: موضوع كنترل كيفي آزمايشگاه ميكروب

شناسي

کشت های محیط کیفیت کنترل و تهيه

: کشت های محیط مورد در عمومی نکات:آب خام مواد کیفیت ب!ه! بس!تگی مس!تقیم بطور کش!ت های محی!ط کیفی!ت

. که اس!ت موادی مهمتری!ن از یک!ی آ!ب دارد آنه!ا تهی!ه در اس!تفاده مورد . مورد آب برای مه!م معیار س!ه میرود بکار کش!ت های محی!ط تهی!ه درقدرت مس، یونهای وجود شام!ل كش!ت های محی!ط تهی!ه در اس!تفاده

و الکتریک!ی . pHهدای!ت مس یونهای آ!ل ایده شرای!ط در باشد م!یآب در نبای!د ه!ا میکروارگانیس!م اغل!ب برای مهارکنندگ!ی خاص!یت بدلي!ل . قدرت باشد داشته وجود کش!ت های محی!ط تهی!ه! جه!ت اس!تفاده مورد

از کمتر باید آب الکتریک!ی وهمچنین 15هدایت باشد زیمنس pHمیکرواز کمتر نبای!د ول!ی باش!د اس!یدی کم!ی اس!ت بهت!ر اس!تفاده مورد 5/5آ!ب

باشد.

: آب افزودن و کشت محيط توزين

نصب قوط!ي روي بر ک!ه کش!ت محي!ط تهي!ه دس!تورالعمل طب!قوزن دقت ب!ا را کش!ت محي!ط پودر از مناس!بي مقدار اس!ت، گرديده . کنيد. باز رطوبت و هوا کوران از دور را کش!ت محي!ط ظرف نماييدو هستند سمي مواد داراي که آنهاي!ي خصوص به پودرها اس!تنشاق از . سرعت، ب!ه را پودر کنيد اجتناب پوس!ت ب!ا آنه!ا مدت طوالن!ي تماس . درب زودتر هرچ!ه کنيد وزن غبار از اي توده ايجاد بدون و دق!ت ب!ه

. ببنديد را ظرف . وزن مقدار سپس بريزيد ظرف داخ!ل را نياز مورد آ!ب حج!م نص!ف

. تندي به دقيق!ه چن!د براي نماييد اضاف!ه آ!ن ب!ه را کش!ت محي!ط شده . محيط ذرات ت!ا بريزي!د ظرف ديواره ب!ه را آ!ب باقيمانده دهيد تکان . بسيار مرحل!ه اي!ن شوند محلول وارد ني!ز ديواره ب!ه چس!بيده کش!تآب، س!طح باالي در کش!ت محي!ط خش!ک پودر چون اس!ت، مه!م

. گردد آلودگي منبع و نشود استريل اتوکالو در است ممکن 

: کشت محيط کردن حل

و آهسته دادن تکان ب!ا معموال آگار، بدون کش!ت هاي محي!ط . بايد آگار حاوي کش!ت هاي محي!ط ام!ا شد خواهن!د ح!ل مالي!م . شوند مخلوط آب با دقيقه چند مدت به دادن حرارت از! قبلحل کردن، اتوکالو از قب!ل آگار ت!ا شون!د داده حرارت س!پس

. بسوزند. آنکه بدون بجوشانيد را کشت هاي محيط شود مقدار اين از بع!د شون!د، اتوکالو نباي!د ک!ه کشت!ي هاي محي!ط

ديگر ظ!روف ي!ا ه!ا پلي!ت داخ!ل تقس!يم براي دادن، حرارت . استريليزاسيون ب!ه کش!ت هاي محي!ط اکث!ر بود خواهن!د آماده

( دماي در مدت C °121نهاي!ي ( 15ب!ه خواهند نياز دقيق!هداشت.

تنظيم و گيري :PHاندازه

شوند تهي!ه مناس!ب بطور اگ!ر دهيدرات!ه کش!ت هاي محي!طتنظي!م ب!ه .pHنيازي استريل pHندارند محص!ول نهاي!ي

کرد، گيري اندازه بطري يا پلي!ت روي توان م!ي را شدهسنجش از بعد را آنها بايد . pHاما بعد بنابراين ريخت دور

دماي تا کش!ت محي!ط شدن خن!ک و شدن اس!تريل Cازمقدار °25 ،pH( نظ!ر مورد ح!د در ( 2/0را تنظيم ±

تنظي!م. هيدروکسيد pHنماييد از اس!تفاده ب!ا معموال( 40س!ديم " استفاده ) ب!ا ي!ا و موالر ي!ک تقريب!ا ليت!ر در گرم

کلريدري!ک اس!يد ( 5/36از " موالر ) يک تقريب!ا ليت!ر در گرم. شود مي انجام

: توزيع

حجم با مناسب ظرفي در را کشت 3تا 2محيطبه آنرا بتوانيد تا بريزيد کشت محيط حجم برابر

. کنيد مخلوط و دهيد تکان خوبي

: استريليزاسيون

با استريليزاسيون به کشت هاي محيط از بعضيمي استريل جوشاندن با و نداشته احتياجي اتوکالو

برچسب روي بر آنها ساخت دستور که شوند . است گرديده قيد کشت محيط قوطي

توسط کشت هاي محيط ساير استريليزاسيونگردد مي انجام غشايي صافي يا مرطوب حرارتمحيط قوطي چسب بر روي بر نيز موارد اين که

. است گرديده قيد کشت

)الف: مرطوب حرارت با استريليزاسيون در ليتر، ي!ک حج!م ت!ا کش!ت محي!ط اس!تريليزاسيون

مدت ب!ه دماي 15اتوکالو در و فشار ) C °121دقيقه2/1 . ) براي گيرد مي انجام س!انتيمترمربع بر کيلوگرم

استريليزاسيون چرخه بايد ليتر يک از بيشتر هاي حجم . در مشکالت اکثر چون ام!ا داد تغيي!ر مناس!ب بطور راکه ميده!د رخ وقت!ي کش!ت هاي محي!ط اس!تريليزاسيوناستريل باي!د کش!ت محي!ط ليت!ر دو از بيشت!ر مقادي!رمحيط زياد مقادي!ر ک!ه شود م!ي توص!يه لذا شود،

. نماييد تقسيم کوچکتر هاي حجم در را کشت 

اتوکالو کیفی کنترلی مداوم بطور بایستی اتوکالو فشار و دم!ا کنترل

. اندیکاتورهای از اتوکالو کنترل برای گردد انجام. TSTشیمیائ!ی اندیکاتورهای از کنند می اس!تفاده

استفاده اتوکالو کارائ!ی کنترل جه!ت ک!ه بیولوژیک!یاسپور کنن!!!!!!د Bacillusم!!!!!!ی

Stearothermophilus که برد نام توان م!ی را. باشد می دسترس قابل تجاری بصورت

: غشايي( صافي با استريليزاسيون ب

و کشت هاي محي!ط کردن اس!تريل براي غشاي!ي ص!افي از . شود مي اس!!!تفاده حرارت ب!!!ه حس!!!اس ترکيبات

يا خالء شراي!ط تح!ت غشاي!ي ص!افي بوس!يله اس!تريليزاسيون . قطر ب!ا ص!افيهاي و ه!ا غشاء از پذيرد م!ي انجام فشار افزاي!ش

. 45/0ي!ا 22/0منف!ذ بايد فيلتره!ا اي!ن نماييد اس!تفاده ميکرومت!ر . و ها غشاء مورد در شوند اس!تريل اتوکالو در اس!تفاده، از قب!لرسند، م!ي فروش ب!ه اس!تريل بنديهاي بس!ته در ک!ه ص!افيهايي . مختلف هاي قس!مت نماييد مراجع!ه س!ازنده دس!تورالعمل ب!همدت به اتوکالو در ص!افي بدون ي!ا ص!افي ب!ا را ص!افي دس!تگاه

دماي 15 در .C °121دقيقه نماييد استريل

: مصرف جهت سازي آماده

به کشت محيط دماي دهيد اجازه استريليزاسيون، از بعددر C °50حدود آسپتيک شرايط رعايت با سپس برسد،

. در را کشت محيط وقت هيچ نماييد تقسيم نهايي ظروفاز باالتر . C °50دماي به حساس هاي مکمل نکنيد تقسيم

حدود به کشت محيط دماي که اين از بعد بايد حرارت و گرماC °50 . مکمل دماي دهيد اجازه شوند اضافه آن به رسيد،

) اضافه) کشت محيط به که اين از قبل استريل ساپلمنت . شرايط رعايت با را مکمل سپس برسد اتاق دماي به شود،و کنيد مخلوط خوب نموده، اضافه کشت محيط به آسپتيک. نماييد تقسيم اند، شده استريل قبل از که نهايي ظروف در

: دیش پتری

اهمیت نی!ز محی!ط تهی!ه در اس!تفاده مورد های دی!ش پتری کیفی!تگاما. اشع!ه وی!ا اکس!اید اتیل!ن ب!ا را را ه!ا دی!ش پتری معموال دارد . با ک!ه های!ی دی!ش پتری از اس!تفاده ص!ورت در کنند م!ی اس!تریلبقاياي وجود نظر از بایس!تی باشن!د شده اس!تریل اکس!اید اتیل!نمهار خاصیت دارای اکس!اید اتیل!ن زیرا شود بررس!ی ماده ای!نبا را آ!ن توان م!ی و باش!د م!ی ه!ا میکروارگانیس!م برای کنندگ!ی . از اس!تفاده ص!ورت در گرفت اندازه کروماتوگراف!ی روش

جنس از های!ي دی!ش پتری از بایس!تی ای شیش!ه های دی!ش پتری . از هایي دی!ش پتری از اس!تفاده کرد اس!تفاده بروس!يلیکاتداخل در قلی!ا س!ازی آزاد موج!ب اس!ت ممک!ن قلیائ!ی جن!س

. گردد کشت محیط

: فیزیکی پارامترهای

،استفاده از قب!ل بای!د شده تهی!ه های کش!ت محی!ط . شوند بررسی ني!ز ظاهری و فیزیک!ی لحاظ ازحباب، وجود شامل بررس!ی قابل ظاهری معیارهاییخ خوردگ!ی، ترک محی!ط، س!طح ناص!افی حفره، . . دارد اهمیت نی!ز محی!ط ضخام!ت باشد م!ی زدگ!ی

از كمتر نباي!د پلیت!ی کش!ت های محی!ط 3ضخام!ت . باشد متر میلی

كشت هاي محيط برخي تهيه روش) ترکیبی ) ژالتین کشت محیط تهیه روش

=پیتونg5 Beef Extract = g 3 =ژالتینg 120 ب!ه را فوق در cc1000مقادی!ر و کرده اضافه مقط!ر آب

حرارت ) از شوند ح!ل کامال ت!ا دهی!د قرار جوش ماری ب!ن .) کنید پرهی!ز شعل!ه روی بر کش!ت محی!ط ای!ن دادن

مدت ب!ه اتوکالو در دمای 15س!پس و در oC121دقیقه. Lb15پون!د ) 15فشار لوله( در س!پس نمایید اس!تریل

و کرده به PHتقسیم را کشت برسانید 8/6محیط

یا قلیایی پپتونه آب کشت محیط تهیه (APWروش ترکیبی )

=پیتونg10( سدیم Nacl =)g10کلرور=آب مقطرcc 1000 س!پسpH ب!ه شرایط 6/8-9را در و 15برس!انید

فشار, و Lb 15دقیقه داده قرار اتوکالو در . نی!ز دم!ا نمایید ) oC121اس!تریل . برای است

سود از (N 1تنظیم کنید استفاده

کشت محیط تهیه (NACL5/6%روش / آگار ) براث

. / از است آگار براث اینفیوژ!ن هارت بری!ن محی!ط همان پای!ه محی!طحاوی کش!ت محی!ط ای!ن ک!ه بنابراین% 5/0آنج!ا می باش!د، % 6نم!ک

مقدار ت!ا نمایی!د اضاف!ه پای!ه محی!ط ای!ن ب!ه حاصل% 5/6نم!ک نم!کدمای. همان استریلیزاسیون شرای!ط فشار oC121شود ،Lb15 و

.15زمان می باشد دقیقه شده قید کش!ت محی!ط بس!ته ه!ر روی ک!ه س!اختی دس!تور براس!اس

بریزید مقط!ر آ!ب مشخ!ص مقدار در و نموده وزن را بالدآگار پودردر را آ!ن پودر کام!ل ذوب و دادن حرارت از درجه 121پ!س

برای و 15س!انتیگراد اتوکالو از خروج از پس نمایئ!د اتوکالو دقیق!هدمای ت!ا گوسفند 10حدود 550Cت!ا 500Cس!ردشدن خون درص!د

دیش پتری داخ!ل آرام!ی ب!ه کردن مخلوط از پ!س و نمای!د اضاف!ه . . ساختن قص!د اگ!ر شود س!رد بگذاری!د و کنید تقس!یم ازمایشگاه!ی

شکالت!ی به ChoColate Ajarآگار خون افزودن از پ!س داری!د رادمای در را آ!ن آگار آگار 80ت!ا 75بالد محیط ت!ا دهی!د قرار درج!ه

. باشید داشته شکالتی

MUELLER HINTON AGAR هینتون مولر محیطآگار

نیسریابی گون!ه جداس!ازی برای اص!ل در کش!ت محی!ط ای!ن . دیسک های ب!ا ارتباط در بیشت!ر امروزه شد فرمول!ه زا بیماریآنتی حس!اسیت الگوهای تعیی!ن برای باال توان ب!ا بیوتیک!ی آنت!ی . است س!اده بس!یار آ!ن س!اخت روش می رود بکار بیوتیک!یمقطر آ!ب در را آ!ن پودر از مشخ!ص مقدار وزن از پ!سشود حل کامال پودر ت!ا داده حرارت شعل!ه روی در و اس!تریل

اتوکالو در برای 121س!پس س!انتیگراد دقیقه 15درج!هتا شدن س!رد و اتوکالو از خروج از پ!س نمایئ!د 50اس!تریل

کنید تقس!یم دی!ش پتری ظروف در را آ!ن س!انتیگراد درج!ه. نگردد بیشتر میلیمتر چهار از کشت محیط ضخامت

MACCONKEY AGARمحیط

و است مفید انتروباکتریاس!ه کش!ت برای محی!ط ای!نغیر باکتری های ت!ا اس!ت ص!فراوی نم!ک محتویکلی تشخی!ص برای نی!ز و کن!د مهار را روده ایغیر س!المونالهای از الکتوز کننده تخمی!ر فرم هایالکتوز حاوی دیسانتری، گروه و الکتوز تخیمرکننده

خنثی ) قرمز .Neutra redیا است (

BISMUTH SULFITE AJAR بایسل های دیگ!ر و س!الموفالتایفی جداس!ازی برای مناس!ب آگار س!ولفیت بیس!موت

کشت میح!ط ظرف روی الص!اقی دس!تور مطاب!ق آ!ن س!اخت روش اس!ت روده ایپپتون ها،. وجود عل!ت ب!ه مغذی کامال محی!ط ی!ک آگار س!ولفیت بیس!موت اس!ت . تولید معرف فروز، س!!ولفات اس!!ت دکس!!تروز و گاو گوش!!ت عص!!اره

کنندگی مهار خاص!یت ک!ه اس!ت س!نگینی فل!ز بیس!موت اس!ت س!ولفیدهیدروژنکننده مهار عنوان به نی!ز گ!ری!ن بریلیان!ت رن!گ دارد را ارگانیس!م ها میکرو از بع!ض!یبیشتر و مثب!ت گرم باکتر ی های مهار باع!ث کننده ه!ا مهار ای!ن حضور اس!تاز بعضی و س!المونال گونه های اکث!ر ج!ز ب!ه روده ای منف!ی گرم ارگانیس!م های . کلونی رنگ و ظاه!ر براس!اس س!المونال گونه است ممکن می شود شیگال گونه های . است فلزی رس!وب ی!ک شده، ایجاد س!بز ی!ا س!یاه رن!گ گردد شنس!اسایی احتمال!ی ( میحط در س!ولفور ترکیبات از س!المونال توس!ط ک!ه هیدروژ!ن س!ولفید وقت!ی ک!ه . ) ها کلونی شاخص طور به می شود تولید بدهد، واکنش آهن نمک یک با شده ایجاددرخشندگی ب!ا تیره قهوه ای ی!ا س!یاه هال!ه ب!ا اس!ت ممک!ن و هس!تند س!بز ی!ا س!یاه

. باشند شده احاطه سبز فلزی

( شاخص!ی کلونی های روی( Typicظاه!ر آنها واکن!ش واست : زیر شرح به آگار سولفیت بیسموت

Salmonella typhi : سیاه خش!ک، مس!طح، کلونی هایدر قهوه ای به مای!ل س!یاه هاله های ب!ا شده احاط!ه مرمری

. دارد وجود فلزی درخشندگی معموال محیطSalmonlla typhi : هاله بدون مرطوب، سیاه کلونی هایS Paratyphi – S. Cholerasuis – S.gallinanum –

morganella morganij هاله سبزبدون کلونی Shigella spp کلونی های کند، رش!د اگ!ر ام!ا می شود، مهار

به احتیاج کش!ت محی!ط ای!ن دارد قهوه ای ب!ه مای!ل س!بز. ندارد اتوکالو

CARY AND BLAIR TRANSPORT MEDIUMمحیط

کار به بالین!ی نمونه های حم!ل و جمع آوری برای محی!ط ای!نسال. در را Cary and Blair 1964می رود جدیدی فرمول

. بود شده درست مدفوع نمونه های انتقال برای که دادن!د شرحو اکسید پتانس!یل ک!م، مغذی ماده مقدار حاوی آنه!ا محی!ط

و پائی!ن بود PHاحیاء و Caryباال بقاشیگال روی همکارانش و . بررس!ی در کردند تحقی!ق محی!ط ای!ن در نمونه 162س!المونال

برای شیگال های ارگانیس!م جداسازی 49مدفوع، قاب!ل روزبرای س!المونالها آلوده 45بودن!د وقتی س!ازی تلقی!ح پ!ی در روز

برای و داشتند وجود س!ودوموناسی و پروتئوس!ی 62کننده های. بودند جداسازی قابل کننده ها، آلوده این غیاب در روز

Gaines روی آزمایش س!لسله ی!ک همکاران!ش Cary and BlairوTransport medium رکتال یا مدفوع نمونه های جمع آوری برای

آنها دادن!د انجام بود اندمی!ک اس!هال ک!ه تایلن!د از منطقه ای در س!واببرای را موثر و کارا روش!ی کش!ت محی!ط ای!ن ک!ه کردن!د نتیجه گیری . مواد حداقل ب!ا محی!ط ای!ن می کند فراه!م مدفوع نمونه های انتقالافزایش دفاع و پاسخ بدون را ارگانیسم بقای تا شده فرموله مغذی،احیای. و اکسید پتانس!یل ت!ا می شود اضاف!ه س!دیم تایوگلیکوالت دهد

کن!د، فراه!م را تشکیل PHپائین!ی عل!ت ب!ه باکتری ه!ا نابودی باال نس!بتا . نمونه های یا مدفوع در رفت!ه فرو س!واب های می دهد کاه!ش را اس!ید ) ( قرار انتقالی ترانس!پورت محی!ط محتوی لوله های داخ!ل را دیگ!رمی. نگهداری اتاق دمای در آزمایشگاه ب!ه حم!ل ط!ی در لوله ه!ا دهیدبرای سواب های از بای!د آزمایشگاه ب!ه لوله ه!ا رس!یدن مح!ض ب!ه شون!د . از پس را بل!ر کری محی!ط کرد اس!تفاده مغذی محیط های تلقی!ح

. کرد نگهداری می توان اتاق دمای در سال یک تا سازی آماده

: شده تهیه کشت های محیط نگهداری

اجزاء نوع به بس!تگی شده تهی!ه کش!ت های محی!ط عم!ر طول . دارد آنها کردن ذخيره و نگهداری نحوه محی!ط، دهنده تشکی!ل . تابش شوند نگهداری نور از دور بای!د کش!ت های محی!ط تمام!یو باکتریوستاتیک مواد تشکی!ل موج!ب کش!ت های محی!ط ب!ه نور . محیط اغل!ب عم!ر طول گردد م!ی پراکس!یداز مانن!د باکتریس!اید

دمای در پلیت!ي کش!ت باشد 4های م!ی هفت!ه ی!ک س!انتیگراد درج!هشوند بندی بس!ته پالس!تیکی های کیس!ه داخ!ل در اگ!ر ول!ی

ت!ا نکن!د نفوذ آنه!ا داخ!ل هوا مصرف 3-4بطوریک!ه قاب!ل هفت!هبستگی. بیوتی!ک آنت!ی حاوی کش!ت های محی!ط عم!ر طول هس!تند . محیط مجموع در دارد آ!ن در موجود بیوتی!ک آنت!ی پایداری ب!ه

کرد مصرف باید هفته یک مدت در را بیوتیک آنتی حاوی های

.های محیط اینگون!ه زمان گذش!ت ب!ا دیگ!ر س!وی ازافزایش بدلی!ل داده، دس!ت از را خود رطوب!ت کش!تمی افزای!ش آنه!ا انتخاب!ی! قدرت بیوتی!ک آنت!ی غلظ!تاتاق. دمای به مص!رف از قب!ل بای!د را ه!ا پلی!ت یابد

از. بی!ش کش!ت محی!ط پلی!ت اگ!ر در 8رس!اند ساعتنمی مناس!ب مص!رف برای بمان!د باق!ی اتاق دمایمحیط. با مقایسه در اي لول!ه کشت ه!ای محیط! باشد . این اغل!ب دارند تري طوالن!ی! عم!ر پلیت!ی کش!ت های

دمای در اگ!ر کش!ت های سانتیگراد 4محی!ط درج!هشوند .3-6نگهداری باشند می مصرف قابل ماه

: استثناء اندول موارد براث، تايوگليكوالتو براث قابل SIMنيترات يكماه مدت به فقط

. هاي محيط باشند م!!ي CTAنگهداريMedium وOF Medium حاوي

به فق!ط براث مولرهينتون و كربوهيدرات.6مدت باشند مي نگهداري قابل هفته

: میکروبی کشت های محیط کیفی کنترل

کنترل میکروبی های سویه به مربوط اصطالحات( کنترل ارزیابی(: Control Strainس!ویه برای ک!ه میکروارگانیس!می

. شود می استفاده کشت محیط میکروبی عملکرد( مرج!ع تا(: Reference Strainس!ویه حداق!ل ک!ه میکروارگانیس!می

ترجیحا و ها ویژگ!ی اس!اس بر و شده شناس!ایی گون!ه و جن!س س!طح. است شده تعریف و بندی فهرست آن، منشا

( مرج!ع های آمده(: Reference Stocksذخیره بدست های کش!ت. است شده تهیه المللی بین مراکز از که مرجعی سویه پاساژ از

( کاری های کشت(: Working Stocksذخیره از ک!ه مجددی کش!ت. شود می استفاده کشت های محیط کیفیت کنترل جهت ذخیره های

 

: کنترل های سویه منبع

(.American type culture collection ) ،سوشها اینمحیط ه!ر ارزیاب!ی برای بای!د ک!ه هس!تند س!وشهایی حداق!ل . برای استفاده مورد های ارگانیس!م شوند اس!تفاده کش!ت

های سویه از توان!د م!ي کیف!ی کنترل Nationalاهدافcollection . است ممک!ن نی!ز دیگری های س!ویه باشد

شامل ک!ه رود کار ب!ه کش!ت محی!ط س!ازنده توس!ط( وحش!ی های س!ویه از ای یا( Wild strainمجموع!ه

هر مخت!ص ک!ه باش!د م!ی بیمار های نمون!ه از آمده بدس!تکار به بیشت!ر هاي آزمای!ش انجام برای و بوده آزمایشگاه

. روند می

کشت های محیط کیفیت کنترل آزمون انجام روش: میکروبی سوسپانسیون تهیه

پلیت روی کیف!ی کنترل ارگانیس!م از کش!ت ی!ک . پلیت انکوباس!یون از بع!د کنید تهی!ه 3-5بالدآگار

سوی تریپتیکی!س کم!ی مقدار در را ایزول!ه کلن!یسوسپانسیون( TSB)براث ت!ا نمایی!د ح!ل اس!تریل

پنج ی!ا چهار برای را آ!ن و شود حاص!ل میکروب!ی . با را آ!ن کدورت س!پس نمایید انکوب!ه س!اعت ( . استاندارد کنید تنظی!م فارلن!د م!ک نی!م اس!تاندارد

موج طول در فارلند م!ک جذب nm 625نی!م دارای ،( 1/0تا 08/0 باشد می ناتومتر

های کلنی از مس!تقیما توان م!ی روش ای!ن جای ب!همطابق میکروب!ی س!وسپانسیون پلي!ت، روي ایزول!ه . كه ترتي!ب بدي!ن كرد تهي!ه فارلن!د م!ك ني!م كدورت ب!ا

پلی!ت 5-3 روی ایزول!ه در 24کلن!ی را 3-5ساعتهو كرده حل اس!تریل فیزیولوژ!ی س!رم لیت!ر میل!ی . هر ب!ا نماييد تنظی!م فارلن!د م!ک نی!م ب!ا را آ!ن کدورتشود، تهیه ميكروب!ي س!وسپانسیون ای!ن ک!ه روش!ی

حاوی كدورت!ي داشته CFU/ml 108-107بای!د کلن!ی.) فارلند. ) مک نیم استاندارد با مطابق باشد

کشت ) محیط عملکردی هاي آزمایش (PERFORMANCE TESTINGبررسی

1 -( بودن مغذی ظرفیت Nutritionalآزمایmشactivity )پلیتی کشت mهاي آگار محیط بالد مانند

نس!بت ب!ه را اولی!ه نرمال 100به 1س!وسپانسیون درمقدار و نموده رقیق استریل مقطر آب یا lµ 10سالین

محیط ml 01/0ی!ا ب!ه را شده رقی!ق س!وسپانسیون . مورد های کلنی تعداد كنيد تلقی!ح آزمای!ش مورد کش!ت

( پلی!ت ه!ر در . CFU/plate )104-103انتظار باشد میمحیطهای از بعضی در باکتری زیاد رش!د از اجتناب برایسوسپانسیون ک!ه باش!د نیاز اس!ت ممک!ن انتخاب!ی کش!ت

. نماييد تهیه تر رقیق بار ده را

 2 - های محیط کنندگmی مهار ظرفیmت آزمايmش

انتخابی آگار پليتي کشت مكانكي مانند نس!بت ب!ه را اولی!ه سالین 10بmه 1س!وسپانسیون نرمال در

مقدار و نموده رقی!ق اس!تریل مقط!ر آ!ب یا lµ 10ی!اml01/0 کشت محی!ط ب!ه را شده رقی!ق س!وسپانسیون

. در انتظار مورد های کلنی تعداد کنید تلقی!ح آزمای!ش موردپلی!ت ) . CFU/plate )105-104ه!ر از اجتناب برای باشد می

انتخابی کش!ت محیطهای از بعض!ی در باکتری زیاد رش!دتر رقی!ق بار ده س!وسپانسیون ک!ه باش!د نیاز اس!ت ممک!ن

. شود تهیه 

3 -ای لوله کشت های محیط آزمایش

ب!ا بای!د لول!ه شده ml01/0ی!ا lµ 10ه!ر تهيه اولی!ه س!وسپانسیون از . ) ( گاهی شود تلقی!ح س!ازي رقي!ق بدون فارلن!د م!ک نی!م ب!ا مطاب!ق

. باشد نیاز بیشتر یا کمتر تلقیح به است ممکن جدول در که شرایط!ی تح!ت تلقی!ح از بع!د را آزمون مورد 2محی!ط

. انکوباسیون، زمان نرمال طور ب!ه نمایید انکوب!ه اس!ت، 18-24آمدهی!ا دمای 24-48س!اعت در . Cº 2±35س!اعت محيط باشد م!ی

گونه انتخاب!ی جداس!ازی برای کش!ت های محی!ط س!اير و آگار شکالتدر بای!د بیماریزا نیس!ریای در Co2% 5- 10های و شوند انکوب!ه

زماني وسپس 18-24فواصل .24-48ساعت گردند بررسی ساعت حداق!ل ب!ه عموما کشته!ا هوازی، ب!ی هاي باكتري ساعت 48برای

از غنی و هوازی بی شرایط در .Co2انکوباسیون دارند نیاز در بای!!د پلیته!!ا آگار، کمپیلوباکت!!ر مورد شرایط Cº 42در در

از غنی مدت Co2میکروآئروفیلیک .48به شوند انکوبه ساعت

 4 -آزمایشهاي براي کشت های محیmط کنترل

بیوشیمیایی این كنترل برای نشده رقی!ق میکروب!ی س!وسپانسیون از

. کنیم می استفاده محیطها ( نظر از الزم شرای!ط در را ه!ا کش!ت تمام تلقی!ح، از پ!س

Co2 حرارت درجه و بیهوازی شرای!ط ی!ا و رطوب!ت ،الزم( ) زمان مدت ط!ی از پ!س و داده قرار تا 24مناس!ب

48 . ) محیط دهیم م!ی قرار بررس!ی مورد را آنه!ا س!اعتباکتریهاي های کلنی از كاف!ي رش!د دارای مناس!ب هایمهار انتخابی محیطهای مورد در و باشن!د م!ي نظ!ر مورد

. باشد مشخص بايد نظر مورد میکروارگانیسمهای 

:) مصرف ) آماده تجاری شده ساخته های محیط گونه •کنترل ه!ر بدون بای!د محیطهای کش!ت رطوب!ت: رطوب!ت اضاف!ی بوده، همچنی!ن هی!چ نشانه ای از خش!ک شدن اطراف محی!ط کش!ت نبايد مشاهده

گردد.عاري • باید کش!!ت محیطهای بودن: س!!ترون

ازآلودگی باشند.هیچ نبای!د خوندار آگار کش!ت محیطهای رن!گ: محیطهای و باشند داشت!ه همولی!ز از ای نشان!ه کش!ت دیگ!ر نبای!د هیچگون!ه تغیی!ر رن!گ غی!ر طبیعی

داشته باشند.

کشت های محیط آلودگی بررسی) کشت ) های محیط بودن :استریل

هر در شده تهی!ه لول!ه ی!ا پلی!ت تعداد ص!ورتیکه دری!ا س!اخت Lotس!ری ، باید 100 باش!د، کمت!ر ی!ا عدد

تعداد دماي% 3-5ب!ه در را شده تهیه هاي محی!طCº 37-35 مدت . 2-5ب!ه برای نمود انکوبه روز

Lot از بي!ش تعداد ب!ا تعداد 100های به بای!د ،10 در و برداشته تص!ادفی طور ب!ه را لول!ه ی!ا پلی!ت . هیچ انکوباس!یون از بع!د نمود انکوب!ه فوق شرای!ط

. شود مشاهده نباید میکروبی رشد گونه

همه ب!ا ک!ه باش!د م!ی قبول قاب!ل زمان!ی کش!ت محی!ط ی!کجدول در که کشت محیط آزمون برای پیشنهادی های سویه

خصوصیات 2 و داشت!ه کاف!ی رش!د اس!ت، شده مشخ!ص . های محیط مورد در باشد بارز ه!ا کلن!ی مورفولوژیك!يشود، می مهار خاص های ارگانیسم از بعض!ی رشد انتخابی، . در دهد می س!ايرارگانیسم ب!ه کاف!ی رش!د اجازه اینک!ه ضم!ندر همچنانکه همولیز یا خاص رنگی واکنشهای موارد، بعضی

. 2جدول کشت مورد در مثال شود ایجاد بای!د اس!ت، آمدهبرای یا و اس!ت ضروری مناس!ب همولی!ز ایجاد بالدآگارسویه برای رنگ!ی های واکن!ش ایجاد آگار مکانک!ی محی!ط

. باشد می ضروری مشخص میکروبی های

: کیفیت تضمین معیارهای سایر

زیر نظرموارد از بای!د مص!رف آماده کش!ت محیطهای: شوند بررسی نيز

پتری ظروف شکستگی !پلیتها نا!صاف شدن پر پلیتها در کشت محیط خوردگی ترک) آگا!ر ) بالد برای همول!یز وجود زدگی یخ كشت محیط سطح در حفره یا حباب زیاد مقدار وجود

متداول- 2جدول كشت هاي محيط كيفي كنترل

بيوتيكي آنتي ديسك هاي نگهداري

دمای در بايد .14تا -8-ديسك ها شوند نگهداري سانتیگراد درجه ،پني سيلين مانن!د بتاالكتام گروه آنتی بیوتیک!ی ديس!ك هاي تمام!ي

اول، نسل و اگزاس!يلين تيكارس!يلين، كربني س!يلين، آمپي س!يلين، ... و شوند نگهداري فريزر در باي!د و س!فالوسپورين ها س!وم و دومآزمايشگاه روزانه كار اس!اس بر را آ!ن از مقداري مي توان فق!ط

. نمود نگهداري معمولی يخچال در هفته يك مدت به حداكثر مواد حاوي و محكم درپوش داراي ظروف در باي!د ديس!ك ها

. شوند نگهداري رطوبت جاذب از استفاده از قب!ل س!اعت دو ت!ا ي!ك باي!د آنتي !بيوتيكي ديس!ك هاي

. برسند اتاق حرارت درجه به تا شوند خارج فريزر يا يخچال

/ بيوتيکي آنتي ديسک کنترلي سويه رشد عدم هاله قطر کيفيت کنترل

    آزمايش استاندارد روش به باي!د را کيفي کنترل هاي diskسويهdiffusion س!ويه براي ک!ه روش!ي و مواد همان از اس!تفاده ب!ا و

آزماي!ش   شود م!ي اس!تفاده کلينيک!ي هاي نمون!ه از شده جدا هايجداول با را نتايج و

 CLSI .   رش!د عدم هال!ه قط!ر محدوده نمود بررس!ي و مقايس!هآنت!ي ديس!ک ي!ک ب!ه نس!بت کنترل!ي س!ويه ه!ر براي قبول قاب!ل

است . شده فهرست فوق جداول در بيوتيکي در خط!ا از ناش!ي رش!د عدم هال!ه قط!ر ميانگي!ن در تغيي!ر چنانچ!ه

" در تغيي!!!!ر از ناش!!!!ي احتماال ، نباش!!!!د آزماي!!!!ش انجام روش . در باشد م!ي بيوتي!ک آنت!ي آ!ن ب!ه نس!بت باکتري ذات!ي حس!اسيت

شود . تهيه کنترل سوش از تازه کشت است الزم صورت اين

  ؟ داد انجام زماني فواصل درچه بايد را کيفيت کنترل آزمايش

      روزانه _ آزمايش انجام الف  باي!د بيوتيک!ي آنت!ي ديس!ک ي!ک ب!ا کنترل!ي س!و!يه ه!ر براي

ب!ا 20 نتاي!ج و انجام حس!اسيت تعيي!ن آزماي!ش متوال!ي روزمقايس!ه فوق جداول در شده اشاره قبو!ل قاب!ل مقادي!ر

اطمينان . ضري!ب اس!اس بر از% 95گردد مورد ي!ک تنه!اكنترل! 20 محدوده از خارج توان!د م!ي شده قرائ!ت نتيج!ه

ضميم!ه ) ب!ه ( . 2باش!د ي!ک از بيشت!ر چنانچ!ه کني!د مراجع!هاقدامات ب!!!!ه نياز باش!!!!د کنترل محدوده از خارج مورد

. شود مي داده توضيح ادامه در که ، بود خواهد اصالحي

_ هفتگي آزمايش انجام ب -از مورد ي!ک تنه!ا ص!ورتيكه عدم   20در هال!ه قط!ر نتيج!ه

/ از خارج بيوتيک!ي آنت!ي ديس!ک کنترل!ي س!ويه ه!ر براي رش!دجداول در مندرج قبول قاب!!ل ( 3ضميم!!ه) A3و 3محدوده

( به دهيد تغيير هفتگي به را روزانه کيفي کنترل ، گيرد قرار( .2ضميمه کنيد مراجعه

-چني!ن ه!م و هفت!ه در يکبار را هفتگ!ي کيف!ي کنترل آزماي!شيا ) آگار ساخت سري مانند آزمايش عوامل از يکي زمانيکه. ) دهيد انجام کند، تغيير سازنده يک از شده تهيه ديسکهای

محدوده از خارج هفتگ!ي کيف!ي کنترل نتاي!ج از ي!ک ه!ر اگ!رنياز مورد اص!!!!الحي اقدامات انجام ، باش!!!!د قبول قاب!!!!ل

است .

باکتريايي سويه هاي از استفاده و نگهداري

دو از مي توان باکتريايي سويه هاي نگهداري براي. نمود استفاده روش

مدت طوالني روش مدت کوتاه روش

مدت طوالني نگهداري مي دهد را امکان اي!ن باکتريه!ا طوالني مدت نگهداري

بارشد ) هوازي از اع!م ميکروب!ي س!ويه هاي کلي!ه ک!ه ) حتي و ماهه!ا ، بيهوازي وني!ز رش!د س!خت وي!ا س!ريع . بهترين شوند نگهداري زنده ص!ورت ب!ه س!الها

شامل مدت طوالن!!!ي نگهداري روشهاي( در( Freeze dryingليوفيليزاسيون نگهداري و

) 70دماي ديپ- در ت!ر پايي!ن ي!ا س!انتي گراد درج!ه. مي باشد ( مايع نيتروژن در يا فريز

1 ( فري!ز- دي!پ در درجه- 70ت!ا- 50نگهداري: ) مايع نيتروژن ويا پايينتر يا سانتي گراد

پليت مانن!د مغذي محي!ط روي را نظ!ر مورد باکتريTSA ( Trypticase Soy Agar ) 5حاوي %

سخت ميکروارگانيس!مهاي مورد در و گوس!فند خون . را پليتها دهيد کش!ت شکالت!ه آگار محي!ط روي رش!د

مدت دماي 18-24ب!ه در درجه 35±2س!اعتشرايط تح!ت نياز ص!ورت در و CO2س!انتي گراد

. نمائيد انکوبه باکتري هر براي

بررسي را کلني ه!ا مورفولوژ!ي و بودن خال!ص انکوباس!يون، از بع!د . سپس دهيد انجام آنرا بيوشيمياي!ي تس!تهاي نياز، ص!ورت در و نموده

در غليظي س!وسپانسيون ، يافته رش!د باکتري از 50-100از ميلي ليترسرما ) از محافظت کننده محيط . Cryoprotectiveيک نمائيد ( تهيه

شرايط در باکتري س!لولهاي تخري!ب از جلوگيري براي محي!ط اي!ن . سرما از محافظت کننده محي!ط مي گيرد قرار اس!تفاده مورد انجماد

يا Skim milkمي توان!د اس!تريل دفي!برينه خرگوش ي!ا گوس!فند خون ،Tryptic Soy Broth (TSB) نهاي!ي غلظ!ت ب!ا گليس!رول -15حاوي

10. باشد% مقدار به فوق باکترياي!ي س!وسپانسيون از در mL 1- 5/0س!پس

ويال . تعداد کنيد توزيع اس!تريل کوچ!ک پالس!تيکي يا شيشه اي ويالهاي. نمائيد آماده يکسال مصرف براي را خود ذخيره

 

در گنوره نيسريا و انفلوآنزا هموفيلوس مانن!د رش!د س!خت س!ويه هايفريزر در باي!د و نمي باشن!د نگهداري قاب!ل دم!ا نگهداري- 70اي!ن درجه

شوند. از زيادتري تعداد و دارند کم!ي عم!ر دم!ا اي!ن در س!ريع بارش!د س!ويه هاي

. حيات از اطمينان براي مي شود توصيه بنابراي!ن مي روند بي!ن از آنه!ا. شوند داده کشت زير روش طبق ، ماه چند هر سويه ها

ولرم جاری آب زي!ر س!ريعا و و آورده بيرون فريزر از ويال ي!ک . شکالته ي!ا خوندار آگار محي!ط روي را نمون!ه نمائيد ذوب آنرا محتويات

) مدت) به و کرده تلقي!ح رش!د س!خت باکتريهاي مورد 18-24دردماي در شراي!ط 35±2س!اعت در نياز ص!ورت ودر انکوبه CO2درج!ه

در. کيفيت داخل!ي کنترل آزمايشهاي براي مي توان!د باکتري اي!ن نماييدتهي!ه براي ي!ا . working controlآزمايشگاه اقدام هر از قب!ل رود بکار

. استفاده مورد ويال کرد حاص!ل اطمينان ، نمون!ه بودن خال!ص از باي!د. نگردد فريز مجددا بهيچوجه و شده انداخته دور بايد شدن ذوب از بعد

: WORKING CONTROLکشتهاي کنترل براي که شده فري!ز ذخيره کش!ت از مجدد ازکش!ت عبارتس!ت

. .. مي شود استفاده و کشت محيط کيفيت ت!ا ذخيره کشت ، . 3از آن از پ!س داد انجام مي توان ه!م س!ر پش!ت پاس!اژ

براي ديگر شده فري!ز ذخيره کش!ت ي!ک از و شده انداخت!ه دور باي!د نمون!هکشتهاي ) working controlتهي!ه . بيش مکرر پاساژهاي شود استفاده

.3از ) مي دهد افزايش را سويه ها فنوتيپي تغيير احتمال ، پاساژ تهي!ه پليت working controlبراي روي ، شده فري!ز ذخيره کش!ت از ،

رشد ک!ه زمان!ي ت!ا شبانه روز ي!ک مدت ب!ه آنرا و تلقي!ح شيبدار آگار ي!ا . سريع رش!د ب!ا ارگانيس!مهاي مورد در نمائيد انکوب!ه آي!د، بدس!ت مناس!بي

در مي توان را شيبدار آگار ي!ا پلي!ت دماي 2-8اي!ن در يا س!انتيگراد درج!همدت ت!ا . 4اتاق و بودن خالص پاس!اژ، ه!ر از بع!د نمود نگهداري هفت!ه

. نمائيد بررسي را کلني ها مورفولوژي

اتاق- : دماي در معدني روغن از استفاده 1 -کش!ت در Brain Heart Infusion Agar (BHIA)محي!ط کم شي!ب ب!ا را

. ، مننگوکک ، گونوک!ک مانن!د مشکل پس!ند باکتريهاي براي نماييد تهي!ه لول!هآگار شکالت محيط اس!ت الزم ، آنفلوانزا هموفيلوس و پنوموني!ه اس!ترپتوکک

افزودن ب!ا و% 5را اتوکالو از خروج از پس فوق محي!ط ب!ه گوس!فند خوندمای ب!ه بن ماري 50رس!يدن در دادن قرار و س!انتی گراد درجه 80درج!ه

مدت به .15سانتي گراد نمود تهي!ه دقيقه2 ( ) ( خش!ک- حرارت در را ماي!ع پارافي!ن ي!ا معدن!ي درجه 170روغ!ن

. نمائيد ( استريل يکساعت مدت به سانتي گراد3. دهيد- کشت محيط روي را نظر مورد ميکروب4 -مقدار به را اس!تريل روغ!ن ، کاف!ي کش!ت آوردن بدس!ت از روي cc 1بع!د

. بريزيد محيط سطح5 ) ( روغن- زي!ر آگار س!طح از نمون!ه ، مجدد کش!ت ب!ه نياز ص!ورت در

. مي شود برداشته6 -از .6-12بعد نماييد کشت تجديد ماه

اتاق- : دماي در نگهداري و عمقي کشت

مانند نيس!تند مشکل پس!ند ک!ه باکتريهاي!ي براي فق!ط روش اي!ن. مي رود بکار انتروباکترياسه وخانواده استافيلوکک

1 -مانن!د کربوهيدرات بدون آگار کش!ت محي!ط باعمق TSAي!ک را. نماييد تهيه لوله در زياد

2. نماييد- تلقيح محيط اين در در عمقي کشت بصورت را باکتري3 -را محيط اتو 24اين در .35ساعت نمائيد انکوبه درجه4. ببنديد- پنبه چوب يا درپيچ با را لوله در5 -کامال که گونه اي ب!ه ببري!د فرو ماي!ع پارافي!ن در را پيچ دار در لول!ه

. بپوشاند را لوله در6. نمائيد- نگهداري اتاق حرارت در را کشتها7. نمائيد- تجديد را موردنظر سوش هرساله 

حساسیت :تست

توسط ارگانیس!م اهمی!ت و نمون!ه رش!د ب!ه توج!ه ب!ا حس!اسیت تس!تکربی بایر دیفیوژ!ن دیس!ک اس!تاندارد روش ی!ا فارلن!د م!ک نیم!ه روش

. می شود انجام -مدت طوالني نگهداري و طوالني روش هاي از مي توان باكتري س!ويه هاي نگهداري براي

. نمود استفاده مدت كوتاه ليوفيليزاسيون شام!ل مدت طوالن!ي نگهداري روش هاي بهتري!ن

(Freeze drying )دماي در نگهداري يا- 70و س!انتيگراد درج!ه. ) مي باشد ) مايع نيتروژن در يا ديپ فريز در پايين تر

فريزر ب!ه دس!ترسي عدم ص!ورت با- 70در س!ويه هاي مي توان درج!هفريزر در را سريع .20رشد نمود- نگهداري نيز درجه

: است ضروري زير نكات به توجه شرايط اين در نيسريا و آنفلوآنزا هموفيلوس مانن!د رش!د س!خت س!ويه هاي

فريزر در بايد و نمي باشن!د نگهداري قاب!ل دم!ا اي!ن در گنوره70. شوند- نگهداري درجه

می باشد اتاق دماي در معدن!ي روغ!ن از اس!تفاده دیگ!ر روش ) حرارت ) در را مايع پارافين يا معدني روغ!ن روش این در که

( 170خش!ك ) استريل س!اعت ي!ك مدت ب!ه س!انتيگراد در!ج!هكشت محي!ط روي را نظ!ر مورد ميكروب س!پس و می نماین!درا استريل روغ!ن كاف!ي، كش!ت آوردن بدس!ت از بع!د و داده

مقدار می ریزند cc 1به محيط سطح روي

فارلند مك نيم استاندارد كدورت تهيه

:هدف تعيين آزماي!ش براي تلقي!ح غلظ!ت کردن اس!تاندارد جه!ت

باريم س!ولفات اس!تاندارد از باي!د ميكروب!ي، حس!اسيت(BaSo4 )استفاده فارلن!د م!ک ني!م اس!تاندارد ب!ا برابر ،

شود.  2: الزم- ابزار و مواد بالن مزور، اس!يدسولفوريک، دهيدرات!ه، باري!م کلرور

استريل دار پيچ در آزمايش لوله ژوژه،

: کار- انجام تهيه روش زي!ر روش ب!ه باري!م س!ولفات فارلن!د م!ک ني!م اس!تانداردشود مي

1)ml 5/0( باريم کلرور /( BaCl2از 048/0 )2mol l H2 . /O W VBaCl2 ب!ه )175/1% س!ولفوريک ml5/ 99را کنيد mol/l 18/0 (V/V 1%)اس!يد اضاف!ه

. آوريد بدست سوسپانسيون مداوم زدن هم با و2 )اسپکترو در جذب گ!يري اندازه از اس!تفاده ب!ا اس!تاندارد کدورت ص!حيح چگال!ي

نوري مس!یر طول ب!ا . cm1فتومت!ر در جذب شود مشخ!ص ،nm625 بين باي!د.13/0تا 08/0 باشد

3 )مقدار به بايد باريم س!ولفات هم ml6-4س!وسپانسيون دار پي!چ در هاي لول!ه در. شود ريخته باکتريايي سوسپانسيون هاي لوله با اندازه

4 )نگهداري تاريکي در و اتاق دماي در و شون!د بس!ته محک!م باي!د ه!ا لول!ه اي!ن دربگردند.

5 ( با( ترجيح!ا شدت ب!ه باي!د اس!تفاده بار ه!ر از قب!ل باري!م س!ولفات اس!تاندارد . ) صورت در ايجادگردد يکنواخت!ي کدورت ت!ا شود، همزده مکانيک!ی ورتک!س

. گردد تهيه اي تازه استاندارد بايد بزرگ، ذرات مشاهده6 )اندازه آن جذب يا شود جايگزين ماهانه صورت به بايد باريم سولفات استاندارد

. گردد گيري

شناسی میکروب لوپ کالیبراسیون و کیفی کنترل

لوپ شناس!ی میکروب بخ!ش در اس!تفاده مورد وس!ایل بی!ن ازارزش و بوده اص!لی و مه!م ابزارهای جمل!ه از شناس!ی میکروبس!!!رولوژی و بیوشیم!!!ی آزمایشگاه در پ!!!ت پ!!!ی همانن!!!د آ!!!نلوپ . توس!ط شده برداش!ت مقدار از اگ!ر ک!ه معن!ی بدین اس!تتاثی!ر آزمای!ش نتای!ج گزارش در نیای!د عم!ل ب!ه دقی!ق محاس!بهاس!تاندارد . روش وجود عدم س!بب ب!ه لذا داش!ت خواه!د زیادیس!عی مقال!ه این در آ!ن اهمی!ت به نظر و لوپ کالیبراس!یون جه!تکالیبراس!یون برای عمل!ی و مناس!ب کارهای راه ک!ه اس!ت شدهدو . شده انجام بررس!!ی در گردد ارائ!!ه شناس!!ی میکروب لوپروش و اس!!پکتروفتومتری روش توس!!ط حج!!م محاس!!به روش

اند . گرفته قرار ارزیابی مورد ترازو از استفاده

مورد لوپ نوع دو توس!!!ط شده برداش!!!ت حج!!!م اینج!!!ا دربوده موجود بازار در تجاری های لوپ عنوان تح!ت ک!ه مص!رف

لوپ عنوان ب!!ه لوپ 0.01و مورد 0.001و میشون!!د اس!!تفادهاز برخ!!ی اینک!!ه ب!!ه توج!!ه ب!!ا نی!!ز و گرف!!ت قرار بررس!!یک!ه را س!از دس!ت های لوپ پزشک!ی تشخی!ص های آزمایشگاهم!ی تهی!ه لوپ فلزی دس!ته دور ب!ه س!یم پیچیدن از اس!تفاده ب!ادو ب!ه نی!ز ه!ا لوپ نوع ای!ن دهن!د م!ی قرار اس!تفاده مورد شون!دگرفتن!د . قرار ارزیاب!ی مورد توزی!ن و اس!پکتروفتومتری روشص!!ورت ب!!ه ه!!ا لوپ توس!!ط برداشت!!ی حج!!م مقدار همچنی!!ن

گرفت . قرار بررسی مورد ریاضی طریق از و تخمینی

: ) رنگ!ی ماده! ی!ک! از روش ای!ن! در اس!پکتروفتومتری روش ال!فم!ی اس!تفاده اس!ت خاص موج طول در نوری جذب دارای ک!هآزمای!!ش . ای!!ن برای بل!!و اوان!!س رنگ!!ی ماده از معموال گرددمزبور ماده! بودن گران! و کمبود ب!ه توج!ه ب!ا ام!ا میشود اس!تفادهبوده ص!رفه ب!ه اقتص!ادی نظ!ر از ک!ه بل!و متیل!ن! از بررس!ی! ای!ن! در

شد . استفاده است موجود ها آزمایشگاه اکثر در و : بود زیر موارد شامل ها معرف و مصرفی! مواد – !طبی الکل بلو متیلن لوپ% ) ( – – 96پودر مقطر آب اتانول

آزمای!!ش – – 0.001و 0.01های لول!!ه س!!از دس!!ت های لوپ وسمپلر – پت اسپکتروفتومتر – 20پی! الندا

از 0.1 – 0.2ابتدا ک!!ه حالل!!ی در را بل!!و متیل!!ن پودر از گرمالک!ل و مقط!ر آ!ب کردن نس!بت% 96مخلوط 50ب!ه 50ب!ه

بل!و . متیل!ن کام!ل شدن ح!ل از پ!س کنی!م م!ی ح!ل شده تهی!همزبور حالل اول 8در لول!ه در کرده انتخاب آزمای!ش 2لول!ه

ه!ا لول!ه بقی!ه در و لیت!ر س!اخته 1میل!ی حالل از لیت!ر میل!یمقدار . س!!پس ریزی!!!م م!!!ی را از 0.02شده لیت!!!ر میل!!ی

ب!!ه شده کالی!!بره س!!مپلر کم!!ک ب!!ه را بل!!و متیل!!ن محلولکردن مخلوط از پ!س و کرده اضاف!ه از 1محلول لیت!ر میل!ی

عم!ل ای!ن و دهی!م م!ی انتقال دوم لول!ه ب!ه را مزبور محلولپس ) (. س!ریالی های رق!ت گیری!م م!ی پ!ی هشت!م لول!ه ت!ا رارا ه!ا لول!ه از ی!ک ه!ر نوری جذب مزبور های رق!ت تهی!ه از

موج طول کنیم .663در می ثبت و کرده قرائت نانومتر

تهی!ه برای لگاریتم!ی کاغ!ذ از ه!ا لول!ه رق!ت تص!اعدی کاه!ش ب!ه توج!ه ب!اکالیبره . برای منحنی ترسیم از پس میشود استفاده استاندارد منحنی

لوپ آنه!ا 10-15کردن از ی!ک ه!ر در و برداشت!ه از 1لول!ه لیت!ر میل!یرنگ!ی محلول از لوپ کم!ک ب!ه و ریزی!م م!ی بودی!م کرده تهی!ه ک!ه حالل!ینوری) ( . جذب خواندن از پ!س کنی!م م!ی وارد ه!ا لول!ه در بل!و متیل!ن

موج طول در نوری 663آنه!ا جذب میانگی!ن آوردن دس!ت ب!ه و نانومت!رب!ه لوپ توس!ط شده برداشت!ه حج!م مقدار منحن!ی روی بر آ!ن انتقال و

آید . می دست به راحتی اساس بر کلنی مقدار ک!ه آنج!ا CFU/ml ( colong forming unitاز

اگ!!ر ( گردد م!!ی ب!!ا 1گزارش برابر ک!!ه را لیت!!ر م!!ی 1000میل!!ی النداب!ه مجهول لوپ ضری!ب کنی!م تقس!یم آمده دس!ت ب!ه حج!م بر باش!د

. آمد خواهد دست

: ) ب!!ا حس!!اس ترازوی روش ای!!ن در توزی!!ن روش بو 0.001دق!ت وزن ک!ه آنج!ا از و اس!ت نیاز مورد گرم

ب!ه توان م!ی هس!تند مس!اوی خال!ص مقط!ر آ!ب حج!می!ک روی بر و کرد برداش!ت مقط!ر آ!ب از لوپ کم!کترازو توس!ط توزی!ن ب!ا و داد قرار بیوگرام آنت!ی دیس!کروش . ای!ن در کرد محاس!به را برداشت!ی حج!م مقدارس!!پس شود م!!ی توزی!!ن بیوگرام آنت!!ی دیس!!ک ابتداتوس!ط مقط!ر آ!ب برداش!ت اث!ر بر وزن افزای!ش مقدار

را . عم!ل ای!ن اگ!ر گردد م!ی محاس!به بار 10- 15لوپحج!م کنی!م ثب!ت را وزن افزای!ش میانگی!ن و کرده تکرار

. آمد خواهد دست به لوپ توسط برداشتی

: ) س!یم قط!ر اگ!ر روش ای!ن در ریاض!ی محاس!به روش جاندازه میکرومت!ر توس!ط را لوپ س!اخت در اس!تفاده موردکولی!س توس!ط را لول!ه حلق!ه داخل!ی قط!ر و کرده گیریحج!!م محاس!!به طری!!ق از برداشت!!ی حج!!م کنی!!م محاس!!بهمقدار . محاس!به برای روش ای!ن آی!د م!ی دس!ت ب!ه اس!توانهحج!!م زیرا نیس!!ت دقی!!ق چندان لوپ توس!!ط برداشت!!یاس!تاندارد های روش ب!ا مقایس!ه در لوپ توس!ط برداشت!یک!!ه آنج!!ا از عم!!ل در و ده!!د م!!ی نشان را بیشتری حج!!ماز کمتری مقدار شود م!!ی باع!!ث باف!!ت س!!طحی کش!!شنهای!!ی برداشت!!ی میزان گیرد قرار لوپ مرک!!ز در محلول

بود . خواهد کمتر

: بررس!ی از حاص!ل نتای!ج مقایس!ه بررس!ی 3نتیج!هشده برداش!ت حج!م ک!ه ده!د م!ی نشان فوق روشعرض!ه تجاری لوپ عنوان ب!ه ک!ه های!ی لوپ توس!طتجاری لوپ ب!ا مثال برای نیس!ت اس!تاندارد میشون!د

لوپ 0.001 برداشت!!ی و 0.6مقدار باش!!د م!!ی الندالوپ مورد برداشت!!!!!!!!!!ی 0.01در الندا 2.4مقدار

لوپ . ضری!!!ب نهای!!!ت در ب!!!ا 0.001اس!!!ت برابرلوپ 1666.66 ب!!!!!!!!!ا 0.01و لوپ 416.66برابر و

معادل تقریب!ا س!از مقادی!ر 338دس!ت ب!ا ک!ه اس!تدارند تفاوت شده ادعا

میشود : پیشنهاد زیر موارد مزبور های بررسی به توجه با

-عنوان تح!ت ک!ه های!ی ب!ه 0.001و 0.01لوپ تجاری ص!ورت ب!هبای!!د م!!ی آزمایشگاه ه!!ر و نبوده اس!!تاندارد رس!!ند م!!ی فروشاقدام مص!رفی لوپ دقی!ق ضری!ب تععی!ن و کالیبراس!یون ب!ه نس!بت

کند.2 -در کلن!ی شمارش مص!رفی لوپ کالیبراس!یون عدم ص!ورت در

( . از کمت!ر شود گزارش تخمین!ی ص!ورت ب!ه ادرار ی!ا 1000کش!تاز 10000-1000 بیشتر ( 10000یا

3 -آزمایشگاه اکث!ر نبودن مجه!ز عل!ت ب!ه لوپ کالیبراس!یون برایشود . می پیشنهاد اسپکتروفتومتری روش حساس ترازوی به ها

4 -ی!ک و پالس!تیکی ص!ورت ب!ه ه!ا لوپ ت!ا گردد س!عی المقدور حت!یشود . تهیه مصرف بار

انكوباتور كه اس!ت شده اي بندي عاي!ق محفظ!ه انكوباتور

براي را محيط و کرده كنترل را رطوب!ت و دم!ا . برخی می س!ازد فراه!م ميكروارگانيس!م ها رش!داز مطلوب ميزان نگهداري براي انكوباتورها از

كه Co2دی اکس!!یدکربن ميكروب هاي!!ي برايب!ه رش!د دارند )CO2برای ( Capnophilicنیاز

. هستند دسترس در-

بدون :Co2انكوباتور سيني ها روي مناس!ب بطور بای!د نمونه ه!ا انکوباتور ای!ن در

. قرارگیرد قفسه ها يا ،انكوباتور كف در آ!ب مخزن ي!ك دادن قرار ب!ا مي توان

. کرد حفظ را نیاز مورد رطوبت -انكوباتورCo2:دار از نیاز مورد کربن دی اکس!ید تأمی!ن برای انکوباتور درای!ن

گاز . CO2کپسول می شود استفاده گاز كپس!ول اتمام ص!ورت مجدد Co2در شارژ زمان تا ،

نيازمند نمونه هاي انكوباس!يون جه!ت جار Co2مي توان ازمنبع عنوان ب!ه شم!ع س!وزاندن از ک!ه جار کندل ی!ا بیهوازی

CO2 کرد استفاده جايگزين بصورت می شود .استفاده

: انکوباتور- از -هم!ه انكوباتورها باي!د بطور ماهان!ه با محلول صابون ماليم مراقبتتميز شوند.

ب!ه منظور رعاي!ت موارد ايمن!ي، باي!د به Co2-كپس!ول هاي صورت ايستاده با زنجير سنگين به ديوار محكم شوند.

نمي شود، سوپاپ ها و اس!تفاده از س!يلندرها ك!ه -زمان!ي بس!ته شوند. سيلندرهاي محك!م ب!ه طور باي!د درپوش ه!ا با خال!ي را روي حم!ل كننده س!يلندر گاز ب!ه طور محك!م دماي در را گاز هرگ!ز سيلندرهاي كنيد. نگهداري زنجي!ر

از ی!ا 52باالت!ر س!انتیگراد درج!ه فارنهایت 125 درج!ه نگهداري نكنيد. جه!ت جلوگیری از نش!ت، سيلندرها را در

وضعيت افقي قرار ندهيد. انکوباتور، يك كشت از نيسريا CO2-برای کنترل وضعیت

گونوره در انكوباتور قرار دهي!د، ه!ر روز آ!ن را پاساژ داده نياز Co2و رشدش را بررس!ي نماييد. اي!ن ارگانيس!م به

كامل دارد.

اتوكالو

استريليزاسيون براي وس!يله بهترين كالو اتو چ!ه اگ!رسبب گرماي!ي، مرحل!ه شدن طوالن!ي ول!ي اس!ت،كشت محيط هاي در مغذي مواد كيفي!ت كاه!شمي شود فلزي و معدني مواد قن!د، محتوي كمپلك!سمي كند، وارد زيان كش!ت محيط هاي ب!ه نتيج!ه در وزمان از بايد اس!تريليزاسيون چرخه !ي در بنابراي!نآنكه بر عالوه تا كني!م اس!تفاده باالتر دماي و كوتاهتربراي شود، وارد كشت محي!ط ب!ه كمتري آس!يب

. باشد كشنده تر ارگانيسم

استريليزاسيون- انواع

استريليزاسيونو كشت محيط هاي

محلول ها مواد استريليزاسيون

آلوده مصرفي مواد استريليزاسيون

شده بندي بسته خشك

: کاربردی نکات

آن از بيشت!ر ک!ه ش!ل پيچ! دار در ب!ا ارل!ن و لول!ه از اس!ت بهت!ر . کنید استفاده است! پرنشده

از که می! شود س!فارش مناس!ب! جریان! برقراری جه!تاش!يا فاص!له باي!د و بپرهيزي!د يكديگ!ر روي بر اش!ي!ا دادن! قرار

حداقل اتوكالو ديواره هاي از و يكديگر .5از باش!د سانتيمتر گرما نفوذ زمان ب!ا متناس!ب! باي!د اس!تر!يليزاس!يون! چرخه !ي

يك ظرف! ي!ك مح!تويات مثال براي شود، گرفت!ه نظ!ر درط!ي! باي!د كش!ت! مح!ي!ط رس!يدن 15ليتري زمان! از دقيق!ه

دماي به .c ˚121مح!فظه بر!سد دما اين به ،

آلوده مصرفي مواد استريليزاسيون

اتوكالو قابل كيس!ه هاي در و نموده جدا را آلوده مص!رفي موادبیولوژیک خط!ر برچس!ب آنه!ا روي بر و دهي!د ( Biohazard)قرار

. كنيد نصب آن گره ي!ا كيس!ه، قس!مت هاي هم!ه ب!ه بخار نفوذ از اطمينان براي

پيمان!ه ) ي!ك گره، كردن محك!م از قب!ل ي!ا كني!د ش!ل ( 0.3را آب ليت!ر . كنيد اضافه آن به

آگار توسط اتوكالو اتاق!ك آبگذر شدن مس!دود از جلوگيري براي. دهيد قرار فلزی سطل داخل را كيسه ها مذاب،

،زبال!ه اس!تريليزاسيون براي الزم در 30-60زمان 121دقيقهي!ا س!انتيگراد در 15-30درج!ه سانتيگراد 134دقيق!ه درج!ه

مي باشد.

شده بندي بسته خشmك مواد اسmتريليزاسيون: آزمایش لوله و سوآب قبیل از

حداكثر ك!ه دهي!د قرار اتوكالو در طوري را بس!ته هاديواره هاي وبا شود ايجاد آنه!ا بي!ن در بخار چرخ!ش

. باشند نداشته تماسي نيز اتوكالو: شيميايي تست با اتوکالو کنترل كاغذي ((: TST Tempreture ,Steam ,Timeنوار

دما و بخار زمان، عامل سه! کاری سری هر در نوار این . مي دهد رنگ تغيير بنفش به زرد از و مي كند كنترل را

: بيولوژيك تست با اتوکالو کنترل

!استئاروترموفيلوس باس!يلوس! اس!پور حاوي ويال از ATCC 79 53اس!تف!ادهعنوان به باکتری ای!ن اس!پورهای زیرا! مي شود، س!فارش! هف!تگ!ي بطور

حرارت درج!ه ب!ا اتوکالو در حرارت! ب!ه اس!پورها درجه 121مقاوم تری!نمدت! ب!ه . 5س!انتیگراد استریلیزاسیون، پایان از پ!س می روند بی!ن از دق!یق!ه

را اسپور حاوی درون!ی مح!وط!ه آ!ن جداره ب!ه ف!شار ب!ا و کرده خارج! را ویالدر را مح!یط ای!ن س!پس شون!د؛ آزاد کش!ت مح!ی!ط! در اس!پورها ت!ا می شکنن!د

رنگ 55حرارت! تغیی!ر نظ!ر از هفت!ه ی!ک مدت! در و داده قرار س!انتیگراد درج!ه . رنگ تغیی!ر ک!ه ص!ورتی در می کنند کنترل را کش!ت! محی!ط موجود اندیکاتورو مرده اند اس!!تریلیزاسیون اث!!ر در اس!!پورها یعن!!ی نش!!د مشاهده

اندیکاتور رنگ تغیی!ر ص!ورت! در اس!ت گرفت!ه ص!ورت! کام!ل! اس!تریلیزاسیون. مانده اند زنده اسپورها یعنی کشت محیط

: اتوکالو با کار هنگام ايمني راهبردهای

. كنيد استفاده چشم محافظ و حرارت به مقاوم دستكش از رسيد ص!فر ب!ه اتوكالو اتاق!ك فشار وقت!ي کار اتمام از بع!د

. شوند، خن!ك كم!ي ظروف ت!ا بماني!د منتظ!ر كنيد باز آنرا درب. كنيد حمل را آنها سپس

يا بارگذاري ب!ه اقدام دس!تگاه بودن روش!ن هنگام در هرگ!ز. ننماييد مواد و وسايل نمودن خارج

به آ!ن الکتریک!ی اتص!ال و دس!تگاه بودن روش!ن هنگام در هرگ!ز. نكنيد آن نمودن تميز به اقدام پريز،

دستگاه كار هنگام در را درب كننده !ي محك!م پيچ هاي هرگ!ز. نكنيد سفت و شل

منابع :

- Quality Assurance for commercially prepared Microbiological Culture Media-Second Edition ; Approved standard.- Third edition document M22-A3. Vol. 24 No.19; 2006.

Oxoid company- General Guide to the use of Oxoid culture Media.

Diagnostic microbiology, Elmer W.Koneman,5th edition, 2006: page 96

-Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests; Approved Standard—Ninth Edition (2006).M2- A9.

-Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically; Approved Standard—Seventh Edition (2006).M7-A7

-Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media; Approved Standard— Third Edition (2004).M22-A3

-Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Sixteenth Informational Supplement (2006).M100-S16

 

 9 ) به- ) كيف!ي وكنترل مص!رف موارد آزمايشگاه!ي كش!ت هاي محي!ط

مهناز ترجمه و آوري گرد كش!ت؛ هاي محي!ط رنگ!ي اطل!س انضمام – وزارت سالمت، مرج!ع آزمايشگاه ص!ارمي؛ عل!ي محم!د ص!ارمي

پزشكي؛ وآموزش درمان 1387بهداشت،10 -انتشارات محمدی، مجتبی عموم!ی، میکروبیولوژ!ی عمل!ی مباح!ث

1381مهدیس، 11 -،مشهد دانشگاه!ی جهاد ص!فدری، هادی عمل!ی، شناس!ی باکتری

138212 -سیدعلی دکت!ر شناس!ی، میکروب آزمایشگاه در عمل!ی تکنیک های

امیر، کتاب انتشارات 1386مهبد،13 -مؤلف میکروبیولوژ!ی، آزمایشگاه پیرامون &cappoccinoنکات!ی

Sherman ،جنگل انتشارات محمدی، مریم مترجم ،1380

: تهيه و تنظيمفرزانه رفيعي

سميه ميرزايي پور

1393تابستان