антигеном. Після
змішування компонентів пробірку
струшують та витримують у
термостаті 2 години, після чого
залишають на 18 – 20 годин при
кімнатній температурі. При
позитивній реакції на дно
пробірки випадає преципітат.
Реакцію враховують неозброєним
оком або за допомогою лупи.
27
ЕКСПРЕС-МЕТОДИ
28
29
РЕАКЦІЯ КІЛЬЦЕПРЕЦИТАЦІЇ, ЯК ЕКСПРЕС МЕТОД
ДІАГНОСТИКИ
Компоненти реакції:
1) Матеріал від
пацієнта (АГ?).
2) Специфічна
преципітуюча сироватка,
яка містить відомі антитіла.
Принцип реакції:
У реакції кільцепреципітації приймають участь розчинні
антигени. При контакті з антитілами – преципітинами –
утворюється кільце преципітації на межі двох компонентів.
ІФА, ЯК ЕКСПРЕС-ДІАГНОСТИКА
ІНФЕКЦІЙНИХ ЗАХВОРЮВАНЬ
30
Компоненти реакції:
1) Фіксоване на твердій фазі відоме
антитіло.
2) Матеріал від пацієнта (АГ?).
3) Специфічна сироватка + Фермент,
яка містить антитіла проти АГ, що
вивчається.
4) Субстрат.
5) Індикатор.
31
Інститут овочівництва і баштанництва4 Інститут овочівництва і баштанництва Каталог сортів і гібридів
ЛЕКЦІЯ № 1›ЕКЦІЯ__1... · ЛЕКЦІЯ № 1 Сумський державний університет Медичний інститут Кафедра гігієни