به نام خدا

جنین زایی سوماتیکی مستقیم فلفل

تهیه کننده : مرجان نظری•

استاد راهنما:•

1

مقدمه

جنس فلفلCapsicumاز جنس های مهم صیفی جات مصرفی در دنیا میباشد

این گیاه بابذر تکثیر میشود ولی کشت بافت هم دربرنامه های اصالحی بسیار استفاده میگردد

فلفل جز سرسخت ترین گیاهان ازجهت تولید

ساختارمریستم شاخه و جوانه دسته بندی میشود.

2

جنین زایی سوماتیکی از روشهای مهم برای مطالعه بیان ژنی وترانسفورماسیون به حساب میاید

.این کشت پیش نیازمهمی برای انواع روشهای بیوتکنولوژیک وتوسعه ژنتیکی است

باززایی فلفل از توسعه پروتوکل این مقاله برای

طریق جنین زایی سوماتیکی منظور شده است.

3

مواد و روش ها

وندر” و” بالدی “برای این مطالعه استفاده شدند.بذرارقام کالیفورنیا“

.برای القای جنین زایی،از هیپوکوتیل گیاهچه استفاده شد

ضدعفونی شدند.1 دقیقه در مرکوریک کلراید 4بذوربه مدت%

بار با آب مقطر اتوکالو شده برای ضدعفونی نهایی ،شستشو داده 4همینطور

شدند.

بذور ما در بسترMS گرم برلیتر ساکارز،با 30 حاوی Ph 5/8.کاشته شدند

4

روزه ، در 15 الی 14هیپوکوتیل از گیاهچه MS 200 حاوی

بریده شد.ml 10الی 8% ساکارز ، 3میلی گرم گلوتامین و

25محیط کشت ما در دمای C 2000 زیرنور فلورسنت

بود.8 -16لوکس،و دوره ی نوری

4-2هورمون های-D وTDZ و0.0،0/2،0/5،1 با غلظت های

میلی گرم در بستر استفاده شد2

تکرار انجام 5 تیمار و 2 بلوک تصادفی و 1آزمایش های مادر

شد. 5

جنین های سوماتیکی به طور مجزا از بافت هیپوکتیل خارج شد

سپس در بسترMS گرم برلیترساکارز کشت داده شدند.30حاوی

نمونه ها در دو بسترMS وWMP میلی گرم برلیترساکارز قرار داده شد.30،60،80،100 با غلظت های

6

.بعداز آزمایش گیاهچه ها را به گلدانهای پالستیکی جهت سازگاری منتقل کردند

گلدانها حاوی مقادیر برابر پیت ماس و ورمیکولیت بود

7

نتایج و بحث

میلی گرم صورت گرفت.2و1طبق نتایج تشکیل معنی دارجنین ها فقط در غلظت های

4-2تشکیل جنین سوماتیکی ،فقط هنگام کاربرد-Dو TDZمشاهده شد

4-2حضور-D برای تشکیل جنین بسیار موثر

تشخیص داده شد.

رقم بالدی،بیشترین جنین وگیاهچه را نسبت

( دارابود.2/04به کالیفرنیا )

8

طبق نتایج جدول،غلظت اکسین نسبت به نوع زنوتیپ مهم تر بود..

4-2اثر متقابل ژنوتیپ و هورمون،هر دو رقم هنگامی که با-D بیشتری تیمارشدند

(2/32 و 2/60جنین های سوماتیکی بیشتری تولید شد.)

( 6/90غلظت موثربرای تولید بیشترین جنین سوماتیکی، )4-2-D 2 درغلظت

میلی گرم برلیتربود.

غلظتهای باالیTDZ( کاهش میدهد.2/60 تعداد جنین ها را)

9

10

ژنوتیپ جنین های سوماتیکی در بسترWMP( جنین زایی را داریم9/30 بیشترین تعداد )

تعدادجنین سوماتیکی در محیط کشتWMP )9/20( نسبت بهMS)7/22( .بیشتر بود

رراوری جنین های سوماتیکی است� غلظت ساکارز یک فاکتور مهم برای پ

گرم برلیتربه عنوان کمبودموادغذایی،80ساکارزکمتر از

باعث کاهش جنین زایی شده است

11

گرم برلیتر هم به خاطر فضاراسمزی80غلظت باالی

باعث کاهش جنین زایی میگردد.

گرم برلیتر ساکارز 80باالترین جنین زایی مربوط به

(15/40میباشد(

گرم برلیتر 100پایین ترین جنین زایی هم مربوط به

بود5/50ساکارز و

طبق جدول تفاوت معنی داری درتشکیل جنین های

سوماتیکی ارقام بالدی و کالیفرنیا مشاهده نشد.

12

13

نتیجه گیری

در پایان این تحقیق یک پروتوکل جامع برای جنین زایی سوماتیکی فلفل

بدست آمد.

این پروتوکل ساده،تجدید پذیر ،مستقل از نوع ژنوتیپ و متکی به

تیمارهورمونی میباشد.

این روش حتی برای موتانجنسیس و ترانسفورماسیون ژنتیکی هم

کاربردی است.

14

چکیده

.یک پروتوکل جامع درباره جنین زایی سوماتیکی فلفل بدست آمد

محیط کشتMS و WMP 4-2 به اضافه ی غلظت های مختلف-D و TDZاستفاده شدند

محیطWMP درمقایسه با 9/20با تولید MS 7/22بیشترین جنین زایی سوماتیکی را دارا بود

MS گرم برلیتر ساکارزدر تولید جنین موثر تر بود.30 با

15

پیشنهاد

.پیشنهاد میشود برای تکثیر فلفل،از این روش با توجه به پروتوکل بدست آمده عمل کرد

در اصالح فلفل حتما از روش فوق و امتحان شده استفاده کرد

.برای اصالح مقاصد ازدیاد تولید و مقاومت در برابر بیماریها مدنظرقرار بگیرد

16

منابع

17

با سپاس و تشکر ویژه از شما

18