结核病细菌学检查的结核病细菌学检查的

重要作用重要作用

河南省疾病预防控制中心河南省疾病预防控制中心

结核病预防控制所结核病预防控制所

闫国蕊闫国蕊

为了进一步加强结核病控制工作，实为了进一步加强结核病控制工作，实现现国家结核病控制规划国家结核病控制规划 (NTP)(NTP) 目标，加强目标，加强直接面视下短程化疗直接面视下短程化疗 (DOTS)(DOTS) 策略和结核策略和结核病细菌学实验室质量控制，提高肺结核病细菌学实验室质量控制，提高肺结核病人的发现率，通过实验室细菌学诊断病人的发现率，通过实验室细菌学诊断传染性肺结核是实施传染性肺结核是实施 DOTSDOTS 策略的一个关策略的一个关键，而且对结核病控制项目的成功起着键，而且对结核病控制项目的成功起着重要的影响作用。 重要的影响作用。

结核病细菌学检查的结核病细菌学检查的目的和任务目的和任务

在结核病控制工作中痰结核菌检查对于在结核病控制工作中痰结核菌检查对于发现传染源、确定诊断和化疗方案、考发现传染源、确定诊断和化疗方案、考核疗效、评价防治效果具有重要意义。核疗效、评价防治效果具有重要意义。结核病细菌学检查是国家结核病控制规结核病细菌学检查是国家结核病控制规划划 (NTP) (NTP) 的重要组成部分，在现代结核的重要组成部分，在现代结核病控制工作中起着不可缺少的重要作用。病控制工作中起着不可缺少的重要作用。

　　实验室网络及职能实验室网络及职能

在国家参比实验室的管理和监督之在国家参比实验室的管理和监督之下，以省级参比室为中心实验室，采下，以省级参比室为中心实验室，采用自上而下质量保证体系与同级实验用自上而下质量保证体系与同级实验室室间质控相结合的方式，建立我国室室间质控相结合的方式，建立我国实验室质量控制网络。网络中的各级实验室质量控制网络。网络中的各级实验室应有效地发挥各自的职能。实验室应有效地发挥各自的职能。

我国参比实验室网络我国参比实验室网络

SNRL ：跨国参比实验室NRL ：国家参比实验室PRL ：省级参比实验室PLL ：地市级实验室CLL ：县级实验室

SNRL NRL PRL PLL CLL

何为何为 DOTS?DOTS?

DOTSDOTS 为 “为 “ directly 0bserved tdirectly 0bserved therapy shortcourse ”herapy shortcourse ” 的缩写，中 的缩写，中 文译为文译为直接督导短程化疗直接督导短程化疗，统称现代，统称现代结核病控制策（结核病控制策（ DOTSDOTS ）该策略）该策略１９９１９９５５年开始在全球推广，被认为是当今年开始在全球推广，被认为是当今结核病诊治和管理的最有效方法。世结核病诊治和管理的最有效方法。世界银行将 界银行将 DOTSDOTS 列为“成本效益比最列为“成本效益比最高”的治疗方法之一。高”的治疗方法之一。

现代结核病策略 现代结核病策略 (DOTS)(DOTS) ：：

1.1. 政府承诺政府承诺2.2. 痰菌检查痰菌检查 ,, 发现发现病人病人

3.3. 医务人员直接观医务人员直接观察下的短程化疗察下的短程化疗

4.4. 定期不间断的药定期不间断的药品供应品供应

5.5. 信息监测系统信息监测系统

承诺

痰检督导药品

监测

我国结核病疫情

目前有 5.5 亿的人口感染了结核菌 (44.5%) 估算全国现有活动性肺结核病人450 万 ,其中传染性肺结核病人（涂阳肺结核） 150 万 据 WHO 估算 ,我国每年新发活动性肺结核病人 145 万 ,其中传染性肺结核 65万例 每年因结核病死亡 13 万

我省结核病疫情

河南是我国第一人口大省河南是我国第一人口大省 ,, 人口达人口达 97009700多万，结核病疫情较为严重多万，结核病疫情较为严重 ,,已已 被国家确认为结核病高负担省被国家确认为结核病高负担省 ,, 我省我省 现有现有活动性肺结核病人活动性肺结核病人 4646 万万（患病（患病 率率 159/10159/10 万万 ), ), 其中其中传染性病人传染性病人 1515 万万（患病率（患病率 497/10497/10 万万 ),),占全国肺结核病占全国肺结核病

人数人数 10%10% 。 。

河南省结核病控制工作河南省结核病控制工作

19931993 年在全国率先开展了年在全国率先开展了“卫生“卫生部加强与促进结核病控制目”；部加强与促进结核病控制目”； 19981998年自筹资金开展年自筹资金开展“河南省结“河南省结核病控制项目”；核病控制项目”； 20022002 年实施年实施“世行贷款“世行贷款 // 英国政英国政府赠款府赠款 // 日本政府援助中国结核病控日本政府援助中国结核病控制项目”；制项目”； 20032003 年开展年开展“全球基金项目”；“全球基金项目”；

项目的实施使我省的结核病防治工项目的实施使我省的结核病防治工作进入了全新的发展阶段。但是结核作进入了全新的发展阶段。但是结核病防治工作并不尽如人意，疫情下降病防治工作并不尽如人意，疫情下降缓慢，结核病人的缓慢，结核病人的发现率低、耐药率发现率低、耐药率高、高、治疗管理工作仍处于较低水平。治疗管理工作仍处于较低水平。

痰检质控文件痰检质控文件 19991999 年河南省结防所签发豫结年河南省结防所签发豫结防字（防字（ 19991999 年）第年）第 1010 号文件号文件《河南省结核菌检验质量控制标《河南省结核菌检验质量控制标准》准》 20042004 年河南省卫生厅签发豫卫年河南省卫生厅签发豫卫疾控（疾控（ 20042004 年）第年）第 9191 号文件号文件《河南省结核病实验室痰涂片检《河南省结核病实验室痰涂片检查质量控制标准》查质量控制标准》

结核病细菌实验室布局原则结核病细菌实验室布局原则一、结核病细菌学检查要有独立的实验室，不得 与其他实验室混用；二、培养基制备、洗刷等相对洁净的操作与涂片镜检、培养前处理、药敏试验等污染操作要有独立分开的场所，最好分别在专用的房间进行；三、基层只从事涂片镜检的实验室只拥有一间独立房舍的情况下，相对洁净区（镜检区、登记区）与污染区（涂片、染色区）要有明显区分。

基层痰检室布局范例基层痰检室布局范例

染色池

收集标本用的桌子

工作台

采光用窗户

（固定）

实验室门

试剂柜

显微镜 记录用的桌子

可以开关的窗户

结核菌检验实验室安全操作规则结核菌检验实验室安全操作规则

结核菌检验实验室必须具有与其服结核菌检验实验室必须具有与其服务级别相应的装备，其原则是能满足务级别相应的装备，其原则是能满足该级别实验室的需要，使实验室人员该级别实验室的需要，使实验室人员得到充分的保护，并避免造成环境污得到充分的保护，并避免造成环境污染。染。

安全操作规则（安全操作规则（ 11 ））

11 、实验室应有合理布局及合适的、实验室应有合理布局及合适的单向（外排）通风体系；单向（外排）通风体系；

22 、实验室应具备相应的防护设备，、实验室应具备相应的防护设备，以保护工作人员的安全和实验工作的以保护工作人员的安全和实验工作的顺利进行。分离培养、药物敏感性测顺利进行。分离培养、药物敏感性测定、菌种鉴定试验等操作应设有生物定、菌种鉴定试验等操作应设有生物安全操作柜或接种间和通风橱等；安全操作柜或接种间和通风橱等；

安全操作规则（安全操作规则（ 22 ）） 33 、实验室工作人员应用正确方式进、实验室工作人员应用正确方式进行技术操作，穿戴隔离衣、口罩和帽行技术操作，穿戴隔离衣、口罩和帽子等；子等；

44 、实验室所有带毒废弃物应灭菌及、实验室所有带毒废弃物应灭菌及无害化处理；无害化处理；

55 、建立清洁消毒制度，限制非工作、建立清洁消毒制度，限制非工作人员进入室内，禁止在实验室饮食和人员进入室内，禁止在实验室饮食和吸烟等；吸烟等；

安全操作规则（安全操作规则（ 33 ））

66 、进行下列操作时应严格按照技术规、进行下列操作时应严格按照技术规范，防止产生细菌气溶胶：①涂片制范，防止产生细菌气溶胶：①涂片制作；②培养液的倾倒和转移；③高速作；②培养液的倾倒和转移；③高速混合含菌液；④滴加、接种培养物； 混合含菌液；④滴加、接种培养物； ⑤吸管稀释和混合菌悬液；⑥取样器⑤吸管稀释和混合菌悬液；⑥取样器和震荡器的使用；⑦细菌细胞超声粉和震荡器的使用；⑦细菌细胞超声粉碎；⑧感染动物实验等。碎；⑧感染动物实验等。

分枝杆菌生物学基础 分枝杆菌生物学基础 —简介—简介结核分枝杆菌是结核分枝杆菌是 18821882 年郭霍（年郭霍（ Rober -tKRober -tKochoch ）从肺结核病人痰标本中发现）从肺结核病人痰标本中发现 ,, 是人是人类结核病的主要病原菌。类结核病的主要病原菌。

分枝杆菌属裂殖菌纲分枝杆菌属裂殖菌纲 ,, 放线菌目放线菌目 ,, 种类甚种类甚多多 ,, 目前已命名的有目前已命名的有 5656 多种多种 ,, 一般可分一般可分为缓慢生长和快速生长两大类。为缓慢生长和快速生长两大类。

结核菌生物学基础 结核菌生物学基础 —生物特性—生物特性分枝杆菌的形态分枝杆菌的形态 ::

结核结核分枝杆菌分枝杆菌是专性需氧菌是专性需氧菌 ,,无鞭毛、荚膜无鞭毛、荚膜 ,,无运动能力。无运动能力。

形状： 形状： 1.5 --3.5× 0.3 --0.61.5 --3.5× 0.3 --0.6微米的微米的细长杆状，直或稍弯，镜下常堆积成团、成束、细长杆状，直或稍弯，镜下常堆积成团、成束、排列杂乱无章，也有呈串珠样、链状、索状者。排列杂乱无章，也有呈串珠样、链状、索状者。

萋萋 --尼氏抗酸染色尼氏抗酸染色阳性阳性 ,,镜下的抗酸镜下的抗酸杆菌为淡兰色背景下的杆菌为淡兰色背景下的红色或粉红色红色或粉红色细长杆菌。细长杆菌。

结核菌生物学基础 结核菌生物学基础 —生物特性—生物特性

分枝杆菌的结构分枝杆菌的结构 :: 分枝杆菌由于细胞结构和细胞成分的特殊分枝杆菌由于细胞结构和细胞成分的特殊性性 ,, 具有经具有经碱性燃料碱性燃料染色后能够忍受染色后能够忍受酸性介质酸性介质脱色的特征脱色的特征 ,, 具有其染色特征的细菌习惯上称具有其染色特征的细菌习惯上称为为抗酸菌抗酸菌 (AFB).(AFB). AFBAFB 菌体细胞结构的完整性与其抗酸染色菌体细胞结构的完整性与其抗酸染色特性有着密切联系特性有着密切联系 .. 用电子显微镜观察分枝杆用电子显微镜观察分枝杆菌菌 ,, 完整的细胞结构主要有以下部分组成完整的细胞结构主要有以下部分组成 : : 细胞壁、细胞膜、细胞质、核区、细胞器细胞壁、细胞膜、细胞质、核区、细胞器 ..

抗酸性抗酸性抗酸性是分枝杆菌的重要特征。其化学基础是抗酸性是分枝杆菌的重要特征。其化学基础是分枝菌属的细胞壁脂质含量较高，并含有大量分枝菌属的细胞壁脂质含量较高，并含有大量分枝菌酸。分枝菌酸。

抗酸性与细菌细胞壁的完整性关系密切，若菌抗酸性与细菌细胞壁的完整性关系密切，若菌体自溶（如标本保存时间过长、温度过高）、体自溶（如标本保存时间过长、温度过高）、结核菌的变异型（如结核菌的变异型（如 L-L-型菌）可能失去抗酸性。型菌）可能失去抗酸性。

结核菌生物学基础 结核菌生物学基础 —生物特性—生物特性

结核菌生物学基础 结核菌生物学基础 —培养特性—培养特性

生长适宜温度生长适宜温度 373700CC，， PH6.8-7.2PH6.8-7.2 。营养要求较。营养要求较高。在常用的罗氏（高。在常用的罗氏（ Lowenstein-JensenLowenstein-Jensen）培）培养基上生长的菌落粗糙、凸起、致密，有表面养基上生长的菌落粗糙、凸起、致密，有表面皱折，呈颗粒、结节或菜花样，乳白色或米色，皱折，呈颗粒、结节或菜花样，乳白色或米色，不透明。不透明。

结核菌生长缓慢，在一般培养基上分裂一代需结核菌生长缓慢，在一般培养基上分裂一代需要要 1010多小时，根据接种菌量的多少，一般多小时，根据接种菌量的多少，一般 10-10-3030天肉眼可见菌落生长。天肉眼可见菌落生长。

结核菌检验方法结核菌检验方法一、涂片法：直接涂片法一、涂片法：直接涂片法 集菌法集菌法二、培养法二、培养法 : : 鸡蛋固体培养基法鸡蛋固体培养基法 （（ Lowenstein-JensenLowenstein-Jensen）） 快速培养法快速培养法三、动物试验三、动物试验四、分子生物学诊断（四、分子生物学诊断（ PCRPCR ））五、免疫学诊断五、免疫学诊断

Z N 50%－ 法

55%荧 光 法

69%集 菌 法

78%培 养 法

PCR80%

20%空 白 区Z N 50%－ 法

55%荧 光 法69%集 菌 法78%培 养 法

PCR80%

20%空 白 区

各种方法可检出结核杆菌数量各种方法可检出结核杆菌数量（个（个 /ml/ml

方法 直接涂片 集菌 培养 动物试验 方法 直接涂片 集菌 培养 动物试验 PCRPCR

菌数 菌数 10.000 1.000 100 10 110.000 1.000 100 10 1

一条结核杆菌在体内的繁殖情况一条结核杆菌在体内的繁殖情况结核杆菌数结核杆菌数 天数天数 天数天数 天数天数

11 22 99 512512 1717 131 072131 072 22 44 1010 1 0241 024 1818 262 144262 144 33 88 1111 2 0482 048 1919 524 288524 288 44 1616 1212 4 0964 096 2020 1048 5761048 576

55 3232 1313 8 1928 192 2121 2097 1522097 152 66 6464 1414 16 38416 384 2828 268 416×10268 416×10

33

77 128128 1515 32 76832 768 3535 34 535×1034 535×1066

88 256256 1616 65 53665 536 4242 4396 800×104396 800×1066

 

结核杆菌数结核杆菌数 结核杆菌数结核杆菌数

排菌量排菌量

1ml1ml 痰液中含菌量为痰液中含菌量为 1000-10.0001000-10.000 ，其，其痰涂片阳性率为痰涂片阳性率为 4040 ％％ -50-50 ％％

发现发现 11 个杆菌需个杆菌需 查视野数查视野数

涂片上的涂片上的 杆菌数杆菌数

每每 mlml 标本中标本中 杆菌数杆菌数

100100 100100 10001000

1010 10001000 1000010000

11 1000010000 100000100000

痰涂片检查的意义痰涂片检查的意义

一、痰菌检查是确定传染源的唯一一、痰菌检查是确定传染源的唯一方法方法

控制结核病流行以发现和控制传染控制结核病流行以发现和控制传染源为主，痰涂片抗酸杆菌（源为主，痰涂片抗酸杆菌（ AFBAFB）阳）阳性的肺结核患者是结核病的主要传染性的肺结核患者是结核病的主要传染源，因此痰涂片源，因此痰涂片 AFB AFB 镜检结果对诊断镜检结果对诊断传染性结核病是一项重要指标。传染性结核病是一项重要指标。

二、痰菌检查是确定化疗的依据二、痰菌检查是确定化疗的依据

病人是否需要化疗，首先应以痰结病人是否需要化疗，首先应以痰结果为准，如不查痰或查痰不对，就只果为准，如不查痰或查痰不对，就只能凭能凭 XX线判断有无活动性，这样就可线判断有无活动性，这样就可能将本来没有活动性、不需治疗的病能将本来没有活动性、不需治疗的病人进行长期治疗。人进行长期治疗。

三、痰菌状况是流行病学重要指标三、痰菌状况是流行病学重要指标 由于传染性结核病在流行病学中有由于传染性结核病在流行病学中有着特殊的意义，因此在反映某一国家着特殊的意义，因此在反映某一国家或地区结核病疫情严重程度的指标中，或地区结核病疫情严重程度的指标中，年感染率、涂阳患病率、涂阳发病率年感染率、涂阳患病率、涂阳发病率被更多关注。被更多关注。

四、化疗方案的选择需以查痰四、化疗方案的选择需以查痰 结果为根据结果为根据 排菌病人：排菌病人：说明在病变中藏有大量繁殖旺盛说明在病变中藏有大量繁殖旺盛的结核菌，需要有强有力的化疗方案，以达到的结核菌，需要有强有力的化疗方案，以达到迅速控制繁殖，短期内杀灭大部分结核菌的目迅速控制繁殖，短期内杀灭大部分结核菌的目的。的。

不排菌病人：不排菌病人：一般病变中结核菌数量不大，一般病变中结核菌数量不大，繁殖不旺盛，就不必要用特别强的化疗方案。繁殖不旺盛，就不必要用特别强的化疗方案。排菌与不排菌病人的治疗，在用药品种配伍、排菌与不排菌病人的治疗，在用药品种配伍、化疗时间管理方式上都有明显差别。化疗时间管理方式上都有明显差别。

五、化疗效果的考核五、化疗效果的考核 过去常以过去常以 XX线病变变化为考核治疗效果的指线病变变化为考核治疗效果的指标，当前认为以痰菌阴转考核化疗效果更为合适。标，当前认为以痰菌阴转考核化疗效果更为合适。因为：因为：

11 、化疗作用在于直接杀灭病灶中的结核菌，痰、化疗作用在于直接杀灭病灶中的结核菌，痰菌的变化反映了病变的情况。菌的变化反映了病变的情况。

22 、痰菌检查较、痰菌检查较 XX线更客观，误差较小，在各地、线更客观，误差较小，在各地、各人前后之间比较容易标准一致，可比性大。各人前后之间比较容易标准一致，可比性大。

五、化疗效果的考核五、化疗效果的考核 33 、化疗目的在于控制传染源、化疗目的在于控制传染源 44 、化疗情况下，痰菌变化比、化疗情况下，痰菌变化比 XX 线敏线敏感。感。

55 、有效化疗下，完成疗程，痰菌阴、有效化疗下，完成疗程，痰菌阴转后，即使转后，即使 XX 线阴影尚未完全吸收、线阴影尚未完全吸收、硬结、稳定，也可以停药。硬结、稳定，也可以停药。

化疗前后结核杆菌的定量分析化疗前后结核杆菌的定量分析 19761976 年年 YeagerYeager报告对痰菌阳性病人报告对痰菌阳性病人在化疗前后做结核杆菌培养的定量分析在化疗前后做结核杆菌培养的定量分析 ::

化疗前每化疗前每 mlml 细菌数细菌数 10106-6-101077，， 化疗化疗 22周后减少至周后减少至 55％，％， 44周减少至周减少至 0.250.25％％ ,, 化疗后结核杆化疗后结核杆菌呈对数减少以至消失，降低了传染性。菌呈对数减少以至消失，降低了传染性。

六、化疗中查痰要求六、化疗中查痰要求

治疗方案治疗方案 痰涂片检查 痰涂片检查 66 个月方案 个月方案 88个月方案个月方案 强化期 第强化期 第 22 个月末 第个月末 第 22 个月末个月末 继续期中 第继续期中 第 55 个月末 第个月末 第 55 个月末个月末 治疗末 第治疗末 第 66 个月末 第个月末 第 88个月末个月末

痰涂片检查的优点痰涂片检查的优点

11.. 作为诊断手段作为诊断手段 ,, 对传染性肺结核的诊断比对传染性肺结核的诊断比 xx线准 确性高线准 确性高 ..

2.2. 作为实验方法作为实验方法 , AFB, AFB镜检方法技术相对简单镜检方法技术相对简单 .. 3.3. 建立建立 AFBAFB检查所需设备投入少检查所需设备投入少 . . 4.4. 检查成本低检查成本低 ,,易于接受易于接受 . .

5.5.报告结果时间短报告结果时间短 ,, 能满足临床诊断的需求能满足临床诊断的需求 .. 6.6. 对阳性患者的治疗效果对阳性患者的治疗效果 ,, 能够作出及时和准 能够作出及时和准 确的评价确的评价 . .

检查对象检查对象 确定诊断：确定诊断： 凡因结核病症状求诊及转诊的可疑肺结凡因结核病症状求诊及转诊的可疑肺结核患者，均应进行直接涂片检查。一般包核患者，均应进行直接涂片检查。一般包括持续咳嗽、咳痰超过括持续咳嗽、咳痰超过 33 周；咳血或伴有周；咳血或伴有血痰；发热或胸痛超过血痰；发热或胸痛超过 22 周；胸部周；胸部 XX 线异线异常。确定诊断的涂片检查应采集常。确定诊断的涂片检查应采集 33 个合格个合格的痰标本。就诊当时在门诊留一份的痰标本。就诊当时在门诊留一份“即时“即时痰”痰”标本，同时给患者标本，同时给患者 22 个痰盒，嘱患者个痰盒，嘱患者留取留取“夜间痰”“夜间痰”和和“晨痰”“晨痰”，于次日交验。，于次日交验。

疗效评价：疗效评价： 凡已确诊、登记、治疗的肺结核患者，凡已确诊、登记、治疗的肺结核患者，在化疗期间按照规定应定期查痰：在化疗期间按照规定应定期查痰： 初治涂阳初治涂阳患者在疗程满患者在疗程满 22 、、 55 、、 66 个月个月时，时，复治涂阳复治涂阳患者在疗程满患者在疗程满 22 、、 55 、、 88个月个月时，按期送检两份痰（当日即时痰、当或时，按期送检两份痰（当日即时痰、当或次日晨痰）。次日晨痰）。

疗效评价：疗效评价： 初、复治涂阳初、复治涂阳患者在疗程满患者在疗程满 22 个月时，个月时，痰菌仍为阳性者，应在延长期满痰菌仍为阳性者，应在延长期满 11 个月时增个月时增加检查一次；若复治涂阳患者治疗满加检查一次；若复治涂阳患者治疗满 33 个月个月时痰菌仍阳性，应在治疗满时痰菌仍阳性，应在治疗满 55 个月增加晨痰个月增加晨痰检查一次，送检两份痰（当日即时痰、当或检查一次，送检两份痰（当日即时痰、当或次日晨痰）。次日晨痰）。 确诊、登记的涂阴确诊、登记的涂阴肺结核患者，即使患肺结核患者，即使患者因故未接受治疗，也应在登记后满者因故未接受治疗，也应在登记后满 22 个月个月和和 66 个月时进行痰菌检查。个月时进行痰菌检查。

痰标本的采集痰标本的采集 -1-1 容器：容器： 采用采用 WHOWHO 推荐的国际通用螺旋盖痰瓶，推荐的国际通用螺旋盖痰瓶，或可密封塑料盒、蜡纸盒收集痰标本（参考或可密封塑料盒、蜡纸盒收集痰标本（参考规格：直径规格：直径 44厘米，高度厘米，高度 22厘米）。 厘米）。

痰容器应标明病人姓名、编号（初诊病人痰容器应标明病人姓名、编号（初诊病人门诊序号或随访病人登记号）、检查项目和门诊序号或随访病人登记号）、检查项目和容器序号容器序号 11 、、 22 、、 33 （ （ 11＝当日即时痰，＝当日即时痰， 22＝夜间痰，＝夜间痰， 33＝次日晨痰）。 ＝次日晨痰）。

痰标本采集痰标本采集 -2-2

按采集的时间，可将标本分为三类： 按采集的时间，可将标本分为三类： 即时痰：即时痰：就诊时深呼吸后咳出的痰液；就诊时深呼吸后咳出的痰液； 晨痰：晨痰：患者晨起立即用清水漱口后，咳患者晨起立即用清水漱口后，咳 出的第 出的第 2 2 口、第 口、第 3 3 口痰液；口痰液； 夜间痰：夜间痰：送痰前一日，患者晚间咳出的送痰前一日，患者晚间咳出的 痰液； 痰液；

痰标本的采集痰标本的采集 -3-3 对疑似肺结核病者，临床医护人员应通对疑似肺结核病者，临床医护人员应通过解释，使其充分了解标本质量对相应检过解释，使其充分了解标本质量对相应检查项目的重要性，示范并指导其掌握从肺查项目的重要性，示范并指导其掌握从肺部深处咳痰的方法；如患者识字，可提供部深处咳痰的方法；如患者识字，可提供宣教材料。宣教材料。 (( 注意：由于当患者咳嗽、咳注意：由于当患者咳嗽、咳痰时易于产生含有结核菌的气溶胶，感染痰时易于产生含有结核菌的气溶胶，感染周边人群的机率较高，故采集痰标本时应周边人群的机率较高，故采集痰标本时应在远离人群的开放空间进行，或在通风良在远离人群的开放空间进行，或在通风良好的室内进行。好的室内进行。 ))

痰标本的采集痰标本的采集 -4-4

患者留取的痰标本，应由检验人员或经患者留取的痰标本，应由检验人员或经培训的专人目视检查标本质量培训的专人目视检查标本质量 (( 特别是用于特别是用于初次诊断的痰标本初次诊断的痰标本 )) ：标本量一般在：标本量一般在 3-5 ml3-5 ml ，，标本性状属于标本性状属于干酪痰、干酪痰、褐色血痰或含少量褐色血痰或含少量新鲜血液的新鲜血液的血痰、粘液痰血痰、粘液痰者为合格的标本；者为合格的标本；痰标本不合格者，应予以进一步指导并要痰标本不合格者，应予以进一步指导并要求其重新送检。进行细菌学检查时应在登求其重新送检。进行细菌学检查时应在登记本和检验报告单上注明标本性状，以供记本和检验报告单上注明标本性状，以供分析结果时参考。 分析结果时参考。

标本的性状标本的性状 -1-1 合格的痰标本应是患者深呼吸后，由肺部合格的痰标本应是患者深呼吸后，由肺部深处咳出的分泌物。深处咳出的分泌物。

干酪痰：干酪痰：标本外观以黄色标本外观以黄色 ((或奶酪色或奶酪色 )) 、、脓样、团块状的肺部分泌物为主，粘度较粘脓样、团块状的肺部分泌物为主，粘度较粘液痰低，制片时较易涂抹；涂片染色后镜检，液痰低，制片时较易涂抹；涂片染色后镜检，可发现大量脓性炎症细胞、肺上皮脱落细胞。可发现大量脓性炎症细胞、肺上皮脱落细胞。

血痰：血痰：此类标本是因粘液痰或干酪痰标本此类标本是因粘液痰或干酪痰标本中混有血液而形成，颜色为褐色或深褐色、中混有血液而形成，颜色为褐色或深褐色、鲜红色或伴有血丝。鲜红色或伴有血丝。

标本的性状标本的性状 -2-2 粘液痰：粘液痰：标本外观以白色、粘稠度标本外观以白色、粘稠度较高的肺部和支气管分泌物为主，制较高的肺部和支气管分泌物为主，制片时需仔细涂抹；涂片染色后镜检时，片时需仔细涂抹；涂片染色后镜检时，镜下可见支气管内膜纤毛柱状上皮细镜下可见支气管内膜纤毛柱状上皮细胞，伴有少量肺上皮脱落细胞、脓性胞，伴有少量肺上皮脱落细胞、脓性炎症细胞、口腔脱落细胞及口腔寄生炎症细胞、口腔脱落细胞及口腔寄生菌。此类标本的菌。此类标本的 AFBAFB 检出率较唾液高。检出率较唾液高。

标本的性状标本的性状 -3-3

唾液：唾液：目视观察标本整体外观，以透明或目视观察标本整体外观，以透明或半透明水样、粘度较低的口腔分泌物为主，半透明水样、粘度较低的口腔分泌物为主，标本中有时伴有气泡；涂片染色镜检时，标本中有时伴有气泡；涂片染色镜检时，镜下可见少量口腔上皮脱落细胞镜下可见少量口腔上皮脱落细胞 (( 形态不规形态不规则、细胞核着色较细胞质深，核质比接近则、细胞核着色较细胞质深，核质比接近或大于 或大于 1:2)1:2) 和口腔内寄生菌，有时可见食和口腔内寄生菌，有时可见食物残渣。由于此类标本进行物残渣。由于此类标本进行 AFBAFB 检查时的检查时的检出率很低，用于对患者确定诊断时是不检出率很低，用于对患者确定诊断时是不合格的标本。合格的标本。

涂片抗酸染色检查方法涂片抗酸染色检查方法 -1-1用于用于 AFBAFB检查的玻片要求：检查的玻片要求： 一张栽玻片上只能涂抹一份痰标本；一张栽玻片上只能涂抹一份痰标本； 每张栽玻片只能使用一次，不得清洗 每张栽玻片只能使用一次，不得清洗 后再次用于 后再次用于 AFBAFB涂片检查。涂片检查。

涂片抗酸染色检查方法 涂片抗酸染色检查方法 -2-2用于用于 AFBAFB检查的玻片要求：检查的玻片要求： 在玻片正面一端的在玻片正面一端的 1/31/3处注明实处注明实验室序号及标本序号验室序号及标本序号 ((如使用的载玻如使用的载玻片一端无磨砂面，必须使用玻璃刻刀片一端无磨砂面，必须使用玻璃刻刀注明编号；如使用的载玻片一端有磨注明编号；如使用的载玻片一端有磨砂面，可使用砂面，可使用 2B2B铅笔在磨砂面上直接铅笔在磨砂面上直接书写书写 )) 。 。

涂片抗酸染色检查方法涂片抗酸染色检查方法 -3-3 制备涂片：制备涂片： 小心打开承载痰标本的容器，防止产生气小心打开承载痰标本的容器，防止产生气溶胶或使标本外溢。仔细观察标本，使用折溶胶或使标本外溢。仔细观察标本，使用折断的竹签茬端，挑取痰标本中断的竹签茬端，挑取痰标本中干酪样、脓样干酪样、脓样或可疑部分或可疑部分约约 0.05-0.1 ml0.05-0.1 ml ，于玻片正面右，于玻片正面右侧侧 2/32/3 处，均匀涂抹成处，均匀涂抹成 10mm×20mm10mm×20mm 的卵圆的卵圆形痰膜。痰膜朝上静置自然干燥后形痰膜。痰膜朝上静置自然干燥后 (( 一般约一般约需要需要 3030 分钟分钟 )) 进行染色 。进行染色 。

涂片抗酸染色检查方法涂片抗酸染色检查方法 -4-4

制备涂片：制备涂片： 涂抹完毕后的痰标本，在结果涂抹完毕后的痰标本，在结果报告前应暂时保留。报告前应暂时保留。

为了保证检验人员的安全，严禁在为了保证检验人员的安全，严禁在涂抹痰标本的同时，对载玻片进行加涂抹痰标本的同时，对载玻片进行加热。热。

涂片抗酸染色检查方法涂片抗酸染色检查方法 -5-5

ZZ －－ NN 染色步骤 染色步骤 操作流程操作流程

涂痰膜

自然干燥

复红加热初染5分钟

自然干燥

镜检

流水冲洗

美兰复染30秒

5%盐酸酒精脱色

1-3分钟

流水冲洗

流水冲洗

涂片抗酸染色检查方法涂片抗酸染色检查方法 -6-6

一张染色合格的玻片，被亚甲兰染一张染色合格的玻片，被亚甲兰染色而呈亮蓝色。将染色后的玻片放置色而呈亮蓝色。将染色后的玻片放置在报纸上，如果透过痰膜不能分辨报在报纸上，如果透过痰膜不能分辨报纸上的文字，则表明该玻片涂抹过厚。纸上的文字，则表明该玻片涂抹过厚。

   

萋尼氏染色玻片镜检：萋尼氏染色玻片镜检： 使用双目显微镜使用双目显微镜 10×10× 目镜目镜读片。读片。取染色完毕且已干燥的玻片，痰膜向上放取染色完毕且已干燥的玻片，痰膜向上放置在玻片台上并以卡尺固定。首先使用置在玻片台上并以卡尺固定。首先使用 40×40×物镜，转动卡尺移动玻片至痰膜左端，将物镜，转动卡尺移动玻片至痰膜左端，将光线调节至适当亮度，调节焦距至可见细光线调节至适当亮度，调节焦距至可见细胞形态；移开胞形态；移开 40×40× 物镜，在玻片上滴物镜，在玻片上滴 1-21-2滴镜油，使用滴镜油，使用 100×100× 油镜油镜进行细致观察。 进行细致观察。

镜检读片镜检读片 -1-1 读片时，首先应从左向右观察相邻读片时，首先应从左向右观察相邻的视野；当玻片移动至痰膜一端时，的视野；当玻片移动至痰膜一端时，纵向向下转换一个视野，然后从右向纵向向下转换一个视野，然后从右向左观察，依此类推。通常左观察，依此类推。通常 10mmx20mm10mmx20mm的痰膜，使用的痰膜，使用 100×100× 油镜，每行可观油镜，每行可观察约察约 100100 个视野。 个视野。

镜检读片镜检读片

镜检读片镜检读片 -2-2 推荐使用专门用于推荐使用专门用于 100×100× 油镜、油镜、不干燥、不变硬的镜油。 不干燥、不变硬的镜油。

仔细观察完仔细观察完 300300 个视野，一般需要个视野，一般需要55 分钟以上；每个工作日，连续阅读分钟以上；每个工作日，连续阅读 110-120-12 张玻片后，应休息张玻片后，应休息 2020 分钟左右。 分钟左右。

萋尼氏染色镜检结果报告：萋尼氏染色镜检结果报告： 由于与疾病传染的程度及其相应严由于与疾病传染的程度及其相应严重程度密切相关，故镜检时发现细菌重程度密切相关，故镜检时发现细菌的数量是非常重要的参考依据。的数量是非常重要的参考依据。

因此痰涂片镜检的结果报告，不仅因此痰涂片镜检的结果报告，不仅是对疾病的定性，也是对疾病严重程是对疾病的定性，也是对疾病严重程度的半定量。度的半定量。

结果分级报告标准：结果分级报告标准：

抗酸杆菌阴性 抗酸杆菌阴性 ((－－ ))： 连续观察： 连续观察 300300 个不同视野，个不同视野， 未发现抗酸杆菌。 未发现抗酸杆菌。 报告抗酸杆菌菌数： 报告抗酸杆菌菌数： 1-81-8条抗酸杆菌条抗酸杆菌 /300/300 视野。视野。抗酸杆菌阳性（抗酸杆菌阳性（ 11＋）＋） : : 3-93-9条抗酸杆菌条抗酸杆菌 /100/100 视野。视野。抗酸杆菌阳性（抗酸杆菌阳性（ 22＋）：＋）： 1-91-9条抗酸杆菌条抗酸杆菌 /10/10 视野。视野。抗酸杆菌阳性（抗酸杆菌阳性（ 33＋）：＋）： 1-91-9条抗酸杆菌条抗酸杆菌 //每视野。每视野。抗酸杆菌阳性（抗酸杆菌阳性（ 44＋）：＋）：≥≥ 1010 条抗酸杆菌条抗酸杆菌 //每视野。 每视野。

结核病细菌学实验室登记本结核病细菌学实验室登记本

实实验验序序号号

日日

期期

姓姓

名名

性性

别别

年年

龄龄

初诊初诊病人病人住址住址

痰标本来源痰标本来源 标本镜检结果标本镜检结果 签签名名

备备注注初诊病人初诊病人

(( 门诊序门诊序号号 ))

随访病人随访病人(( 登记登记号号 ))

标标本本

性性质质

结结果果

日日期期

11

22

33

11

22

33

填写说明填写说明 实验序号和编号实验序号和编号 : : 初诊病人的初诊病人的 33 个标本个标本 ,,随访随访病人的病人的 22 个痰标本个痰标本 ,, 要在玻片上注明每个痰标要在玻片上注明每个痰标本的序号和编号本的序号和编号 , , 例如例如 : : 实验序号为实验序号为 18,318,3 个个痰标本的编号分别为 痰标本的编号分别为 18-118-1 、、 18-218-2 、、 18-3 ,18-3 ,

痰标本来源痰标本来源 : : 初诊病人门诊序号以门诊登记初诊病人门诊序号以门诊登记本为据本为据 ;;随访病人登记号以病人登记本为据随访病人登记号以病人登记本为据 ..

痰标本性质痰标本性质 :: 干酪痰、血痰、粘液痰和水样干酪痰、血痰、粘液痰和水样痰痰分类登记分类登记 ..

“ “ 标本镜检结果”中的“日期”为实际镜检标本镜检结果”中的“日期”为实际镜检日期日期 ..

即时痰与晨痰阳性检出率比较即时痰与晨痰阳性检出率比较

即 时 痰 总计即 时 痰 总计 + -+ -

晨（晨（ ++ ） ） 217217 （（ 84.4%84.4% ） ） 29(11.3%) 229(11.3%) 24646

痰（痰（ -- ） ） 66 （（ 2.3%2.3% ） ） 5 (2.0%) 15 (2.0%) 111

合计 合计 223 34 257223 34 257

不同性状痰样本涂片检查分枝杆菌阳性不同性状痰样本涂片检查分枝杆菌阳性检出百分率检出百分率

作 者 干酪样痰 血性痰 脓性痰 粘液性作 者 干酪样痰 血性痰 脓性痰 粘液性痰 水样痰痰 水样痰

郭氏郭氏 (78(78 年年 ) 63.6 (77/121) 31(4/13) 26.4(37/140) 8.7(74/847) 2.8(2/71)) 63.6 (77/121) 31(4/13) 26.4(37/140) 8.7(74/847) 2.8(2/71)

车氏车氏 (87(87 年年 ) 65.5 (36/55) 34.8(16/46) 32.1(42./131) 10.6(56/52.9) 4.3(4/92)) 65.5 (36/55) 34.8(16/46) 32.1(42./131) 10.6(56/52.9) 4.3(4/92)

宋氏宋氏 (97(97 年年 ) 72 (36/50) 30(8/60) 26.8(52/194) 20(38/190) 2.7(4/148)) 72 (36/50) 30(8/60) 26.8(52/194) 20(38/190) 2.7(4/148)

闫氏闫氏 (99(99 年年 ) 76.5 (39/51) 41.2(21/51) 33.3(33/99) 20.6(49/238) 2.3(7/304)) 76.5 (39/51) 41.2(21/51) 33.3(33/99) 20.6(49/238) 2.3(7/304)

假阳性产生的原因假阳性产生的原因

偶尔痰标本或涂片上有抗酸颗偶尔痰标本或涂片上有抗酸颗粒，用萋粒，用萋 -- 尼法染色后，这些颗粒仍尼法染色后，这些颗粒仍保持红色（石碳酸复红）用酸酒精不保持红色（石碳酸复红）用酸酒精不脱色。这些红色颗粒有时与结核菌相脱色。这些红色颗粒有时与结核菌相象，这些颗粒包括：象，这些颗粒包括：

一一 )) 一些抗酸颗粒一些抗酸颗粒 -1-1 ：：

11 、食物颗粒（如蜡、油）、食物颗粒（如蜡、油） 要去掉这些，嘱病人在留标本以前要去掉这些，嘱病人在留标本以前清水漱口、刷牙（不用牙膏或消毒清水漱口、刷牙（不用牙膏或消毒剂）。更好是嘱病人在早饭前或空腹剂）。更好是嘱病人在早饭前或空腹时留标本。时留标本。

一）一些抗酸颗粒一）一些抗酸颗粒 -2-2 ：：

22 、染液沉渣、染液沉渣 虽然这些沉渣与抗酸杆菌容易辨别，虽然这些沉渣与抗酸杆菌容易辨别，但可影响镜检或偶尔使经验不足的镜但可影响镜检或偶尔使经验不足的镜检者看错。沉渣可以通过过滤从染液检者看错。沉渣可以通过过滤从染液除去。保险的方法是使用新鲜配制经除去。保险的方法是使用新鲜配制经过滤的染液，而不用陈腐的染液。 过滤的染液，而不用陈腐的染液。

二）细菌、微生物、植物类等二）细菌、微生物、植物类等 -1-1 ：：

11 、腐生抗酸杆菌、腐生抗酸杆菌 这些菌出现在土壤和水里，在工作时有这些菌出现在土壤和水里，在工作时有时会混入痰标本里或涂片上。用蒸馏水或时会混入痰标本里或涂片上。用蒸馏水或煮沸过的水就可以避免。 煮沸过的水就可以避免。

22 、非结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌 如：堪萨斯分枝杆菌、枯草杆菌的芽孢枯草如：堪萨斯分枝杆菌、枯草杆菌的芽孢枯草杆菌的芽孢等，这些抗酸杆菌偶尔出现在标本里，杆菌的芽孢等，这些抗酸杆菌偶尔出现在标本里，当这些菌引起肺部疾患时，出现的菌数较多。当这些菌引起肺部疾患时，出现的菌数较多。

二）细菌、微生物、植物类等二）细菌、微生物、植物类等 -2-2 ：： 33 、纤维和花粉、纤维和花粉 纤维，包括毛、棉、滤纸和竹等，一般纤维，包括毛、棉、滤纸和竹等，一般单个地出现，而且只在一个视野里。某些单个地出现，而且只在一个视野里。某些松树的花粉是短小、球菌样的杆状，标本松树的花粉是短小、球菌样的杆状，标本里较罕见里较罕见

44 、玻片反复使用、不洁净、有划痕，常常、玻片反复使用、不洁净、有划痕，常常会滞留痰液，使初学者弄混。划痕多呈并会滞留痰液，使初学者弄混。划痕多呈并排状波纹形，一般比抗酸菌长。排状波纹形，一般比抗酸菌长。

三）操作过程中造成的污染三）操作过程中造成的污染 -1-1 ：：

11 、染色、染色 当几个玻片同时放在一个染色缸或当几个玻片同时放在一个染色缸或脱色缸里处理时，有时抗酸杆菌会从脱色缸里处理时，有时抗酸杆菌会从一个阳性玻片上污染到另一个阴性玻一个阳性玻片上污染到另一个阴性玻片上，因此抗酸染色不允许缸染片上，因此抗酸染色不允许缸染 ,, 必必须把每一张玻片放在染色架上分开处须把每一张玻片放在染色架上分开处理就可以防止这种情况。理就可以防止这种情况。

三）操作过程中造成的污染三）操作过程中造成的污染 -2-2 ：：

22 、镜检、镜检 油滴管接触到涂片上，油镜头碰到油滴管接触到涂片上，油镜头碰到涂片，用吸水纸连续压干几个涂片均涂片，用吸水纸连续压干几个涂片均可造成交叉污染。可造成交叉污染。

假阴性产生的原因假阴性产生的原因 假阴性结果常常是由于涂片、染色假阴性结果常常是由于涂片、染色以及镜检中的缺点。做一个好涂片，以及镜检中的缺点。做一个好涂片，痰标本的收集以及痰块的选择是基本痰标本的收集以及痰块的选择是基本要求，应予以特别注意。要求，应予以特别注意。

一）痰收集不好：一）痰收集不好：

有时病人没有被告诉清楚什么是一个合有时病人没有被告诉清楚什么是一个合格的痰标本，怎么咳出来。必须清楚的告格的痰标本，怎么咳出来。必须清楚的告诉病人唾液和鼻咽部的分泌物不是痰，不诉病人唾液和鼻咽部的分泌物不是痰，不适合于检查。应该鼓励病人并且给他时间适合于检查。应该鼓励病人并且给他时间要从肺内“深处”把支气管里的痰咳出来，要从肺内“深处”把支气管里的痰咳出来，如果咳不出来，可用咽试子或向气管内滴如果咳不出来，可用咽试子或向气管内滴入入 5-105-10 毫升冷盐水（或蒸馏水），有条件毫升冷盐水（或蒸馏水），有条件的地方可以用超声雾化的方法取痰，其它的地方可以用超声雾化的方法取痰，其它刺激方法如洗胃以及支气管镜等。 刺激方法如洗胃以及支气管镜等。

二）痰标本和痰涂片的保存不善：二）痰标本和痰涂片的保存不善：

11 、抗酸杆菌可因标本受到日光照射、、抗酸杆菌可因标本受到日光照射、紫外线辐射、过热，在干、热的条件紫外线辐射、过热，在干、热的条件下储存而失掉 抗酸性。下储存而失掉 抗酸性。

22 、在保存涂片时，应将玻片上的香、在保存涂片时，应将玻片上的香柏油用二甲苯去掉，因为油会撤掉抗柏油用二甲苯去掉，因为油会撤掉抗酸杆菌的颜色。酸杆菌的颜色。

三）未能选好合适的痰颗粒作涂片；三）未能选好合适的痰颗粒作涂片；

结核菌最容易在痰里灰绿色或黄色结核菌最容易在痰里灰绿色或黄色浓稠奶油样的小粘块里找到，（这些浓稠奶油样的小粘块里找到，（这些小粘团常常含有从肺内空洞里排出的小粘团常常含有从肺内空洞里排出的干酪样坏死组织）。假如痰未经离心干酪样坏死组织）。假如痰未经离心和浓缩处理。则应从痰里仔细地把这和浓缩处理。则应从痰里仔细地把这些小粘块挑出来。些小粘块挑出来。

四）涂片做的不当或染色不当：四）涂片做的不当或染色不当：

11 、涂片上涂抹的痰液太少，一致涂片太薄；、涂片上涂抹的痰液太少，一致涂片太薄；22 、 涂片过后，透光性差；、 涂片过后，透光性差；33 、 涂片固定时过热；、 涂片固定时过热；44 、 涂片固定不好，一些东西被冲洗脱掉；、 涂片固定不好，一些东西被冲洗脱掉；55 、石碳酸复红染色时间过短，或因过 热而、石碳酸复红染色时间过短，或因过 热而沸腾，造成染色太重；沸腾，造成染色太重；

66 、 复染太浓，以致抗酸杆菌模糊不清。、 复染太浓，以致抗酸杆菌模糊不清。

五）涂片阅读不够：五）涂片阅读不够：

扫描阅读的不规范或时间过短，则扫描阅读的不规范或时间过短，则检查的视野太少。检查的视野太少。

六）错误结果的其它原因：六）错误结果的其它原因：11 、弄错了病人，写错了名字，把名字或标本号、、弄错了病人，写错了名字，把名字或标本号、涂片号弄乱；涂片号弄乱；

22 、痰容器的标签弄错；、痰容器的标签弄错；33 、记录或结果报告写错；、记录或结果报告写错；44 、阅读上的错误，由于视觉和心理上的原因造、阅读上的错误，由于视觉和心理上的原因造成的，也称之为“人的因素”。成的，也称之为“人的因素”。

55 、涂片镜检的个人之间的阅读差异。据报道，、涂片镜检的个人之间的阅读差异。据报道，对于这样一个问题，“这个涂片的抗酸杆菌是对于这样一个问题，“这个涂片的抗酸杆菌是阴性还是阳性”一致率是阴性还是阳性”一致率是 93%93% 。。

66 、诊断偏见，倾向于有病。 、诊断偏见，倾向于有病。

假阳性结果与预防措施假阳性结果与预防措施 -1-1一、假阳性结果的后果一、假阳性结果的后果

1.1.造成不必要的治疗及药品的浪费；造成不必要的治疗及药品的浪费； 2.2. 对国家结核病措施的执行产生影响。对国家结核病措施的执行产生影响。

假阳性结果与预防措施假阳性结果与预防措施 -2-2二、预防措施二、预防措施1.1. 必须使用新的载玻片进行相应检查必须使用新的载玻片进行相应检查 ..

2.2. 每个标本均使用一个新竹签完成涂片涂每个标本均使用一个新竹签完成涂片涂抹抹 ..

3.3. 所有染液均经过滤所有染液均经过滤 .. 4.4. 染色时玻片彼此保持一定距离染色时玻片彼此保持一定距离 ,, 相互彻相互彻底隔开底隔开 ..

5.5. 严禁使用染色缸染色严禁使用染色缸染色 ..

假阳性结果与预防措施假阳性结果与预防措施 -3-3 二、预防措施二、预防措施 6. 6. 染色时勿使玻片上的染液干燥染色时勿使玻片上的染液干燥 .. 7. 7. 滴加镜油时滴加镜油时 ,,严禁容器滴口直接接触玻片痰膜严禁容器滴口直接接触玻片痰膜 .. 8. 8. 严禁物镜镜头直接接触玻片痰膜严禁物镜镜头直接接触玻片痰膜 .. 9. 9. 完整、准确地标注痰盒、标本和实验室登记本完整、准确地标注痰盒、标本和实验室登记本 .. 10. 10. 登记前、后对检验单和标本盒上的标注进行仔登记前、后对检验单和标本盒上的标注进行仔细核对细核对 ..

11.11.准确纪录和报告结果准确纪录和报告结果 ..

假阴性结果与预防措施假阴性结果与预防措施 -1-1一、假阴性结果一、假阴性结果 1.1.患者未给予治疗，造成身体进一步患者未给予治疗，造成身体进一步损害、结核病传播，甚至死亡损害、结核病传播，甚至死亡 ;;

2.2.未能得到合理的强化期治疗，导致未能得到合理的强化期治疗，导致不合理的用药不合理的用药 ;;

3.3. 对国家结核病措施的执行产生影响。对国家结核病措施的执行产生影响。

假阴性结果与预防措施假阴性结果与预防措施 -2-2 二、预防措施二、预防措施 1.1. 确认标本是痰而非唾液确认标本是痰而非唾液 ;; 2.2. 确认每份标本至少确认每份标本至少 3ml;3ml; 3.3.选择浓样、干酪样、黏液分泌物涂抹制备选择浓样、干酪样、黏液分泌物涂抹制备玻片；玻片；

4.4. 制备玻片时标本涂抹均匀制备玻片时标本涂抹均匀 ,, 不要太薄或太不要太薄或太厚厚 ;;

5.5.使用高质量染料使用高质量染料 ,,严格按照配方配制染液严格按照配方配制染液 ;; 6.6.严格按照操作程序完成染色过程严格按照操作程序完成染色过程 ;;

假阴性结果与预防措施假阴性结果与预防措施 -3-3二、预防措施二、预防措施 7.7.判断结果为“阴性”前，须阅读规定要求判断结果为“阴性”前，须阅读规定要求的视野数。的视野数。

8.8. 可采用已知结果为阳性的玻片作为对照，完可采用已知结果为阳性的玻片作为对照，完成染色镜检过程。成染色镜检过程。

9.9.完整、准确地标注痰盒、玻片和实验室登记完整、准确地标注痰盒、玻片和实验室登记本。本。

10. 10. 登记前仔细核对检验单和标本盒上的标注。登记前仔细核对检验单和标本盒上的标注。 11.11.准确纪录和报告结果。准确纪录和报告结果。

抗酸染色注意事项抗酸染色注意事项 ::11.. 干酪痰、血痰、粘液痰干酪痰、血痰、粘液痰为合格痰标本；唾为合格痰标本；唾液或口水为不合格标本，除照常进行涂片检液或口水为不合格标本，除照常进行涂片检查外，应要求患者重新送检。 查外，应要求患者重新送检。

22.. 对当日不能进行涂片检查的痰标本，须置对当日不能进行涂片检查的痰标本，须置于于 4℃4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。

33.. 一张载玻片只能涂抹 一张载玻片只能涂抹 1 1 份份痰标本。痰标本。44.. 载玻片只允许一次性使用，严禁清洗后重载玻片只允许一次性使用，严禁清洗后重复使用。复使用。

抗酸染色注意事项抗酸染色注意事项 ::镜检要求镜检要求 ::

11.. 为防止抗酸杆菌的交叉污染，严禁油为防止抗酸杆菌的交叉污染，严禁油镜头直接接触涂片上的痰膜。镜头直接接触涂片上的痰膜。

22.. 仔细观察仔细观察 300300 视野。视野。 33.. 每个工作日，连续阅读每个工作日，连续阅读 10-1210-12 张涂片张涂片后应休息后应休息 2020 分钟左右。分钟左右。

4 4 .. 采用自查和互查方式，至少抽查复检采用自查和互查方式，至少抽查复检当日当日 10%10% 涂片，并填写室内质控登记表。 涂片，并填写室内质控登记表。

抗酸染色注意事项抗酸染色注意事项 ::痰涂片保存痰涂片保存 -1:-1:

1.1. 镜检后的涂片应及时用浸满二甲苯的镜检后的涂片应及时用浸满二甲苯的擦镜纸揭取数次，彻底祛除涂片上的镜油。擦镜纸揭取数次，彻底祛除涂片上的镜油。

2.2. 涂片脱去镜油后，必须再次核对实验涂片脱去镜油后，必须再次核对实验室登记本与每张涂片实验序号。室登记本与每张涂片实验序号。

3.3. 涂片上涂片上严禁标记镜检的阴、阳性严禁标记镜检的阴、阳性结果。结果。 4.4. 全部涂片按实验室登记本序号连续排全部涂片按实验室登记本序号连续排列，存放于玻片盒内。列，存放于玻片盒内。

抗酸染色注意事项抗酸染色注意事项 ::痰涂片保存痰涂片保存 -2:-2:

5.5. 涂片保存与实验室登记本记录应保持涂片保存与实验室登记本记录应保持一致。初诊病人第一张涂片存入涂片盒后一致。初诊病人第一张涂片存入涂片盒后需预留出两个空位置，以备第二张、第三需预留出两个空位置，以备第二张、第三张涂片检查后放入；随访病人第一张涂片张涂片检查后放入；随访病人第一张涂片存入涂片盒后需预留出存入涂片盒后需预留出 11 个空位置，以备个空位置，以备第二张涂片检查后放入。第二张涂片检查后放入。

(( 涂片保存按照弃前留后的原则涂片保存按照弃前留后的原则 ,, 保存近保存近期三个月的全部痰涂片待检期三个月的全部痰涂片待检 ,, 全年涂片不全年涂片不足足 500500 张的应全部保存张的应全部保存 .).)

抗酸染色注意事项抗酸染色注意事项 ::痰涂片保存痰涂片保存 -3:-3:

6.6.按规定数量保存的用于室间质量按规定数量保存的用于室间质量评估的涂片，未经上级质控单位准许评估的涂片，未经上级质控单位准许不能自行销毁。不能自行销毁。

7.7.装满涂片的玻片盒，需用标签注装满涂片的玻片盒，需用标签注明涂片实 验序号区间和日期区间，以明涂片实 验序号区间和日期区间，以便日后盲法复检或现场评价时抽样。 便日后盲法复检或现场评价时抽样。