النباتية األنسجة و الخاليا زراعةمقدمـة

والمفيدة والهامة الحديثة الطرق من النباتية األنسجة و الخاليا زراعة طريقة تأصبح لقد من و العملى التط11بيق دائ11رة الى األبح11اث دائ11رة من طريقةال ههذ تخرج وقد للنبات مجال فى

أساس11ا س11تخدمت (تكني11كطريق11ة)الال هالتجارى. فهذ المجال وهو األوسع األفق الى الضيق الحيز ب11أى تحقيقة اليمكن النباتات من ممكن عدد أكبر على للحصول ذلك و للنباتات السريع اإلكثار فى

ح11يز وأق1ل وقت أق1ل فى و الس11نة من وقت أى فى ذل1ك و التقليدي1ة التك1اثر ط1رق من طريق1ة العلم11اء م11ارس ويسر. وقد بسهولة للنباتات بالنسبة الخدمة عملية إجراء يمكن ثم ومن ،ممكن يجب التى النباتية األنسجة زراعة معامل تسمى خاصة معامل فى ألنسجة و لخالياا زراعة طريقة

الفني1ة والعمال1ة والكيماوي1ات األدوات ك1ل هوب1 والتعقيم النظاف1ة كام1ل فيه1ا ج1زء كل يكون أن النبات11ات إلنت11اج المستخدمة اإلمكانيات باقى وكذلك التدريب من عالية درجة على والتى الماهرة

على تحت11وى معقم11ة غذائي11ة بيئ11ة على معقم نب11اتى ج11زء زراع11ة األنسجة. فعن11د زراعة خالل من ينم11و النب11ات من الص11غير الج11زء ه11ذا أو الخلي11ة ه11ذة ف11إن النب11ات يحتاجه11ا التى الغذائية العناصر النبات من والناتج كثيرة بأعداد اإلنتاج ويكون همن أخذ الذى األصل يطابق كامل نبات الى ويتحول ،لألص11ل ومطابق11ة متش11ابهة منها كل فى الجينات و ،ساللة تسمى النباتات مجموعة يكون الواحد

.بأخرى أو بدرجة بينها فيما تختلف نباتات ينتج الذى الجنسى التكاثر بخالف هذا من الخالي11ة النباتات إلنتاج الزمان من قرن نصف من أكثر منذ التكنيك هذا أستخدم ولقد

الى باإلض11افة المرس11تيمية القم11ة زراع11ة تكني11ك بإس11تخدام وذل11ك الفيروس11ية وخاص11ة األمراض العل11وم مج11االت فى العلم11اء ب11ة ماق11ام الغ11رض. بج11انب له11ذا الكيماوي11ات أو الح11رارة إستخدام وأخ11رى لألم11راض ومقاوم11ة اإلنت11اج عالي11ة س11الالت باس11تنباط النب11ات تربية علماء قام ،المختلفة

األنس11جة م1زارع تع11د والك1الوس. زراع1ة تكني11ك باس11تخدام والجف1اف والحرارة الملوحة تتحمل الى المرغوب1ة الجين11ات نق1ل تقني11ة لتط11بيق والض11رورية األولى المرحل11ة والبروتوبالست والخاليا

الوراثية. الهندسة باسم مايعرف أو الهامة اإلقتصادية المحاصيل بش11كل يس11تعمل النباتي11ة األنس11جة و الخالي11ا زراع11ة تكني11ك الحاضر وقتنا فى أصبح ولقد

ك11ذا و المص11نعة الب11ذور و الجسدية األجنة إنتاج منها أخرى كثيرة مجاالت فى فائق بنجاح و روتنى و النبات1ات تربي1ة مج1ال فى ومفي1دة هامة هوهذ اللقاح حبوب أو المتك من أحاديةال نباتاتال إنتاج خاص11ة غذائي11ة بيئ11ات على اإلندوسبرم بزراعة وذلك الكروموسومية المجموعة ثالثية نباتات إنتاج المبكرة مراحلها فى تموت أن قبل الزيجوتية األجنة زراعة أن كماالنبات. لمربى أهمية لها هوهذ من األن11واع ه11ذة مثل على المحافظة لىإ يؤدى وهذا األجنة زراعة و إنقاذ تكنيك علية يطلق فيما

هجين إلنت11اج مختلفين نب11اتين نوعين من بروتوبالست ودمج إنتاج تم . وكذلكالمتباعدة التهجينات فى علي11ه الحص11ول يص11عب لألم11راض مق11اوم أو اإلنتاجي11ة ع11الى يك11ون ق11دجسدية( )هجن جديد

وغيرها. المانعة العوامل من عديد لوجود للتهجين التقليدية بالطرق أو الطبيعة العدي11د على الحصول فى الخاليا ومعلقات والكالوسات األنسجة زراعة تقنية أستخدمت وأيضا

الهام1ة األدوي1ة من العديد تركيب فى تستخدم التى )الصيدلية( الهامة الكيماوية المركبات من الط11رق من النباتي11ة األنس11جة زراعة تكنيك ويعتبراألمراض. من كثير عالج فى تستخدم والتى )كبن11ك واألن11واع واألصناف السالالت المربى يد تحت يكون حتى الوراثية األصول لحفظ الهامة

نتيج11ة تنق11رض أو تت11دهور أن قب11ل التربي11ة ب11رامج فى الم11ربى اليه11ا يحتاج قد التىللجينات( ومناسبة. غير لظروف تعرضها

تاريخيـة مقدمـة

kإ يرتبط األنسجة زراعة علم تطور إن k رتباطا فمنذ الخلق نظرية ظهور مع وثيقا250k حوالى علم فى الرواد أحدDuhamel du Monceau,s (1756) م11العال أشار عاما المجروحة المناطق على كالوس تكوين ( علىElm) الدردار شجرة مقدرة الى النبات

Gautheret العالم ذكره ما حسب األنسجة زراعة علم بداية تعتبر الدراسة تلك و0بالساق الخلية مقدرة إكتشاف إلى يعزى األنسجة زراعة علم بداية من اآلخر . والجزء(1985) الخلية أن توضح والتى Totipotency جديد نبات وتكوين والتكشف النمو على النباتية

تكون األعضاء. وأن وكذلك الخاليا من العديد وتكوين اإلنقسام على قادرة الواحدة الخاليا هذه مقدرة ليؤكد الزيجوت خلية هى واحدة خلية من واألعضاء الخاليا من العديد

التكشف على اللقاح حبوبل الجرثومية الخاليا مقدرة ذلك إلى التكشف. ويضاف على فعند األعضاء وتكوين التكشف على القدرة الحيوانية الخاليا وتفتقد كاملة نباتات وتكوين أخذت الذى األعضاء أحد أو الخاليا بعض وتكون وتتكاثر تنقسم فإنها حيوانية خلية زراعة

k منه نتفهم أن علينا يجب لذلك اإلنقسام على القدرة فترة بعد الخاليا هذه تفقد ما وغالبا.الحى للكائن المختلفة ألعضاءل ةفلتالمخ الخاليا بين العالقة

الخاليا هذه على سيطرتها تفرض التى العوامل من العديد هناك يكون قد مالحظة وهناك مورفولوجيا مختلفة وراثية وتراكيب أعضاء إلى لتكشفل يااثور المتماثلة

هى(Polarity) القطبية أن إقترح حيثVochting (1878) م111العال قدمها هتمامإلبا جديرة سوق من قطع على الشهيرة تجربته فى وجد ولقد النباتى الجزء تكشف على تؤثر التى

قادرة السفلية األجزاء وكذلك خضرية براعم إنتاج على قادرة العلوية األجزاء أن النبات التابعة المختلفة األشجار فى التطعيم تجارب أن إلى باإلضافة الجذور. هذا إنتاج على

كل يؤثر وال يتغير ال واألصل الطعم سلوك أن إلى أشارتSalix, Beta, Opuntia ساجنأل ألن وذلك الوراثى المحتوى ناحية من األقل على اإللتصاق بواسطة اآلخر على منهم

الجزء قدرة أنWiesner (1884) أضاف ولقد وراثية صفة هى التكشف على المقدرة النباتى الجزء حجم وأن القطبى النظام إلى تخضع التكشف على الخلية أو النباتى

Rechinger للعالم تجربة للتكشف. ففى المحددة العوامل أحد يكون قد المستخدم رمل من تربة على هاضعوو واألفرعأ روالجذ أو انقيالس من أجزاء أخذ طريق عن(1893) كاملة نباتات إنتاج على قادرة مم20 عن سمكها يزيد التى األجزاء أن الى أشار رطب

األساس كانت التجارب وهذه النمو فى فشلت مم1.5 عن سمكها يقل التى أن حين فى العملية والتطبيقات النظرية األسس لتفسير المعملية الزراعة دور لدراسة مهد الذىاألنسجة. زراعة لعلم

النباتي11ة األنسجة و الخاليا زراعة مجال فى أساسية موضوعات ثالث نتناول سوفهى: و

.النباتية األنسجة زراعة معمل أوال: مكوناتالمغذية(. )البيئات الغذائى الوسط: ثانيا)الموز(. النباتية األنسجة زراعة بإستخدام للنباتات الدقيق : اإلكثار ثالثا

2

مكونات: النباتية أوال األنسجة زراعة معمل

Plant Tissue Culture Laboratory خاص11ة مختبرات أو معامل في معقمة ظروف تحت النباتية األنسجة زراعة تجرى

وأن معين1ة ش1روط فيه1ا تت1وافر أن األنس1جة( ويجب زراع1ة أومخت1برات )معامل تسمى وأن الملوث11ة دقيقةال الكائنات جميع من خالى المعمل يكون أن ويجب خاصا تجهيزا تجهز والبيئ11ات. إن الم11زارع تل11وث أن يمكن وال11تي المترب11ة والط11رق األماكن عن بعيدا يكون والدراس11ات األبح11اث وهدف نوعية على األساس فى يعتمد األنسجة لزراعة معمل إنشاء النظ11ر العمل. بغض هذا إلنشاء المعدة الميزانية وكذلك المعمل داخل جرىت سوف التى المثال سبيل على منها الهدف كان إن المعمل داخل تستخدم سوف التى التقنية نوع عن

الجين11ات ونقل الوراثى التحسين تجارب إجراء أو الثانوية المركبات إنتاج أو النباتات إكثاريأتى: ما على تشتمل والتى للمعمل األساسية الركائز توافر من فالبد النبات إلى الهامة

والتخزين. للغسيل مكان-1

وتخزينها. وتعقيمها البيئة إلعداد مكان-2

والزراعة. التعقيم عمليات إلجراء غرفة-3

والرطوبة. والضوء الحرارة فى للتحكم بنظام مزودة للنمو غرفة-4

النتائج. على المالحظة عملية إلجراء غرفة-5

كاآلتى: المكونات هذه ونستعرض

Washing and Storage Room لألدوات ومخزن الغسيل - غرفة1

من مصنعة جيد صرف ذات أحواض به متسع مكان الغسيل غرفة تشمل أن يجب بمص11در وم11زودة المعم11ل داخ11ل تس11تخدم ال11تى والقلويات األحماض لمقاومة الرصاص

k والباردة الساخنة للمياه الم11زدوج التقطير جهاز عليها يوضع عملمناضد وجود على فضالDuble distilled water النقع عملية إلجراء ستانلسإو بالستيكية أحواض أطباق، . غسالة

ش11فط بجهاز مزودة الغرفة تكون أن يجب للغسيل، وفرش هوائى مجفف بها، والشطف أح11د هن11ا نق11دم س11وفو أخ11رى. م11رة التل11وث من المغس11ولة األدوات لحماي11ة لألترب11ة

(.1 )شكل األنسجة زراعة لمعمل الهندسية الرسومات

النباتية األنسجة زراعة لمعمل نموذجى تخطيطى ( رسم1) شكل

A2 للمعمل - ترابيزة1 والتعقيم الغذائية البيئات إعداد - غرفة- الجاف للتعقيم - فرن4 مائى - حمام3 التعقيم جهاز مكان

3

B -للغسيل مزدوج - حوض2 معمل - ترابيزة1 غرفةغسيل

مثل الهوائى للتجفيف -مكان4 الغسيل وفرش الغسيل لمواد - مكان3التجفيف. لفرن - مكان5 األرفف

C3 فريزر وديب - ثالجة2 للعمل - ترابيزة1 للتصوير مظلمة - غرفة - للغسيل. حوض

Dوالزجاجات. الكيماويات لتخزين -غرفة

Eوه11و للزراع11ة ويس11تخدم لله11واء منقى جه11از وه11و -الهود1 والنقل الزراعة - غرفة للتعقيم. تستخدم بنفسجية فوق أشعة بجهاز مزود

Fــرف ــزودة - غ ــام م ــرارة فى للتحكم بنظ ــاءة الح ــذلك واإلض ــترة وك الفللزراعة. - أرفف2 رج -جهاز1 الضوئية.

Gــيزات من بكــل مــزود الرئيســى - المعمــل - مك11ان1 ومكــاتب معمــل تراب - س11خان3 عش11رية( أرقام4-3) حتى مايقيس ومنها موازين -عدة2 للميكروسكوب

-6 المعملية لألدوات - مكان5 األيدروجينى األس قياس - جهاز4 مغناطيسى مقلب ذوب ، أ بين اتصال - مكان7 مزدوج مياه تقطير جهاز

Hتحكم بجهــاز مــزود المعمــل خــارج والنقل األقلمة لعمليات - مكان والرطوبة. والضوء للحرارة

ومخــزن الغســيل غرفــة فى الموجــودة األدوات بعض يلى وفيمــالألدوات:

الزجاجية األدوات- أ

)ب1يركس( ويك1ون للح11رارة المق1اوم الن1وع من الزجاجي1ة األدوات تكون أن يجب الزجاجي11ة األدوات لغس11يل المثلى الخدش. الطريق11ة أو للكسر قابلة غير كانت إذا أفضل

كرومات داى الصوديوم Sodium dichromat-sulphoric acid محلول فى النقع طريق عنk األق1ل على س1اعات4 لم1دة الكبريتيك حامض على الكبريتي1ك ح1امض لخط1ورة ونظ1را س11اعة16 )الكلوراكس( لم11دة مثل المطهرة المحاليل اآلن يستخدم فإنه والعيون الجلد

م11اء فى الش11طف يع11اد ثم الص11نبور من جارى ماء تحت تشطفو الزجاجات خذؤت ثم نقعk الغسيل كان مقطر. إذا تعام1ل الزجاجي1ة فاألوعي1ة األطب1اق غساالت إحدى فى ميكانيكيا

م11اء فى تنق1ع النظاف11ة من دق11ائق. ولمزي11د10 – 5 لمدة م° 70 درجة على بالمطهر لم11دة المعدنية األيونات منه منزوع ماء بواسطة تشطف أخرى. ثم دقائق5 لمدة ساخن

k تشطف ثم دقائق3 األوعي1ة توض1ع الزجاج1ة األدوات مقطر.ولتجفيف ماء بواسطة نهائيا بعض وفى س11اخن ه11وائى مجف11ف أى أو عالي11ة ح11رارة درج11ات ذات ف11رن فى الزجاجي11ة

بالم11اء إزالت11ه من فالب11د األوعي11ة بعض فى ملتص11ق البيئ11ة آج11ار من بعض يوج11د األحي11ان المعامل11ة قب11ل لآلج11ار س11يولة عملي11ة إلج11راء التعقيم جه11از فى وض11عة أو الس11اخن

بالمطهرات.

البالستيكية األدواتب-

زراع11ة معامل فى البالستيكية األدوات من العديد إستخدام األخيرة الفترة فى أبد نال ,ج.ن كورن,)فالكون مثل الشركات من العديد إنتاج من باألشعة معقمة تكون األنسجة

م11ع ولكن تع11دم ثم فق11ط واح11دة م11رة س11تخداماال تك11ون األدوات ( وه11ذه جية ونال جين أك11ثر س11تخدامهاإ يمكن بالس11تيكية أدوات إنتاج إلى اإلحتياج ظهر البالستيك أسعار إرتفاع

وتنق11ع الق11وة متوس11طة المطهرات أحد بواسطة تشطف أن يجب األدوات هذه.مرة من المس11تخدمة الخط11وات وتختلف المعقم المقطر الماء فى ثم الساخن الماء فى ذلك بعدk الغسيل فى التالي1ة الخط1وات راعىت1 ولكن البالس1تيكية األدوات س1تخدامإو لن1وع طبق1ا

يلها: لغس

4

الكلورف11ورم – األسيتون – الكحول مثل العضوية المذيبات بإحدى تشطف-1كليرك(.أ البولى مع هذه تستخدم وال

باستخدامها ينصح ال المعاملة وهذه الصوديوم كربوناتيب محلول فى تغلى-2كليرك. ألا أو إيثلين البولى من المصنعة األدوات مع

األقل. على ساعات4 لمدة الصوديوم بيكربونات محلول فى تنقع-3

8 لم1دة عي1ارى واح1د األي1دروكلوريك ح1امض محل1ول فى ذل1ك بع1د تنقع-4 تش11طف ثم أخرى ساعات3 لمدة النتريك حامض محلول فى ثم ساعات

k وتحفظ تجفف ثم مقطر ماء بواسطة ذلك بعد األتربة. عن بعيدا Media Preparation Roomالغذائية البيئات إعداد - غرفة2

الالزم11ة والفراغ11ات اإلس11تعدادات هب يكون أن يجب الغذائية البيئة إعداد مكان إن الغذائي1ة البيئ1ة إلع1داد الالزم1ة األدوات وكل الزراعة أوعيةو أدوات و الكيماويات لتخزين

قي11اس جه11از – ماص11ات – كاس11ات – - دوارق حساس ميزان – بمقلب تسخين جهاز مثل جه11از – ميكرووي11ف ف11رن بالغ1از، م11زودة بنزن - موقد مائى حمامpH األيدروجينى األس الغذائي11ة البيئة وإعداد لطبخ عادية حلل أو عالى ضغط ذات طهى حلة أو أوتوكالف تعقيم البيئ11ة لتفريغ وذلك تفريغ أو شفط - جهاز رج وجهاز الثالجات مثل ضرورية أجهزة وهناك

تجميد. - جهاز الهواء من

Culture Room الزراعة - غرفة3

جميع إتخاذ عند وجاف نظيف مكان فى بنجاح األنسجة زراعة تقنيات إجراء يمكن الزراع11ة. إن فى المس11تخدمة األدوات إلى ملوث11ات أى دخ11ول لمن11ع الالزم11ة اإلحتياطات

ومطه11ر مغل11ق بالس11تيك ص11ندوق س11تخدامإ هو األنسجة زراعة معامل فى الطرق أبسطk الص11ندوق أرض11ية تطه11ر أن البنفس11جية. على ف11وق األش11عة إس11تخدام بواس11طة جي11دا

95k إيثانول كحول باستخدام علي11ه يطل11ق م11ا أو خشبى صندوق إستخدام يمكن % وأيضا الب11اب يك11ون أن ويجب وقفل11ه فتحه يمكن الزجاج أو البالستيك من أمان باب )الهود( وله

يدي11ه بإدخ11ال األخصائى يقوم الهود داخل العمل . وألداءهوائية ستارة لألتربة بمانعة مزود إلى إدخاله11ا قبل بالكحول يديه تعقيم مراعاة مع منه المطلوب العمل ويؤدى الهود داخل م11ا مش11اهدة يمكن11ه الزج11اجى الب11اب من فان11ة الح11ال وبطبيعة الهود داخل العمل مكان مح11دودة. س11عة ل11ه ولكن القليلة العمليات فى الهود ستخدامإ الهود. ويمكن داخل يجريه الهود داخل األعمال من العديد إجراء إلى واالحتياج األنسجة زراعة فى العمل تقدم وعند

UV ال1 بواسطة معقمة كبيرة غرفة ستخدامإ منه. أمكن أخرى أنواع األسواق فى ظهرت حيثHEPA فل11تر مث11ل الفالتر من مجموعة بواسطة األتربة من منقى هواء يدخلها بحيث,99 إلى99.97 من كفاءته تصل والكائن11ات لألترب11ة الس11ماح ع11دمب تق11وم % وه11ذه99

علي11ه يطل11ق م11ا وه11و األنسجة زراعة معامل معظم فى يستخدم وهو منه بالنفاذ الدقيقةLaminar)الهود( airflowاله11واء ي11دفع ص1غير موت11ور بواسطة مزود جهاز عن عبارة وهو

فل1تر إلى اله1واء يمر ذلك بعد ثم الحجم الكبيرة العالقة األتربة زتحج التى الفالتر أحد فىk يدفع إما والهواءμ 0.3 )ميكرون( HEPA دقيق k أو رأسيا )الهواء العمل منطقة فى أفقيا

k يكون الفالتر منطقة من القادم ح11والى والفطري11ات( وس11رعته والبكتريا األتربة من خاليا27 3أوراق من الخارجى للتلوث مصدر أى إزاحة على قادرة السرعة وهذه م/ دقيقة الكابينة. داخل العمل منطقة عن أتربة أو شعر أو

منها الباحث يختار مختلفة وأحجام مختلفة بأسعار متوفر الكبائن من النوع وهذا على يؤثر ال الكابينة داخل الهواء وتيار به يعمل الذى المكان وسعة العمل حجم يناسب ما

حال11ة وفى.الم11دفوع لله11واء المعتدل11ة الس11رعة حيث به11ا اللهب مص11در أو البنزين موقد ذات غ11رف فى الكابينة هذه باستخدام ينصح الترابى والجو حارة والشبه الحارة المناطق

k وممنوع الفالتر عمر إلطالة وذلك مزدوجة أبواب k منع11ا أو ب11اب الكابين11ة تواج11ه أن قاطع11االغرفة. فى شباك

5

األنس11جة لزراع11ة معقم كمك11ان )الهود( تس11تخدم النباتية األنسجة زراع1ة وكابينة البيئ11ة على المحتوي11ة البالس11تيكية أو )الزجاجي11ة س11واء األوانى في النباتي11ة واألعض11اء

ومالق1ط )س1برتاية( ومش1ارط كح1ول موق1د أو ب1نزن موق1د اله1ود في المعقمة( ويجه1ز ال11تي الزجاجي11ة األوانى لنق11ل وأس11بتة ت11روللى على الزراعة حجرة كذلك وتحتوى معقمة بق11در لإلقالل هوائي11ة س11تارة أو الزراع11ة لغرف11ة باب11ان ويوج11د الحض11انة غرفة إلي زرعت

فق11ط بالعم11ل الق11ائمين لألشخاص الحجرة هذه في الدخول وي1فضل التلوث من اإلمكاناإلمكان. بقدر التلوث من لإلقالل وذلك

أو األرفف بعض على تحتوى التي الرأسية الحوامل بعض يوجد الحجرة هذه وفي إلكثارها نباتات على المحتوية واألوعية البيئة على المحتوية األوعية لوضع وذلك ترابيزة األجزاء غسيل في يستخدم الذى المعقم المقطر الماء على تحتوى التي األوعية وكذلكاإليثانول. كحول )الكلوروكس( أو الصوديوم هيبوكلوريت في النقع عملية بعد النباتية

Incubation Room التحضين - غرفة4

k البيئية العوامل تؤثر ف11إن ول11ذلك تكش11فها وك11ذلك الم11زارع نمو عملية على كثيرا الح11رارة درج11ة فى بداخل11ه التحكم يمكن مك11ان فى تحف11ظ األنس11جة م11زارع أنواع جميع

الس11ائلة والم11زارع المت11وك أو البروتوبالس11ت مزارع الهواء. إن ودورة والرطوبة والضوء ل11درجات برنامج يوضع أن يجب ولذلك الكالوسات مزارع عن التحكم لظروف حاجة أكثر

ساعة.24 مدار على واإلضاءة الحرارة

k عن م. أم11ا 2º 25 والم11زارع الكالوس11ات لنم11و المثلى الحرارة درجة عموما الغرف11ة فى الن11امى النب11ات حس11ب تتب11اين فإنه11ا الض11وئية الف11ترة وطول ةءاإلضا درجات الغ11رض. وأغلب ل11ذلك ميق11اتى منظم أو س11اعة إستخدام طريق عن العمل فترة وتنظيم كثاف11ة الى يحتاج والبعض لوكس كيلو واحد عن قوته تزيد ال خافت ضوء فى تنمو النباتاتk ل1وكس كيل1و10الى5 عالية ضوئية ت1ام. إظالم فى النم1و الم1زارع بعض تتطلب وأحيان1ا

k البحث من الغ11رض حس11ب آلخ11ر وقت من فيه11ا التحكم يمكن العملي11ة ه11ذه فإن وعموماالنامى. والنبات النامية المزرعة ونوع

%98 – 20 من تتب11اين فإنه11ا النم11و غ11رف داخ11ل للرطوب11ة المئوية النسبة أما داخ11ل النم11و ألرفف الرطوبة. وبالنسبة فى التحكم أجهزة طريق عن فيها التحكم ويمكن عن مس11تقلة إض11اءة بوح11دة م11زود رف وك11ل الخشب من أو الزجاج من كونت قد الغرفةk اآلخر الح11رارة توزي11ع تنظيم يتم حتى الرف جوانب أحد على صغيرة مروحة توضع وأحيانا إض11اءة وح11دات س11تخدامإ المفض11ل ومن اإلض11اءة وح11دات اس11تخدام عند ثعتنب قد التى

الن11وع من ممكنة حرارة أقل أو استخدامها عند حرارة أى تصدر ال فلورسنت باردة بيضاءCool Whiteإم1ا ص1وانى فى توض1ع أو األرف1ف على مباش1رة إم1ا الزراعة أوعية وتوضع

المعمل. داخل معها والتعامل النقل لسهولة األلومنيوم من أو بالستيكية

األساس11ية المعلوم11ات بعض متض11منة الزراع11ة أوعية على ورقة توضع العادة فىk ال11تى الغذائي11ة والمعامل11ة النب11ات ون11وع الزراع11ة وتاريخ التجربة نوع مثل بداخل11ه. أحيان11ا

أفض11ل فيه11ا التحكم يمكن الحضانات هذه داخل وفى الحجم كبيرة نمو حضانات تستخدم انقط11اع . إنالنم11و حضانات فى خاصة مواصفات توفر من المجهزة. البد النمو غرف من

الم1زارع فى النامي1ة خاص1ة الخاليا أوموت توقف إلى يؤدى قد وارد وهذا الكهربائى التيار فص11ل بمجرد يعمل إحتياطى كهربائى مولد توفر من البد ولذلك الرج أجهزة على السائلة

المعمل. عن األساسى الكهربائى التيار

األنس11جة لزراع11ة المطلوب11ة البيئ11ة ب11الظروف مجهزة كهربائية حضانات تكون قد نظيف11ة حج11رة تك11ون اإلمك11ان. وق11د بقدر حرارتها ودرجة إضاءتها في حكمتت أرفف وبها

أرف1ف به1ا يوج1د رأس1ية حوام1ل عن عب1ارة وهيStands به1ا يوج1د اإلمكان بقدر معقمة س1اعة16 غالب1ا اإلض1اءة( وهي فترة )لضبطTimer الوقت لضبط بجهاز ومزودة مضاءة الح11رارة درج11ة لضبط تكييف أجهزة على الحجرة هذه وتحتوى إظالم ساعات8 و إضاءة

Lux جه11از وك11ذلك اإلمكان بقدر المطلوبة meterتحت11وى كم11ا الض11وئية الكثاف11ة لقي11اس اليوج11د أنها حيث للغرفة الداخلى الهواء لتجديد وذلك هوائية مرشحات على أيضا الحجرة

6

واألش11خاص. النباتات وخروج لدخول فقط واحد باب ماعدا أخرى منافذ أي أو شبابيك بها أمت11ار3-2و 5بطول الحديد أو األلوميتال من رأسية حوامل أربعة عن عبارةStands والالفلورسنت. بلمبات مضاءة وهي سم50 - 40 واآلخر الرف بين أرفف5 - 3 من وبها

المعلومات وجمع المالحظة - غرفة5

Observation or Data Collection Area

على الحضانات داخل النمو غرفة فى إما الدوارق داخل النموات متابعة تجرى ولذلك النمو ظروف نفس فى المتابعة تكون أن يجب إنه حيث متساوية متقاربة فترات معقمة منطقة أى أو المعقمة الهوائية الكابينة فى أو النمو غرفة فى إما المزارع تفحص إلى المزارع تأخذ أن يمكن الميكروسكوبى للفحص بالنسبة المزارع ونقل لتجديد صالحة

تنقل األنسجة مزارع من أو الكالوسات من الناتجة الميكروسكوب. النباتات يوجد حيث والفيرموكوليت موس البيت مثل صناعية تربة على تحتوى صغيرة أصص إلى ذلك بعد

مع ذلك بعد الزجاجية الصوبة إلى تنقل ثم النمو غرفة فى وتوضع عناصر عدة من مكونةوالرطوبة. الضوء و الحرارة درجة عن المالحظات وتسجيل لها الدورى الفحص دوام

النباتية األنسجة زراعة معمل ملحقات

األقلمة أوال:حجرة

صغيرة-أسبتة موس-أصص البيت باالت أو أكياس فيها تتوافر حجرة وهي لحمل أوبنشات بالستيك-ترابيزات المنزرعة-أكياس الصغيرة األصص بها توضع بالستيكية

ضوء يكون أن ويفضل بالرذاذ الرى يكون أن وي1فضل للرى البالستيكية-وسيلة األسبتةمباشر. الغير الشمس بضوء اإلضاءة أوتكون الفلورسنت لمبات باستخدام الغرفة

المختلفة بأنواعها ثانيا:الصوب

لتوفير وتستخدم ثمنها لرخص وذلك إستعماال األكثر وهي البالستيكية - الصوب1الشتاء. فصل برودة وخاصة البرودة من النباتات وحماية ونمو لتربية الالزمة الحرارة

الظروف كل في التحكم فيها يتم حيث الصوب أنواع أجود هي الزجاجية - الصوب2الرطوبة. نسبة وكذلك الضوئية الضوئية-والكثافة الحرارة-الفترة درجة من البيئية

الظل. نباتات إلنماء تستخدم وهذه الخشبية - الصوب3

منها تستخرج سوف التي الجافة األزهار لحفظ تستخدم وهذه السلكية - الصوب4البذور.

الكمبيوتر باستخدام البيئية ظروفها ضبط في يتحكم بحيث الصوب هذه وتعمل فصل في وخاصة النباتات لنمو المناسبة الحرارة توفير هو الصوب هذه من الغرض.

نخفاضإ يزيد حيث الليل أثناء وخاصة منخفضة حرارة درجة ذو الجو يكون حيث الشتاء التى النباتات مع وهذا خاصة مدافئ باستخدام ليال تدف1أ الصوب هذه فإن الحرارة. لذلك

الحرارة. درجة بانخفاض تتأثر

ثالثا: الحقل

العضوية بالمادة غنية الصرف جيدة خفيفة صفراء الحقل تربة تكون أن يجب يتوفر وأن الذبول وأمراض النيماتودا وخاصة األمراض من خالية وكذلك األمالح من خالية

األمالح. من خالية فية هالميا تكون للرى مصدر

الزجاجات وإستعمال الغسيل عند الرئيسية المالحظات بعضاألنسجة زراعة معمل داخل

7

أن يجب األنس11جة زراعة معمل داخل مرة من أكثر تستخدم التى األدوات-1 الم11اء فى وتنق11ع مباشرة العمل من االنتهاء بعد الغذائية البيئات من تفرغ

األوعية. داخل األجار أو البيئات تجف أن يسمح وال

المطه11رات مث11ل الكيماوي11ات فى المس11تخدمة األدوات تع11زل أن يجب-2k العضوية والمذيبات الزراعة. فى المستخدمة الزجاجات عن بعيدا

تعقم أن يجب الملوثات من أى الصقت أو تلوث بها حدث التى األوعية كل-3أخرى. مرة االستخدام قبل

أوانى على ب11الحبر بيان11ات أى أو الزجاج11ات على ملص11قات أى إزالة يجب-4الكحول. أو األسيتون إستخدام طريق عن الغسيل قبل الزراعة

تجم11ع أن يجب الزراع11ة بع11د األوعي11ة داخ11ل الموج11ودة البيئ11ة أو اآلج11ار-5 هذا يعقم أن يجب ملوثات هناك كان إن المعمل من بسرعة منها ويتخلص

منه. التخلص قبل األوتوكالف داخل جارآلا

محاليل فى نقعها ويحذر مقطر ماء فى تنقع أن يجب البالستيكية األغطية- 6الكيماوية. المطهرات أو الصابون

بمحل11ول تعام11ل أن يجب الزراع11ة فى المس11تخدمة الزجاجي11ة األوعي11ة-7الجدر. على البروتينات من نوع أى إلزالة حامضى

عن منفص11لة توض11ع أن يجب الس11ليكون من المص11نعة الزجاجي11ة األوعي11ة-8k بالمعمل األخرى األوعية . معلمة تكون ما وغالبا

الزجاجية: األوعية غسيل عند مراعاته يجب ما

% لم11دة5 ترك11يز ذات المطهرات أحد فى الزجاجية األوعية تنقع أن يجب-1األقل. على ساعة

على الغس11االت وت11برمج مطه11رات أى توض11ع ال توماتيكىواأل الغسيل فى-2 واح11دة م11رة المقط11ر بالم11اء ثم م11رات5 العادية بالمياه الشطف أساسالغسالة. فى وضعها قبل المطهرة بالمحاليل األدوات تعامل أن ويمكن

يمكن الغس11الة فى إدخاله11ا يمكن ال التى الحجم الكبيرة الزجاجية األوعية-3 ثم م11رات6 إلى5 من الصنبور بماء شطفها طريق عن خارجها تغسل أن

واحدة. مرة مقطر بماء

باس11تخدام طريق11ة أى ف11إن الميك11انيكى الغس11يل إمكاني11ات تت11وفر لم إذا-4الغرض. تؤدى األحجام مختلفة فرش ذات ماكينة

باألحماض: الغسيل عند مراعاته يجب ما

..قفاز وكذلك للوجه قناع بالغسيل يقوم الذى الشخص يرتدى أن يجب-1

م11زود مك11ان فى الزجاجي11ة األدوات ونق11ع باألحماض الغسيل يتم أن يجب-2لألبخرة. شفط بآلة

الماء. إلى الحامض يضاف التخفيف وعند الحامض إلى الماء إضافة يحذر-3

اللون إلى المحلول تحول عند باألحماض الغسيل بواقى من التخلص يجب-4األسود.

النمو: غرف أو للحضانات العامة الصفات

م. ° 40-2 من تتراوح بها الحرارة درجات-1

م. 0.5° بمقدار يكون أن يجب الحرارة درجة فى التحكم-2

الحرارة من والدنيا القصوى للدرجة بالنسبة أمان ذات تكون أن يجب-3

8

الحرارة. لدرجات دائم مسجل بها يكون أن يجب-4

للض11وء بالنس11بة س11اعة24 لم11دة البرمج11ة على ق11درة ذات تك11ون أن-5والحرارة.

لوكس.10.000 من ألكثر إضاءة بها يوضع أن تتحمل-6

%.98 – 20 من تتراوح بها الرطوبة نسبة-7

. 3% بمقدار هافي التحكم يكون الرطوبة نسبة-8

بانتظام. للهواء موزع بها يكون أن-9

مساحة.2 م0.5 لكل 3 م0.7 بمعدل الحجمية السعة يكون أن-10

األنسجة زراعة معمل فى توافرها يجب التى واألدوات األجهزة

في تتوفر أن يجب التي واألجهزة األدوات بأهم أوال- قائمة:األنسجة زراعة مختبر أو معمل

لترات.5 و1و مل250 و125 و100بأحجام مخروطيةFlasks دوارق - 1

لترات.3 و2 و1 و مل500 بأحجام معيارية دوارق - 2

واحد. ولتر مل500 و100 و50 و25 باحجام مدرجة مخابير - 3

مل.10 و5 و2 و1 بأحجام مدرجة ماصات - 4

باس1تير. ماصات - 5

لزراعة ا أوعية - 6

ولها التعقيم عمليات تتحمل البيركس زجاج من تصنعTest tubes إختبار - أنابيب أ مع العالية الحرارة درجات لتتحمل Polypropylene مادة من تصنع شف1افة أغطية

المراحل في الزراعة في تستخدم األنابيب التعقيم. وهذه عملية أثناء الضغط نبات إليها ينقل أو أنبوبة في مرستيم كل فيزرع المرستيمات زراعة مثل األولىس.والكال من تكشفة بعد النخيل

لها والكبير والمتوسط الصغير منها مختلفة )برطمانات( بأحجام - زجاجيات ب الثانية المرحلة في تستخدم وهذه التعقيم عملية تتحمل شفافة بالستيكية أغطية

اإلكثار(. )مرحلة

مرحلة في تستخدم التع1قيم عملية تتحمل شفافة بالستيك بأغطية - ماجينتات جاإلكثار.

معقمة وتباع البالستيك من أو تعقم وهذه الزجاج من تصنع وهي بترى - أطباق د تقسيمها لحين البطاطس نباتات بها توضع وهذه واحدة مرة إال التستعمل وهذه

)الهود(. األنسجة زراعة كابينة فى الزراعة عملية أثناء الموز نباتات لتفصيص أو

غسيلها. قبل الزجاجيات لنقع بالستيك جرادل - 7

غرفة أو الحضانة داخل الحرارة درجات لقياسDigital Thermometer ترمومتر - 8الحرارة. درجة لضبط وذلك الزراعة

درجة على التع1ق1يم يتم وعادة وتعقيمها والزجاجيات األوعية لتجف1يفOven فرن - 9 على م210 حتى الفرن يعمل أن يجب ولذلك ساعات3 لمدة م180 حرارةاألقل.

تعقيمها أثناء ( في إختبار )أنابيب الصغيرة البيئات أوعية بها توضع سلكية سالل - 10الفرن. في تجفيفها أثناء الصغيرة والزجاجيات األوتوكالف في

9

يفضل و المياه تقطير جهاز .وWater Deionizer الماء من األيونات نزعل جهاز - 11والرواسب. األمالح من خالية مقطرة مياة على نحصل منه و زجاجى هوما

جهاز من الناتج المقطر الماء لتخزين لتر20 و10بحجمى بالستيكية أوعية - 12التقطير.

حوالي جدا الصغيرة الكميات لوزن حساسة( أحدهما )موازينBalances وازينم - 13 لوزن عشريان رقمان والثانى الهرمونات لوزن الجرام من عشرية أرقام4 أو3

المستخدمة. البيئة وأمالح السكرواآلجار مثل نسبيا الكبيرة الكميات

المركبات إلذابةMagnetic stirrer مغناطيسى قالب معHot plate سخان - 14اآلجار. وإذابة الكيميائية

بالترشيح. التع1قيم عملية لتسهيل تفريغ مضخة - 15

مجمدة. أو سائلة المحاليل لتخزين مختلفة بأحجام بالستيك قنينات - 16

تحضر التي القياسية والمحاليل اويةالكيم المركبات لتخزينRefregerator ثالجة - 17. البيئات منها

والهرمونات أطول لفترات القياسية المحاليل لتخزينDeep Freezer فريزر ديب - 18الهند. جوز ولبن اإلنزيمات وبعض

والبيئات. اآلجار إلذابةSteamer بخار توليد جهاز - 19

اللوغاريتم ويقرأ والمحاليل للبيئات pHال وضبط لقياسpH meter جهاز - 20 من ويقرأ اآلجار إضافة وقبل البيئة محلول في الهيدروجين أيون لتركيز السالب

to 5.6 الصلبة وللبيئةto 5.5 5.2 الس11ائلة لل1ب1ي1ئ1ة . وهوpH 14 إلي صفر مدى5.8.

ضغط تحت لبخار با تعقيم أجهزة وهي طهي قدور أوAutoclave أوتوكالف - 21 م121 حرارة درجة على التعقيم ويكون المقطر والماء البيئات لتعقيم تستخدم

ولمدة المربعة رطل/ البوصة15 أو2/سم . كجمto 1.5 1.2 جوى ضغط تحت الحرارة وضغط( فدرجة حرارة )من السابقة دقيقة(. الظروف20) ساعة ثلث فتح ذلك يلى التعقيم فترة إنتهاء بعد ثم غليانها وبدون البيئة تعقم الضغط مع

غليان في فيتسبب فجأة يفتح وال الضغط ينزل حتى وببطئ برفق الضغط صنبور -5 ةفتر وتركة الصفر إلي الضغط نزول من التأكد وعند األغطية وتطاير البيئة

لتبرد ووضعها البيئ1ة وإستخراج األوتوكالف غ1ط1اء فتح في يبدأ بعدها دقائق10 السميك القماش من أو الجلد من جوانتى هناك يكون أن إستعمالها. ويجب لحين ومن ساخنة األوانى تلك تكون حيث األوتوكالف من البرطمانات لرفع وذلك

أفقى. هو ما هومن رأسى ماهو األوتوكالف

)مرشحات بالترشيح المحاليل لتعقيم ومواسكها تعقيم مرشحات أغشية - 22بكتيرية(.

بالترشيح. المع1قمة المحاليل مع اإلستعمال لغرض معقم1ة بالستيكي1ة حقن - 23

حجرة من واألدوات البيئات لنقل مناسبة بصوان )تروللى( مزودة صغيرة عربات - 24 إلي الزراعة حجرة ومن زرعت التي األوعية ونقل الزراعة حجرة إلي البيئة

التحضين. حجرة

في األدوات بغمس وذلك األدوات لتعقيم بنزن مصباح أو )شعلة( كحول لمبة - 25 ألنها الشعلة مجال في العمل يكون أن ويجب لتشتعل للهب تعريضها ثم الكحول

حولها. الذى المجال تعقم

العزل حجرة أو الهود % داخل70 المخفف الكحول لرش صغيرة رشاشات- 26 قبل الخارج من البرطمانات بها تعقم بالعمل. وكذلك الق1ائم تع1ق1يم وكذلك

10

عملية أثناء)رذاذ( بالماء الصغيرة النباتات لرى تستخدم وأيضا اإلستخداماألقلمة.

لزراعة غيرحادة أطراف ذات اليصدأ الذى الصلب من كبيرةForceps مالقط-27الكبيرة. األوعية في الكبيرة األجزاء

األوراق. بشرة لنزع حادة أطراف ذات الصلب منForceps مالقط-28

الصغيرة. األوعية في الصغيرة األجزاء لزراعة صغيرةForceps مالقط - 29

للتشريح. دقيقةNeedels إبر - 30

.13 - 12 - 11 - 10 رقم ومنها النباتية األنسجة لتقطيع حادةScalpels مشارط - 31

في يستخدم وكذلك الحجم مجهرية األجزاء لرؤيةBinocular العينين ثنائى مجهر - 32المرستيمات. فصل

بقدر المطلوبة الحرارة درجة على للمحافظةAir Condition هواء مكيفات - 33 النباتات نمو على يساعد هذا ألن التحضين وحجرة الزارعة حجرة في اإلمكان

التحضين. حجرة في األوعية داخل جيدا نموا

مزارع وكذلك السائلة منتظمة( المزارع )بحركة وتحريك لهزShaker هزاز - 34 يجعل وكذلك المنزرعة األنسجة جميع بين الهواء وتخلل التهوية فيسبب الكالس

المنزرع. النسيج أجزاء كل تالمس السائلة البيئة

النمو حجم تحديد بغرض الخاليا لترسيب صغيرCenterfuge مركزى طرد جهاز - 35الخلوى.

وحدة فى البروتوبالست و الخاليا لعد)هيموسيتوميتر( ميكروسكوبيه شرائح - 36المساحة.

.Lightmicroscopeضوئى( )ميكروسكوب واألنسجة الخاليا لفحص مجهر - 37

وهو Laminar airflow hoodالهود( أو )الالمينار النباتية األنسجة زراعة كابينة -38 لعمل وآخر المتر حوالي هطول فيكون فقط واحد فرد لعمل هفمن األنواع متعدد لتخليص يعمل وهذا جدا الصغير ومنة سم160 حوالي طولة ويكون فردين هإمرار طريق عن الدقيقة الكائناتو األتربة من الكابينة حيز إلي الداخل الهواء تلوث حدث الهود. فاذا كفاءة يتوقف وعليها )مرشحات( ميكروبية ترافل على

منخفضة كفاءتة فتكون العمل على القائم وخبرة تماما تعقيمة بعد الهود بسبب دون عليها طويل وقت لمرور وهذا منخفضة كفاءتها تكون تراالفل هذه أن بسبب

وقد عالية كفاءتها تظل آخرحتى إلى وقت من تتغير أن يجب اولهذ ت1ت1غير أن المحيط والجو الهود لتعقيمUltra violet lamp البنفسجية فوق أشعة بلمبة يزود

يكون وقد الهود إلضاءة وذلك فلورسنت لمبات هبالهود( وب المحيط الجو )تؤين وقد غاز بأنبوبة هبتوصيل )البوتاجاز( وذلك الطبيعى الغاز لدخول مصدر هب

ومالقط مشارط من العمل أدوات لتعقيم آخر مصدر أي أو سبرتاية يستخدموخالفة.

متساوية. بكميات المطلوبة بالكميات البيئة لصب جهاز - 39

س.والفير إلختبارELISA test بإختبار خاصةال )الكتس( مثل الجاهزة الكيماويات - 40

.Microplate الميكروبليت و الكتس لقراءةReader جهاز - 41

كلوريد على يحتوى متين زجاجى غطاء ذو متين زجاجى إناء وهو المجفف - 42 الهرمونات هب وتوضع جاف اإلناء داخل يجعل بحيث الرطوبة إلمتصاص الكالسيوم

فريزر. الديب داخل ويوضع تميؤها من يخشى التي الهامة والمواد والفيتامينات

11

ومزودة م40 - 4 من وتعمل الحرارة لدرجة بضابط مزودةIncubator حضانة - 43 بها اإلضاءة شدة وتتراوح واإلظالم اإلضاءة فترات لضبطTimer مع إضاءة بوحدة

لوكس.10000 إلي1000 من

ذات وهي البالستيك أو األلمنيوم أو الخشب من تصنع وهيRaks األنابيب حوامل - 44 أنبوبة.36 أو24 أو12 من تحمل وعادة األنابيب لسمك تبعا مختلفة ثقوب

الماء هب ويوضع اليصدأ الذى الصلب من إناء عن عبارةWater bath مائى حمام - 45 اليراد التي المواد وغليان لتسخين ويستخدم الكهرباء بواسطة التسخين ويتم

مباشرة. النار للهب تعرضها

أو اليدين طريق عن التلوث لمنع القفازات تستعمل أحياناGloves قفازات - 46 الذى الكحول مثل التطهير في المستعملة الكيماويات من اليدين بشرة لحماية

من القفازات هذه وتصنع المطهرات بعض من وكذلك جفافها يسبب قدللكيماويات. المقاوم الطرى البالستيك

بالعمل. القائم رأس من شعيرات التسقط حتىOver head الرأس غطاء - 47

بعملية المعقمة البيئة على المحتوية األوعية التتاثر حتى وذلكMask الفم غطاء - 48باإلنفلوانزا. اإلصابة حالة في وخاصة الزراعة عملية أثناء والزفير الشهيق

التتأثر حتى الحذاء على الرتدائة البالستيك من وهوOver shoes الحذاء غطاء - 49 مخصص حذاء هناك يكون أن ويجب ملوثات من األحذية تحملة بما المعمل أرضية

للمعمل.

يمكن وبهذا اإلضاءة شدة يقيس جهاز وهوLux meter اإلضاءة لشدة مقياس - 50والحضانات. النمو غرف في يستعمل وهذا المطلوبة اإلضاءة ضبط

البيئة تحضير في وتساعد تستخدم التي الكيماويات . وهيChemicals الكيماويات - 51التعقيم. وفى

الخارج من الهواء دخول لتمنع الزراعة غرفة باب على تركب وهذه هوائية ستارة - 52الغرفة. باب فتح عند الداخل إلي

رواسب. على تحتوى التي المحاليل لترشيح وذلكFilter papers ترشيح ورق - 53

للمعمل المختلفة الغرف على األجهزة توزيع

Media preparation البيئات إعداد -غرفةأ

والكهرباء. والغاز للماء - مصدر1

للغازات. وتفريغ شفط - جهاز2

للتسخين. حرارى مصدر أو مائى - سخان3

المغناطيسى. قلبمال ذوات من كهربائى - سخان4

وإذابتها. البيئة إلعداد للصدأ قابلة غير جديدة أوعية أو - زجاجيات5

مضغوط. بخار معقم )أوتوكالف( أو تعقيم - جهاز6

. pHاأليدروجينى األس لقياس - جهاز7

جرام(.ي)مل حساس - ميزان8

األحج11ام ماص11ات( مختلف11ة – كاس11ات – دوارق – مدرج )مخبار زجاجية - أدوات9بترى اختبار- أطباق وأنابيب

من مناسبة وأغطية مناسبة فوهات ذات للزراعة زجاجات أو للزراعة - أنابيب10البالستيك. األلومنيوم، ورق أو المطاط أو القطن

12

إب11ر – مالق11ط – مش11ارط – مقص11ات مث11ل والتقطي11ع والتشريح للنقل - أدوات11وخالفه. تشريح

ويف. ميكرو ستخدامي قدو اآلجار إلذابة عالية حرارة درجة ذو هوائى - فرن12

مزدوج. تقطيرماء جهاز وكذلك الماء من األيونات لنزع - جهاز13

. الترشيح طريق عن والتعقيم للترشيح أغشية وكذلك شيحرت - جهاز14

مخالي11ط أو جاف11ة ص11ورة على س11واء الغذائي11ة للبيئ11ات الالزم11ة - الكيماوي11ات15النمو. منظمات فيها بما جاهزة

ومطهرات. - منظفات16

لألحماض(. )مقاوم الماصات لغسل - وعاء17

األدوات. من المياه وتصفية للتجفيف - أرفف18

أخرى. وأشياء المعقم الماء الكيماويات، الزجاجية، األدوات لتخزين - أماكن19

والتجديد الزراعة عملية أثناء توافرها من البد ب- أدوات

معقمة. تكون وهذة األنسجة زراعة - كابينة1

بنزن. موقد مثل للهب - مصدر2

- ميكروسكوب.3

.التعقيمو % للتطهير95 - كحول4

المعقمة. لألجزاء القطع عند الستخدامها معقمة زجاجية أطباق- 5

الهيدروكلوريد. محلول مثل النباتية لألجزاء مطهرة - محاليل6

ــية ج- أدوات ــد رئيس ــا من الب ــل فى توافره General المعمequipment

تجميد. جهاز وكذلك عادية - ثالجة1

توماتيكية.وأ أطباق - غسالة2

والرطوبة. المائية لألبخرة موزع - جهاز3

معدنية. وصوانى – بالستيكية أطباق – ترولى – مثل معملية - أساسيات4

والقلويات. باألحماض الغسيل فى الستعماله مجهز - حوض5

مركب. أو بسيط - ميكروسكوب6

إلحك11ام وب11ارافيلم عليها النباتات لتسجيل ورقية وأدوات الزجاج على للكتابة - أقالم7 فى عرض11ها حال11ة فى أو آخ11ر إلى مك11ان من نقله11ا عن11د وخاص11ة الزجاجيات قفل

معرض.Growth roomالنمو: بغرفة د- أجهزة

م.°27 – 17 بين ما فيها التحكم يمكن حرارة بدرجة - تتمتع1

والحرارة. لإلضاءة وذلك بديل آخر كهربائى - مصدر2

األنسجة. بداخلها المنزرع والزجاجيات الدوارق لوضع - أرفف3

لإلضاءة. فلورسنت - لمبات4

اإلضاءة. ساعات فى للتحكم للوقت - منظم5

13

رج. - جهاز6

المزارع. وفحص المالحظة عملية إلجراء - منضدة7

عليها. السائلة المزارع لوضع - أرفف8

زراع11ة من الناتج11ة للنباتات واألقلمة النقل عملية جراءإل مكان ذلك إلى باإلضافة أو زجاجي11ة ص11وب ص11ورة على والرطوب11ة واإلضاءة بالحرارة فيه التحكم ويمكن األنسجة

صغيرة. غرف

14

Media المغذية( )البيئات الغذائى الوسط : ثانيا

ن11وع طري11ق عن في11ه التحكم يمكن المعم11ل فى النباتية األنسجة وتكشف نمو إن تماث11ل النباتي11ة لألنس11جة األساس1ية اإلحتياج11ات ب11أن العلم م11ع الغ1ذائى الوس1ط وتركيب

الغذائي11ة اإلحتياج11ات أن يتضح العملية خبرتنا الكاملة. ومن للنباتات األساسية اإلحتياجاتk تتباين اإلحتياج11ات مراع11اة الغذائي11ة البيئ11ة إختي11ار عن11د ويجب زرعنالم11 النبات لنوع طبقا

على أفضل تنمو األنسجة بعض هناك المثال سبيل عليها. فعلى منزرع نبات لكل الفعلية ب11ذلت ولق11د ص11حيح والعكس س11ائل غ11ذائى وس11ط فى النم11و عن ص11لب غ11ذائى وس11ط

ال11ذى الغ11ذائى للوس11ط المكونات أفضل ختيارإل الماضية السنوات خالل عديدة محاوالت نتن11اول س1وف الج11زء ه11ذا والتكش11ف. وفى للنم11و األعض11اء أو األنسجة من نوع كل يالئم

. الغذائى الوسط مكونات بالتفصيل

Media Composition الغذائى الوسط - تركيب1

ك11برى )عناص1ر المعدني11ة العناص1ر من مجموعة من عامة الغذائى الوسط يتركب العضوية المواد وبعض السكريات أحد وهو للكربون مصدر إلى صغرى( باإلضافة وعناصر

الم11اء إلى باإلض11افة النمو منظمات وكذلك والفيتامينات األمينية األحماض مثل األساسية األنسجة بعض وهناكgelling agent وادم أحد أو اآلجار مثل الغذائى الوسط تصلب مادةو

مصدر إلى حاجةب وليست المعدنية العناصر مخلوط على فقط النمو تستطيع التى النباتية الفيتامين11ات بعض إض11افة إلى تحت11اج النباتي11ة األنس11جة معظم )س11كر( ولكن الكرب11ون

k القليل11ة األحيان بعض النمو. فى ومنشطات األمينية واألحماض الم11واد بعض يض11اف ج11داالغذائى. الوسط إلى المعقدة

عض11و عليه11ا ي11زرع لكى المتخصص11ة الغذائي11ة األوس11اط أو البيئ11ات من عدد هناك ك11ان الجذور لنمو وضع غذائى وسط أول المثال سبيل معين. وعلى نسيج أو معين نباتى

ك1انت غ1ذائى وس1ط فى نبتة أول وتكشف أعضاء . وإلنتاجWhite (1934) العالم بواسطة السائلة المزراع لنمو و Murashige and Skoog (M&S) (1962) بواسطة الموضوعة البيئة

والتح11ويرات التعديالت بعض وبادخال Gamborg (1968) العالم بواسطةB5 بيئة وضعت البيئ11ات من العدي11د توبالس11ت. هن11اكوالبر معل11ق لنم11و مناس11بة أص11بحت مكوناته11ا فى

وض1عت البيئ1ة وه1ذه النجيلي1ات مت1وك م1زارع وتك1اثر لنم1وN6 مث1ل فق1ط المتخصص1ةChu العالم بواسطة Nitsch العالم11ان بوس11طةs’ Nitsch وبيئة ،(1978) and Nitsch من وعديد األحمر والبرسيم الصويا فول خاليا لنمو البيئة هذه أستخدمت وكذلك( 1969 ) العناص11ر وع11دد نسب حسب النجاح درجة فى المختلفة البيئات البقولية. وتتباين النباتاتلها. المكونة الغذائية

أن ويجب الغذائي11ة للبيئ11ات المختلف11ة المكون11ات نوضح سوف التالى جدولال فى فى تعطى عض1ويةوال المعدني1ة العناص1ر من المختلف1ة المكون1ات تركيز أن إلى هنا نشير

/ لتر( )مجم وزنية صورة

زراعة فى المستخدمة البيئات لبعض األساسية المكونات يوضح جدولاألنسجة

المكون إسم/ لتر( )مجم الكمية

White MS B5 Nitsch’s N6 E1

كبرى عناصر

15

MgSO4. 7H2OKH2PO4

NaH2PO4. H2OKNO3

NH4NO3

CaCl2. 2H2O(NH4)2 SO4

750-

1980---

370170

-19001650440

-

250-

1502500

-150134

18568-

950720

--

185400

-2830

-166463

400250

-2100600450

-صغرى عناصر

H3BO3

MnSO4. 4H2OMnSO4. H2OZnSO4. 7H20NaMoO4. 2H2OCuSO4. 5H2OCoCl2. 6H2OKIFeSO4. 7H2ONa EDTA. 2H2OEDTA Na ferric salt

1.55.-3-

0.01-

0.75---

6.222.3

-8.60.250.0250.250.8327.837.3

-

3-

102

0.250.0250.0250.75

--

43

-25-

100.250.0250.025

-27.837.8

-

1.64.43.31.5---

0.8027.837.8

-

3-

102

0.250.0250.0250.80

--

43

Sucrose (g) 20 30 20 20 25 25الفيتاميناتThiamine HClPyridoxine HClNicotinic acidMyo-inositolGlycineFolic acidBiotinpH

0.010.010.05

-3--

5.8

0.50.50.51002--

5.8

1011

100---

5.5

0.50.55.01002

0.50.055.8

10.50.5----

5.8

1011

250---

5.5

بالجدول: المذكورة الست المغذية للبيئات المراجعWhite: White (1953) Am. J. Bot. 40, 517 – 524). MS: Murashige and Skoog (1962 ) Physiol. Plant. 15 : 473). B5: Gamborg et al.( 1968) Exp. Cell Res. 50: 151). Nitsch’s:(Nitsch and Nitsch 1969 ) Sci., N. Y., 163: 85).N6: Chu (1978); Pro. Symp. Plant Tissue Culture, Sci. Press, Peking P. 43). E1: Gamborg et al. (1983). Plant Cell Rep. 2: 209).

:- Growth R egulators النمو منظمات هى الهامة البيئة مكونات وأحد

األوكس11ينات، وهى األنس11جة عرزالم11 هام11ةالالنمو لمنظمات رئيسية مجاميع أربعة توجدو إلى وتكشفها واألنسجة الخاليا نمو األبسيسيك. إن وحامض الجبرلينات – السيتوكينينات

k يك11ون الجذور إلى أو الخضرية البراعم k واض11حا ه11ذه من أك11ثر أو واح11د إض11افة عن11د جلي11ا لتك11وين النم11و منظمات من المختلفة اإلحتياجات وتتباين الغذائى الوسط إلى المنظمات

k الموجودة الهرمونات نسب مع تتشابه الخضرية. والتى البراعم تكوين أو الجذور أساس11اk الهرمون11ات ه11ذه ب11ه تخل11ق وال11تى األص11لى النب11ات فى ه11ذه أغلب عقمتو تض11افو ذاتي11ا

العالى والضغط العالية بالحرارة لتكسرها نظرا البكتيرية المرشحات بواسطة المنظماتهى: المجموعات التعقيم(. وهذة )ظروف

Auxins - األوكسينات1

على منه11ا ن11ذكر الغ11ذائى الوس11ط إلى تض11اف ال11تى األوكسينات من العديد يوجدindole-3 الخليك حامض لوإند المثال سبيل – acetic acidل11ه ويرمز (IAA)، أن11دول

16

indole البيوتري11ك ح11امض 3 butyric acidل11ه ويرم11ز (IBA)2 وك11ذلك، دى4 .2,4 – dichlorophenoxy acetic acid (D – 4, 2) له ويرمز د1أس كلورفينوكسىأسيتيك

IAAk ويوجد(NAA) له ويرمز naphthoxyacetic acid ك111الخلي حامض الين111نفث طبيعيا واألنس11جة الخالي11ا م11زارع فى ت11ؤثر التى األوكسينات من العديد وهناك النباتية الخاليا فى

أهمها: ومن

AA I أسد أسيتيك أ- اإلندول

بواس11طة إض11افتة يجب الم11ركب وه11ذا النبات11ات على الج11ذور تك11وين يش11جع وتقليل تكسيرة إلي يؤدى البيئة مع األوتوكالف بواسطة تعقيمة ألن البكتيرية المرشحات

بالض11وء يت11أثر ألن11ة الل11ون قاتم11ة أو بني11ة زجاج11ة في حفظ11ة يجب وك11ذلك منة اإلستفادةto 0.1 حدود في للبيئة ويضاف 10 mg /Lه1ذا على المحتوي1ة البيئ1ة تحف1ظ أن ويجب

األوكس1ين أن ويالح1ظ من1ة اإلس1تفادة وتق1ل اليتكس1ر ح1تى الت1ام اإلظالم في الهرم1ون أو البوتاس11يوم هيدروكس11يد أو اإليث11انول كح11ول في أوال إذابت11ة ويجب الم11اء في الي11ذوب

الصوديوم. هيدروكسيد

هيدروكس11يد م11ل2 في وت11ذاب أس11يتيك اإلن11دول حمض من مجم100 ي11وزنالتحض11ير: يك11ون الحال11ة هذه وفي المقطر بالماء مل 100إلي الحجم يكمل ثم عيارى1 الصوديوم

. مجم1= مل1

كم1ا والفيكس البلح نخي1ل ىس1وكال لتك1وين بنج1اح األكس1ين ه1ذا أس1تخدم ولقد.الموز ونباتات والكوردالين الجربيرا نباتات فى (تجذيرلل) الجذور إلحداث أستخدم

IBA أسد بيوتريك -اإلندول ب

النباتية األنسجة مزارع في واسع نطاق على تستخدم التي الهامة األوكسينات من أسيتيك اإلندول بحمض بالمقارنة نسبيا ثابت الهرمون وهذا الجذور وتكوين تشجيع بهدف

(IAA) كح11ول في أيض11ا وي11ذوب الض11وء أو بالحرارة يتكسر وال التع1قيم يتحمل أنة حيث كالسابق. ويحضر الصوديوم وهيدروكسيد اإليثانول

NAA أسد أسيتيك ج- نفثالين

لتك11وين النباتية األنسجة مزارع في بكثرة تستخدم التي األوكسينية المركبات من ال11داخلى اإلت11زان أن ويالح11ظ النهائي11ة المرحل11ة في الج11ذور تك11وين وتش11جع الك11الوس في يذوب الهرمون وهذا النبات نمو حاالت جميع في المحدد هو والسيتوكاينين لألوكسين

م11ل2 في من11ة مجم100 بإذاب11ة ويحض11ر الص11وديوم هيدروكس11يد وكذلك اإليثانول كحول الحالة هذه وفي المقطر بالماء مل 100 إلي الحجم يكمل ثم ع1 الصوديوم هيدروكسيد

ب1ال اكب1ير اريت1أث تت1أثر األوكس1ينات ه1ذه أن مالحظ1ة مجم. ويجب1= م1ل 1 يك1ونpHه11ذه وفي م11ول والميكرو مول بالملى التركيزات ماتذكر بالبيئة. وكثيرا األمالح وكمية

لآلتى: طبقا وميكروجرام مليجرام إلي تحويلها يجب الحالة

الجزيئى × الوزن بالميكرومول = التركيز بالميكروجرام التركيز

الجزيئى × الوزن م1ول بالملي = التركيز بالمليج1رام التركيز

,2د- - 4, 2" أســـد أســـيتك فينوكســـى كلـــورو داي4 D "2,4-Dichlorophenoxyacetic acid

ولكن11ة الك11الوس وتك11وين العرض1ية األجن11ة تخلي11ق في ق11وى تأثيره بأن يتميز وهو وض1رورى ج11دا ه11امIAA أن مثال فوج11د األوكس11ينات أهمي11ة درس1ت وق11د مطف1ر. يعتبر

مرات الخاليا تنقسم أن يحدث األوكسين بدون أنة وجد وقد الخلية وإنقسامDNA لتصنيع بع11د ف11ورا يب11دأ الخالي11ا إنقس11ام أن ال11دخان نخ11اع مزارع في أنة وجد وقد تموت ثم قليلة

أهمها:- من أخرى أوكسينات يوجد الرئيسية األنواع هذة الى باإلضافة األوكسين إضافة

الخليك حامض فينوكسى كلورو بعرا-1

4 – chlorophenoxy acetic acid (4- CPA)

17

الخليك حامض كلورفونكسى بارا أو

P – chlorophenoxy acetic acid (PCPA)

الخليك حامض كلوروفينوكسى ثالثى5 ،4 ،2-2

2,4,5 – Trichlorophenoxy acetic acid (2, 4,5 –T)

الخليك حامض كلوروفينوكسى4 – مثيل3-2

2 – methy – 4 – chlorophenoxy acetic acid (MCPA).

كنيليونكيالب حمض كلور ثالثى6 ،5 ،3 أمينو،4-4

4 amino - 3, 5, 6- trichloropicolinic acid (picloram.)

يكزونبال حامض ميثوأوكسى2 – كلورو داى6 ،5-3

3,6 – dichloro – 2 – methoxy benzoic acid. (dicamba).

الطبيعة فى الخاليا إنقسام على الواضح التأثير وه لألوكسينات الرئيسى واألثر السالميات إستطالة عملية فى هام بنشاط تشارك أنها الهرمونات لهذه الرئيسى والدور

طريق عن الفسيولوجى تأثيرها فى األوكسينات الجذور. وتتباين وتكوين السيقانو نحدارإ درجة الخاليا. وحسب ببعض واإلرتباط النباتية األنسجة خالل التحرك على قدرتها

تأثير ضعف مرة12 – 8 من بحوالى يؤثرD–2,4 أن وجد فإنة النباتية الساق وتقوسIAAبتأثير مقارنة Picloram, PCPA5, 4, 2 تأثير ( من مرات4-2) من يؤثر الذى – T ,

2, 4 – D , IAAالكالوسات. إنتاج عملية فى نيمؤثر أنهم وجد

Cytokinins - السيتوكينينات2

ب11دور تق11وم األدينين من مشتقات األصل فى هى التى السيتوكينينات مجموعة إن الجانبي11ة. ال11براعم وتك11وين القمية السيادة تحوير وكذلك الخاليا إنقسام فى ونشط فعال الخالي11ا إنقسام على تساعد والتى النباتية األنسجة مزارع في الهامة الهرمونات من وهي

وه1ذه النبات1ات إكث1ار أثن1اء العددي1ة الزي1ادة على والمس1اعدة الجانبي1ة النم1وات وتكوين عن11د خاص11ة الج11ذور تك11وين وتمن11ع العرض11ية وال11براعم األف11رخ تك11وين تنشط الهرمونات التنقس11م ال1تي الخالي11ا على التأثير من يأتى الجذور تكوين ومنع كبيرة بجرعات إستعمالها

هي: السيتوكينيناتو

مثل: طبيعى - سيتوكينين أ

النباتية. األنسجة مزارع في تضاعف يحدث جدا الثمن مرتفع وهو ، - الزياتين1

Zeatin) 6–(4hydroxy–3methyl–trans-2 butanylamino) purine

Zeatin Ribosideرايبوزايد. - زياتين2

(y – y – dimethylamino– )6 التضاعف. إلحداث يستخدمip-2 أدينين - أيزوبنتنايل3purine

الهيدروكلوريك حمض في تذوب عامة المركبات وهذه صناعى سيتوكاينين- ب نقطة( ثم10 -5) السابق الحمض من ع1 مل2 في المادة من مجم100 بإذابة وتحضر

من بتركيز المركبات هذه تستخدم وعامةالمقطر. بالماء 3 سم100 إلي الحجم يكمل0.01 to 10 mg/Lالخاليا إنقسام على وتعمل الثالجة في وتحفظ ثابتة المواد وهذه اإلتزان عند وذلك سوالكال لتكوين األوكسين مع كذلك ويستخدم الجانبية النموات وزيادة

مثل: المركبات وهذه والسيتوكينين األوكسين بين

N – (2 furfurylamino)1– H – purine 6 بيورين( أمينو فورفورايل6 )Kinetin الكينيتين1amine

18

عند سوالكال وتكوين التضاعف إلحداث النباتية األنسجة مزارع في بكثرة ويستخدم .األوكسينات مع إتزانها

.الصوديوم هيدروكسيد في ذوبي BAP 6- benzylaminopurine بيورين أمينو - بنزايل2

.الصوديوم هيدروكسيد في ي1ذوب BA 6 benzyladinine أدينين - البنزايل3

وهذه السيتوكينينات إلي األوكسينات لنسبة كبرى أهمية هناك فإن وعموما معينة نسبة حالة ولكل آخر نسيج إلي نسيج ومن آخر نبات إلي نبات من تختلف النسبة نسبة فزيادة الجذرى المجموع بتكوين تسمح أو الكالوس تكوين على تساعد

األوكسين وزيادة والخضرية العرضية البراعم تكوين يشجع األوكسين إلي السيتوكاينينمعا. والجذرية الخضرية البراعم بتكوين يسمح النسبة وتعادل الجذور بتكوين تسمح

k وجد لقد وبعض(CPPU) وال1(DPU) مثل اليوريا مشتقات بعض هناك أن حديثا هذه وتحتاج السيتوكينينات مثل نشاط تظهرdiphenylurea من األخرى المشتقات تأثيرها لدراسة األنسجة مزارع فى إستخدامها على الدراسات من مزيد إلى المركبات

فى والسيتوكينينات األوكسينات من كل وجود نسبة وتعتبر والخاليا المزارع نمو على واألنسجة للخاليا بالنسبة التكشف عملية فى المؤثرة العوامل من الغذائى الوسط

حالة فى السيتوكينينات إلى األوكسينات من عالية بنسبة باستخدام المنزرعة. وينصح تكوين إلى يقود والعكس الجذور وتكوين األجنة تكوين وكذلك الكالوس تكوين فى الرغبة

الغذائى الوسط إلىD – 2,4 والBA1 ال1 إضافة عند أنه لوحظ ولقد الخضرية البراعم إستخدامهم وعندAgrostis مزارع فى الكالوس وتكون ظهور إلى أدتmg/ l-1 15 بنسبة

نسبة الحالتين كلتا وفى البراعم تكون على ساعدتmg/ l-1 0.5 بنسبة وإضافتهم مفهومة ليست السيتوكينينات بها تعمل التى والطريقة واحدة السيتوكينين إلى األوكسين

) الناقل الريبوزى النووى والحمض المركبات بعض بين إرتباط هناك وجد ولكن.بعدtRNA)ال1 تخليق فى زيادة إلى أدت السيتوكينينات أن لوحظ ولقد RNAزيادة ثم ومن

الخلية. داخل واإلنزيمات البروتينات تخليق فى

Gibberellins and Abscisic Acid األبسيسيك وحامض - الجبرلينات3

أحوال فى ولكن األنسجة زراعة فى النمو منظمات من المجموعة هذه تستخدمk تستخدم المجموعة قليلة. هذه k النمو لتنشيط أحيانا النمو. إن لتثبيط تستخدم وأحيانا

k المجموعة أكثر هو GA3 الجبريليك حمض دون األنسجة مزارع فى اإلستخدام فى إنتشارا إلى تؤدى الحقيقة فى المركبات الجبريلينات. وهذه من المعروفة نوعا العشرين باقى واإلستطالة. أما النمو على المتقزمة النباتات وتشجع أقل بكثافة ولكن النمو فى زيادة

والتركيز النبات نوع حسب يثبطة أو النمو يشجع قد فإنه األبسيسيك لحامض بالنسبة لحمض األساسية والوظيفة النمو منظمات في المهمة العناصر من المستخدم. وهو

إضافة أنEl-Shobaky (1991) وجد . ولقدوتميزها الخاليا إستطالة تشجيع هو الجبرالين األفرخ وعدد طول زيادة الى أدت الغذائى الوسط الى الجبرلين من مجم2- 2/1

فقد الحاالت بعض في مانع تأثير لة أن وجد ولكنالبطاطس. أصناف من لعديد والجذور غير أثر وهو الجذور لتكوين مانعا كان الفاصوليا في الموجود الطبيعى الجبرالين أن وجد

في العقل تجذير يمنع قد الجبرالين أن حاليا المؤكد ومن الخاليا أنقسام منع في مباشر أوراق أعناق إلي أضيف عندما العرضية الجذور تكوين يمنع وكذلك النباتات كثيرمن

)مجم/ لتر( جدا قليلة بتركيزات تستخدم الهرمونات هذه أن نجد سبق البيجونيا. مما هذه مثل إضافة يفضل ولذلك للبيئة التعقيم عملية أثناء بالحرارة يتكسر ما ومنها

بين التوازن حالة في أنة كذلك وجد المعقمة. وقد المرشحات طريق عن الهرموناتوجذور. خضرية براعم ينتج فإنة والسيتوكينينات األوكسينات نسبة

pH الغذائى الوسط حموضة درجة

وعند للنمو المناسبة الحموضة درجة إلى المنزرعة واألنسجة الخاليا تحتاج المثلى الدرجة إلى وتعديلها الحموضة درجة تقدير يمكن الغذائية األوساط وإعداد تحضير لأليونات الخاليا إستخدام درجة على الحموضة درجة التجربة. تؤثر من والغرض للنمو

k الوسط فى الموجودة قبل6– 5 بين تتراوح المثلى الحموضة درجة الغذائى. عموما

19

الوسط صالبة فى زيادة إلى تؤدى الحموضة من العالية التعقيم. الدرجة عملية إجراء من أقل صالبة درجة إلى تؤدى الحموضة من المنخفضة الدرجات حين فى الغذائى

لتركيز السالب اللوغاريتم هو األيدروجينى الغذائى. واألس للوسط بالنسبة المطلوبة ويتراوح اآلجار إضافة قبل ويقاس المحضر المحلول في الموجودة الهيدروجين أيونات

الصلبة البيئة فيto 5.8 5.6 ومن السائلة البيئة في to 5.4 5.2 من الحموضة رقم في التغير يقاوم الذى المحلول ذلك وهوBuffer solution المنظم بالمحلولpH ويضبط

اآلتى: ويالحظpH meter ال جهاز باستخدام pH ال ويقاسpH ال

pH النباتات. نمو على سيئا تأثيرا يؤثر7 من األعلى أو4.5 عن المنخفض

اآلتى: فيحدث 4.5 عن pH ال إنخـفاض تأثـير

.تنتوثيانياب يوموالكالوس والثيامين والجبرالينIAA ثبات - يتأثر1

اآلجار. - سيولة2

اإلمتصاص. لقلة نظرا األمونيوم أيونات من اإلستفادة - تقل3

تجعلها كبيرة بكميات ذائبة صورة في الغالب في تصبح والمنجنيز الحديد - أيونات4للنبات. سامة

اآلتى: يحدث ( فإنة 8 ) عـن pH اد ز واذا

اآلجار. تصلب - يزداد1

منها. اإلستفادة فيقل والحديد الفوسفات أمالح - ترسيب2

المتصلب. اآلجار بيئة في الجذور نمو - صعوبة3

البيئة. في الموجودة النمو ومنظمات الهرمونات - تتأثر4

النباتات. منها فاليستفيد والزنك والمنجنيز والحديد النحاس تيسر درجة - يقل5

للنباتات. سام فيصبح المولبدنيم تيس1ر درجة - يزيد6

أنة ويالحظ وحدة5 – 3 من pH ال فية تنخفض حيث التعقيم وبعد قبلpH ال ويختلفالنباتات. نمو أثناء ينخفض

Media types تصلبها( درجة )حسب البيـئات أنواع

الشبيهة والبيئة السائلة والبيئة الصلبة البيئة وهم البيئات من أنواع ثالثة يوجدبالصلبة.

Solid media الصلبة - البيئة1

آجار دفكو بكتو أو جيلريت أو فيتاجيل إما وهو آجار اليها المضاف الب1يئة وهي عند البيئة تصلب اآلجار من أنواع وهناك جم/ لتر7 – 2 من حوالي اآلجار وكمية فيصلبها

في الصلبة البيئة كانت واذا5.7 هوpH البيئة لهذه حموضة رقم وأفضل جم/ لتر2 األوتوكالف من الخروج بعد التصلب قبل درجة45 بزاوية بميل وضعها يجب إختبار أنبوبة

اإلختبار. أنابيب داخل البيئ1ة سطح لزيادة وذلك مباشرة

Liquid media السائلة - البيئة2

زراعة وعند5.5 هوpH حموضة رقم وأفضل آجار اليها اليضاف التي البيئة وهي فيحتاج مرستيم كان إذا أو البيئ1ة في مباشرة النباتى الجزء يوضع أن إما البيئة هذه مثل إلية ويصل القنطرة أعلى المرستيم ويوضع ترشيح ورق قطعة من قنطرة أو ركاب إلي

يحتاج السائلة البيئة على الكالوس زراعة حالة وفي النشع أو التشرب طريق عن الغذاء من جزء كل إلي تصل السائلة البيئة )التهوية( وجعل الهواء لتجديدShaker هزاز إلي

النسيج. أجزاء

Semi-solid media الصلبة شبة - البيئة3

20

سائلة. الو صلبة التكون فهي أقل آجار كمية بها يكون التي البيئة وهي

Solidifying Agents الغذائى للوسط المصلبة المواد

يمكن حتى صلبة بيئات على للحصول الغذائى الوسط إلى المصلبة المواد تضاف البيئة داخل تسقط إنها حيث ثابتة سائلة بيئة فى زرعت إذا الخاليا عليها. وتموت الزراعة على الغ1ذائى للوس1ط المص1لبة المواد لتنفسها. وتعمل الالزم األوكسجين وتفقد السائلة

المص11لبة الم11واد أفض11ل من اآلجار ويعتبر الغذائى الوسط أسطح على للنمو فرصة إتاحة من معقد عن عبارة واآلجار. البحرية األعشاب بعض من مستخلص وهو الغذائى للوسط

الغذائى. الوسط مركبات مع يتفاعل ال الجالتين أو اآلجار أن هنا نذكر ولألهمية السكريات م11دة ط11ول ص11لبة وتظل وتحليلها المركبات هذه هدم النباتية اإلنزيمات تستطع ال وكذلك

حس11ب على جم/لتر7-2 بنسبة اآلجار يستخدم الحرارة. عادة درجات مختلف على النمو األس نفس عن11د الغ11ذائى الوس11ط ت11دعيم أو لتص11ليب كافي11ة كمي11ة وهى اآلج11ار ن11وع

البيئة. فى المستخدم األيدروجينى

على يحت11وى إن11ه حيث اآلج11ار إس11تخدام يس11تبعد تغذي11ة تجارب بإجراء القيام عند الكالوس11يوم عناص11ر مث11ل الغ11ذائى الوس11ط فى تؤثر التى المعدنية العناصر من مجموعة

نسبة فى التغير فإن وعليه الصغرى العناصر وبعض والصوديوم والبوتاسيوم والمغنسيوم الوس11ط فى الموج11ودة المعدني11ة العناص11ر كمية على تؤثر سوف الغذائى بالوسط األجار

م1اء فى غس1له طري1ق عن التغذي1ة تجارب فى النقطة هذه على التغلب الغذائى. ويمكن درج1ة على التجفي1ف ثم اإليث1انول كح11ول باس1تخدام ش1طفه ثم س1اعة24 لم1دة مقطر ساعة.24 لمدة م60º حرارة

الوس11ط % لتصلب10 أعلى بتركيزات تستخدم فإنها تينالجيال لمادة بالنسبة أما25 من أعلى حرارة درجة عند سائلة مادة إلى يتحول ألنه بكثرة تستخدم ال ولكن الغذائى

ºتص11لب عملي11ة فى إس11تخدامها يمكن ال11تى الم11واد من العدي11د هناك ذلك إلى باإلضافة م ,Gelrite الحص1ر ال المث1ال س1بيل على منه1ا ن1ذكر الغ1ذائى الوس1ط Phytagel, alginate,

methacelم11زراع فى يس11تخدم وال11ذى النقى األج11اروز من ن11وع اآلن األس11واق فى يوج11د k الخلية ومزراع البروتوبالست الوس11ط فى الخالي11ا لحمل بديلة طرق هناك الواحدة. أيضا

الب11ولى رغ11اوى اس11تخدام أو ترش11يح ورق أو سلوفان ورق إستخدام مثل السائل الغذائىk k تعتمد ال لألنسجة بالنسبة النمو درجة فإن إثيلين. وعموما والن11وع النسيج نوع على أساسا

يس11تخدم أن11ة حيث للبيئ11ة المصلبة المواد أفضل من الفيتاجيل ويعتبرالمستخدم. النباتى(.El-Shobaky 1991) الشوائب من خالى أى شفاف وهو جم/لتر2 منخفض بتركيز

Media Preparation البيئات إعداد

العناص11ر أك11ثر من يك11ون ق11د األنس11جة زراع11ة مج11ال فى الغذائي11ة البيئ11ات إعدادk مخل11وط ص11ورة على جاهزة غذائية بيئات اآلن األسواق فى توجد للوقت. ولذلك إستهالكا

أن الط11رق ه11ذه . وأبس11طاألخ11رى المكونات بقية أو والصغرى الكبرى العناصر من جاف م11ع الم11اء من أخرى كمية فى واآلجار السكر الماء. يذاب من كمية فى الكمية هذه تذاب

مث11ل األخ11رى العض11وية المكون11ات بعض تض11اف ثم لآلج11ار س11اخنة إذاب11ة عملي11ة إج11راءk الكمي11ات تض11اف ثم النم11و ومنظم11ات الفيتامين11ات األس ويق11در ل11تر1 إلى وتكم11ل مع11ا الس11ابقة البيئات تستخدم العموم التعقيم. على عملية لها يجرى ثم ذلك قبل األيدروجينى

التج11ارب حال11ة فى ولكن األنس11جة زراع11ة طريق عن الخضرى اإلكثار عملية فى التجهيز ملح ك11ل ي11وزن أن على األمالح مخالي11ط من المعم11ل فى البيئ11ات تحض11ير يفضل العلمية

إض11افتها المطل11وب العناص11ر جمي11ع إذابة تجرى ثم الماء من كمية فى يذاب ثم حدة علىk. ولق11د ص11عبة عملي11ة وهذه المستخدم الغذائى الوسط نوع حسب التجربة فى وج11د ج11دا

ه11ذه من كب11يرة كمي11ات( بStocks) م�رك11زة محالي11ل تحض11ر أن على العملي11ة له11ذه ب11ديل الكمي11ات المحاليل هذه من نأخذ البيئة إعداد عند ثم مضاعفة بكميات والعناصر المحاليل

الغذائى. الوسط إلعداد الالزمة

21

الم�ركزة للعناصر الص11غرىStocksفعلى سبيل المثال تحضر محاليل ال1 ض11عف كمي11ة العناص11ر ال11تى يجب أن100بحيث يحتوى المحل11ول على

كاآلتى:المحاليل توجد فى الوسط الغذائى )حجم لتر( وتحضر

Micro nutrients 1X

mg/L

100 X

mg/100L

KI 0.83 83

H3BO3 6.2 620

ZnSO4.7H2O 8.6 860

MnSO4.4H2O 22.3 2230

NaMoO4.2H2O 0.25 25

CuSO4.5H2O 0.025 2.5

CoCl2.6H2O 0.025 2.5

Na2.EDTA 37.3 3730

FeSO4.7H2O 27.8 2780

.FeSO4 المائي11ة الحدي11دوز كبريتات من كل تذاب المخلبية الحديد محاليل تحضير وعند7H2Oالص11وديوم محل11ول وك11ذلك Na EDTA. 2H2Oم11اء م11ل45 فى ح11دة على ك11ل

إلى المق11دار يكم11ل ثم المحل11والن نخل11ط ثم ال11ذوبان تم11ام ح11تى والتقليب بالتس11خينمل.100

مل.100 إلى يكمل ثم ماء مل85 فى البوتاسيوم يوديد كمية تذاب وكذلك

إلى تكم11ل ثم م11اء م11ل70 فى بعض11ها م11ع ت11ذاب العناصرالص11غرى ب11اقى أم11ا.مل.100

ل11تر تحض11ير وعن11د محاليل ثالث إلى قسمت الصغرى العناصر أن يتضح ذلك ومنمحلول.. كل من مل1 أخذ يتم بيئة

ح11رارة درج11ات فى زجاجي11ة أوعي11ة فى تخ11زن أن يجب الس11ابقة المرك11زة المحالي11ل كل منف11ذة غ11ير ملون11ة زجاج11ة فى يحفظ أن يجب الحديد الثالجة. ومحلول ويفضل منخفضة

k الرج عملية إجراء من البد هذه المركزة المحاليل إستخدام للضوء. عند أى وإستبعاد جيداk. تب11ذل فطري11ة ملوث11ات أى أو ترس11يبات على تحت11وى محالي11ل عن11د خاص11ة عناي11ة نهائي11ا ب1ألوان ملون1ة زجاج1ة فى ويخ11زن يرش1ح األندوس1برم الهن1د. محل1ول جوز لبن إستخدام

الوس11ط لمكونات الرئيسة والمحاليل م20º – درجة على فريزر الديب فى وتحفظ معتمة الغذائى

Stocks and Media Preparation (MS) البيئة تحضير

س11ابقا( وتخ11زن )ذك11رت المختلفة البيئة مكونات من Stocksإعداد الخطوة تلك تشتمل- 4 حرارة درجة على 5المطلوب11ة. وتحض11ير البيئ11ات تحض11ير في إس1تخدامها لحين م بيئة(: )لتر اآلتى بالوضع يتم البيئة

المطلوب. حسب أو السكروز من جم30 - 20 من يوزن - 1

اإلينوزيتول. من مجم100 ي1وزن - 2

البيئات. بجدول موضح كما الكبرى العناصر - توزن3

22

وكذلك الصغرى بالعناصر الخاصة السابقة محاليل الثالث من كل من مل1 يؤخذ - 3البيئات. بجدول موضح هو كما الفيتامينات إضافة يتم

المطلوب. والتركيز الهرمون نوع حسب على الهرمونات توضع - 4

المق1طر. ( بالماء3 سم1000) لتر إلي الحجم يكمل - 5

السائلة. to 5.2 5.5 ومن الصلبةto 5.8 5.6 من ويكونpH ال يضبط - 6

لتر7 حوالي وهو البيئة لتصلب اآلجار يوضع - 7 اآلجار نوع على هذا ويتوقف جم/ بمقلب س11خان على البيئ11ة وتطبخ آج11ار ب11دون س11ائلة تك11ون األحي11ان بعض وفي

المكونات. هذه جميع تمتزج حتى مغناطيسى

تغطى ثم لألنبوبة سم20 حوالي إختبار أنابيب أو برطمانات في البيئة تصب - 8 الض11غط تتحم11ل ال1تي بروبي11ولين الب11ولى م11ادة من مص11نوعة بذلك خاصة بأغطيةالتعقيم. عند الحرارة ودرجة

وضغط م121 حرارة درجة على األوتوكالف في البرطمانات أو األنابيب تعقم - 9 دقيقة.20 لمدة2/ سم كجم1 جوى

راكات في مائلة األنابيب وتوضع البيئة على المحتوية واألنابيب البرطمانات تبرد - 10الزراعة. لحين درجة45 بزاوية بذلك خاصة

النباتية: األنسجة و الخاليا لزراعة المتبعة الخطوات

النباتى: الجزء أوال: إختيار

Selective of mother plants األم نبات إختيار-1

ص11فات وذو هنش11اط بداي11ة وفي جي11دة ص11حية حال11ة في األم نب11ات يكون أن يجب ط11ور من خ11رج ق11د يك11ون أن ويجب الفيرس11ية األم11راض خاصة األمراض من خالية جيدة

واألبصال. الدرنات مثل راحة طور هل كان إذا الراحة

Selective of an explant يزرع الذى الجزء - إختيار2

وأج11زاء الزهرة وأجزاء والجذور للسيقان النامية القمم هي تستخدم التي األجزاء النيوس11يلة ونس11يج واألجن11ة والم11بيض والمتوك اللقاح وحبوب والبذور والبتالت الثمار من

على المحتوي11ة األج11زاء وهي والكم11بيوم والنخ11اع والقش11رة والفلق11ات واإلندوس11برم م1ا غالب1ا نس1يج نب1ات ولك1ل المرس1تيمية الحال1ة إلي للتحول قابلة أنسجة أو مرستيمات

إختي11ار قب11ل اليه11ا النظ11ر ال11واجب من إعتب11ارات عدة وهناك.غيرة من ةمالئم أكثر يكونوهي: سيزرع الذى الجزء

Explant المستخدم النباتى - الجزء أ

من الس11اق-ج11زء من مية-ج11زءيمرس11ت نامية-قم11ة )قمة النباتى المنفصل هب ويقصد(. الورقة-المتك.. الخ

Age of Explant النباتى المنفصل - عمر ب

يفض11ل األحي11ان بعض وفي الس11ن ص11غير النب11اتى المنفصل إستخدام يفضل عادة ك11ذلك ويمكن زراعته11ا عن11د نش11اطا أك11ثر حديث11ة نم11وات لتك11وين التطويش عملية إجراء

ب11الطعم الص11غير )األص11ل التطعيم عملي11ات بإجراء القوية الحديثة النموات على الحصول مركبات يستخدم األحيان بعض وفي بالجبريلين النباتات معاملة الكبير( وكذلك النبات من

الحديثة. النموات تكوين على ذلك يشجع حيث السيتوكاينين

Size of Explant النباتى المنفصل - حجم ج

معظم في أعلى النم11و نس11بة كانت النباتى المنفصل حجم ادز كلما أنة وجد لقد نس1بة أن الطريق1ة ه1ذه على يع1اب ولكن أعلى التض1اعف مع1دل يك1ون وكذلك الحاالت أن يفض11ل الح11االت بعض في - بينم11ا سيةوالفير اإلصابة زيادة وكذلك عالية تكون التلوث راض11111األم وخاص11ة األم11راض من خ11الي يك11ون ص11غيرحتى النباتى المنفصل حجم يكون

23

-El-Shobaky (1991) وج1د وقدالتلوث. وقليل سيةوالفير -0.1) المرس1تيم ط1ول أن البطاطس. من مصابة نباتات من الفيروس من خالية نباتات إنتاج الى مم( أدت0.25

Season of Explant النباتى المنفصل على الحصول - موسم د

ب1قية الربيع( عن )فصل النمو موسم بداية في نشاطا أكثر النامية األعضاء تكون السنة. فصول

Quality of the Explant Source النبات مصدر وجودة نوعية – هـ

األمراض. من وخالي جيدة نمو حالة وفي تماما لألصل مطابقا يكون أن يجب

النباتى: للجزء الزراعة و التعقيم ثانيا: عملية

Sterilization of the Explant المستعمل الجزء تعقيم

التعقيم عملي11ة هعلي11 تج11رى األمهات همصدر من النباتى الجزء على الحصول بعدكاآلتى:

أك11ثر أو س1اعة لم11دة الحنفي11ة م11اء من تي11ار تحت المستعمل النباتى الجزء يغسل(1 مغطى الخ11ارجى الس11طح كان وإذا كبيرة درجة إلي التلوث نسب من تقلل وهذه

على يس11اعد الغس11يل مساحيق بإحدى المنفصل الجزء غسيل فإن شمعية بطبقةللبلل. قابلية أكثر الخارجى السطح جعل

بالم11اء يغس11ل ثم دقيق11ة واح11د إلي نص11ف % لم11دة70 إيث11انول كح11ول في يوضع(2المقطر.

-5)الكلوروكس( الصوديوم هيبوكلوريت في يوضع(3 م11ع س11اعة ثلث % لم11دة20 المستمر. والتقليب الرج

وبعدها المعقمة المادة آثار من للتخلص مرات5-4 المعقم المقطر بالماء يغسل(4الهود. داخل تجرى4 حتى2 من للزراعة. الخطوات قابل النباتى الجزء يصبح

Culture of the explant البيئة سطح على المستعمل الجزء -زراعة

المحض11رة المعقم11ة البيئ11ة س1طح على هتعقيم11 بعد المستعمل النسيج زراعة يتم البيئ11ة حال11ة في وه11ذا معقم ه11ود داخل تتم الزراعة وهذه معقمة أدوات باستخدام سابقا

في منغمس ركاب على المستخدم النباتى الجزء فيوضع سائلة البيئة كانت اذا أما الصلبة الجزء إلي وينقلها المحاليل يتشرب الذى الترشيح ورق من )قنطرة( وهي ويسمى البيئة

س11ائلة تكون وقد صلبة األولى المراحل في المستخدمة البيئة تكون أن المنزرع. ويفضلالتالية. المراحل في

Incubation of the cultures المزارع - تحضين

تحتوى التيGrowth Chamber نمو غرفة في أو حضانة في المزارع تحضين ويتم البيئي11ة والعوام11ل الم11زارع عليه11ا توض11ع مضاءة أرفف على تحتوى وهذهStands ال على

من األنس1جة على للمحافظ1ة مناس1بة رطوب1ة وهي األنس1جة زراع1ة عن1د توافرها الالزم المطلوب11ة البيئي11ة مناس11بة. اإلحتياج11ات ضوئية وإحتياجات مناسبة حرارة ودرجة الجفاف

هي:

على: وتشتمل Light requirement الضوئية - اإلحتياجات أ

Light intensity الضوئية - الكثافة1

إلي مغذي1ة ب1يئ11ة على تحت1وى أوعي1ة في زراعته1ا تم التي النباتية األنسجة تحتاج التش11كل عملي11ات ينظم فالض11وءInitiation األعض11اء وتخليق نشأة على لمساعدتها ضوء

Morphogenetic processesاألجنة وتخليق والسوق الجذور مبادئ تكوين على يساعد فهو األعض11اء تكش11ف ص11عوبة ولعل الكالوس نسيج من العرضية الخضرية واألجنة النيوسيلية

وق11د المناس11بة اإلض11اءة لش11دة تعرض11ها ع11دم إلي يرجع ناجحة الغير الزراعات بعض في ل11وكس3000 إلي1000 من اإلض11اءة شدة في التدرج يلزمها األنسجة زراعة أن لوحظ

24

إلس11تطالة مفي11دة كانت الضوئية الكثافة لوكس.10000إلي تحتاج المزارع بعض وهناك (.El-Shobaky 1991) البطاطس فى الجذور وعدد وطول األوراق عدد وزيادة النباتات

Photoperiod الضوئية - الفترة2

البعض وهن11اك إظالم س11اعات8 و إض11اءة س11اعة16 إلي الم11زارع معظم تحت11اج من الميكروتي11وبرز على الحص11ول حال11ة وفي إظالم ومثله11ا إض11اءة ساعة12 ىإل يحتاج

تام. إظالم إلي أو خافت ضوء إلي تحتاج قد فإنها البطاطس

Heat requirement الحرارية - اإلحتياجات ب

مزراعة لنمو درجة أنسب هي م27 - 22 الحرارة درجة تكون األحيان معظم في ونبات11ات اإلس11توائية النبات11ات في أن11ة إال المعتدل11ة المن11اطق لنبات11ات بالنس11بة األنس11جة بين م11ا ت11تراوح ح11رارة درج11ات في أفضل بصورة األعضاء تكشف يكون الحارة المناطق

27 - 3518 كانت الدخان نبات على الخضرية للبراعم حرارة درجة أفضل أن وجد وقد م .25-20 الحرارة درجةمºوع11دد وط11ول واألوراق األف11رع ع11دد لزي11ادة مناس11بة ك11انت م

.El-Shobaky (1991) الزراعة أوعية فى النامية البطاطس لنباتات الجذور

المستولدة: للنباتات الحقل و التربة فى الزراعة و ااألقلمة ثالثا: عملية

األقلمة عملية تأتى البرطمانات داخل النباتات تكون تمام بعد

Acclimatization النباتات أقلمة

عالي1ة إض1اءة لش1دة النبات1ات بتع1ريض وذل1ك النق1ل قب1ل النبات1ات تقس1ية يجب وت11زرع والفيرمكوليت موس بيت على تحتوى أصص إلي النباتات نقل ثم لوكس10000Under ضباب تحت النباتات mistيش11جع ذل11ك ف11إن الزراع11ة أوانى قاع11دة تدفأة ويفضل

النباتات تنقل أسابيع4 - 3 وبعد أسبوعيا هوجالند ½ محلول ب وتغذى الجذرى المجموع راح11ة ط11ور له11ا ال11تي النباتات أما المشتل بأرض الخارجى الجو في تدريجيا ثم الظل في المرحل11ة ه11ذه وفي سكونها. طور لكسر الحرارة درجات فاءيإست فيجب الكورمات مثل

من مكون11ة تربة في وتزرع الحقل أو الصوبة إلي وتنقل األقلمة حجرة في النباتات تؤقلم ثم التهوية لزيادة فوم أو بيرليت يضاف وأحيانا بالحجم1 : 1 بنسبة والرمل موس البيت تك1وين لتش1جيع تج1ذير هرم1ون يس1تخدم وأحيان1ا متكام1ل غذائى بمحلول ذلك بعد ترش

بع11دادات وم11زودة ل11ذلك مجه11زة حض11انات في العملي11ة هذه تتم ما وغالبا جذرى مجموع س11اعات - ع11دد اإلض11اءة )ش11دة واإلض11اءة للرطوبة وأخرى ونهارا ليال الحرارة لدرجات

مجه11زة ص11وب في تتم فإنها التجارى النطاق على أما البحثى النطاق على اإلضاءة( وهذا البالس11تيك. بأكي11اس التغطي11ة )الض11باب( أو ب11الرش ال11رى نظ11ام مايس11تخدم وغالبا لذلك ويجب للغاي11ة هام11ة وهي األنس11جة م11زارع في للعمل النهائية الترجمة هي المرحلة وهذه

األقلمة. في خاصة طبيعة نبات لكل أن مالحظة

المرحلة هذه من الهدف Greenhouse and Field الحقل أو الصوبة في الزراعة الناجح1ة اإلكث1ار طريق1ة تتوق1ف حيث للترب1ة للنق1ل ص1الحة بص1ورة النبات1ات إع1داد ه1و

تزي1د حيث بتج1ذيرها وذل1ك النبات1ات له1ذه الجي1د اإلع1داد على األنسجة زراعة باستخدام معرف1ة ويجب الس1يتوكاينين اليضاف أو ويقل المرحلة هذه في البيئة في األوكسين نسبة

فمثال: النباتات طبيعة

المنخفض11ة الح11رارة ل11درجات ب11التعرض هكس11ر فيجب س11كون دور لها التي - النباتات1معينة. زمنية لفترة

تنشط اإلضاءة وزيادة البيئة في واألمالح السكر كمية تقليل على تعمل النباتات - بعض2أقلمتها. فيسهل للنباتات التمثيلية الكفاءة لزيادة الضوئى البناء إنزيمات

م11ع مباش11رة التربة إلي الثانية المرحلة من مباشرة النباتات تنقل األحيان بعض - وفي3التجذير. هرمونات إستخدام

25

الغذائية البيئة إعداد عند المستخدمة الخامات فى مراعاته يجب ما

k يكون أن يجب الماء(1 األيونات. منه ومنزوع مقطرا درجة ذات من تكون أن البد وخالفه العضوية والمواد األمالح مثل الغذائية المواد(2 نقي11ة بل11ورات ص11ورة على تك11ون أن يجب النم11و منظماتو والهرمونات العالية وةاقالن

.L isomer من تكون أن يجب األمينية واألحماض أوDifco شركة منBacto agar نوع من آجار إستخدام من البد صلبة بيئة إلعداد(3

. السعر ومناسبة الجودة عالية النوعيات من الوس11ط فى وجوده11ا المطل11وب الس11كر وك11ذلك المطلوب11ة األج11ار كمي11ة ت11ذاب(4

فى أو م11ائى حمام فى التسخين طريق عن الماء من لتر أرباع ثالثة حوالى فى الغذائى إذابت11ه يمكن السكر ألن السائلة البيئات حالة فى ضرورية غير الخطوة وهذه األتوكالف

الدافئ. الماء من كمية أقل فى

العمل: خطوات إجراء بعد الغذائى الوسط إلى إضافتها يمكن النمو ومنظمات الفيتامينات-1

عن تعقم أن يجب النم11و ومنظم11ات الفيتامينات هذه ألن وذلك له التعقيمk دقيق11ة مرش11حات خالل الترش11يح طريق من ته11اتحاف أقط11ار ت11تراوح ج11دا ميكروميتر. 0.45 إلى0.22

هيدروكس11يد محل11ول باس11تخدام يتم الحموض11ة درج11ة وتع11ديل ض11بط-2 الهيدروكلوريك حامض من عيارى عشر محلول أو عيارى عشر الصوديوم

. من أحج1ام ذات زجاجي1ة أوعي1ة فى التعقيم قب1ل الس1ائلة البيئ1ات توض1ع-3

يع1اد الس11ائلة البيئ11ات له11ذه تجم11د لوح11ظ ل1تر. وإذا واح11د إلى ل1تر نصفأخرى. مرة هانتسخي

الوعاء أرباع4/3 وبمعدل للتسخين قابلة زجاجية أوعية فى البيئات توضع-4 درج11ة على وتعقم األلموني11وم ورق من س11دادات بواس11طة لقغت ثم فقط

– 15 بين ما تتراوح لمدة2 كجم/ سم1 جوى ضغط تحت م°121 حرارة دقيقة.20

م60º إلى األوت11وكالف ح11رارة ة111درج وتص11ل التعقيم عملي11ة تنتهى أن بعد-5معقمة. أوعية فى وتصب البيئات خرجت

k يمكن-6 أوعي11ة م11ع البيئ11ة تعقم ثم الزراع11ة أوعي11ة فى البيئ11ات ص11ب أحياناk الزراعة األوتوكالف. داخل سويا

بيئ11ة فق11ط الوعاء حجم5/1 حوالى فقط توضع السائلة المزارع حالة فى-7غذائية.

على تخزينه11ا ويمكن الغرف11ة ح11رارة درج11ة إلى البيئ11ة ت11برد النهاي11ة فى-8 م.10º – 4 بين ما تتراوح حرارة درجات

26

النباتية األنسجة زراعة بإستخدام للنباتات الدقيق : اإلكثار ثالثا

األنسجة زراعة خالل من الموز إنتاج بروتوكول

Production of Banana (Mousa sp.) through tissue culture نس1بة يحت1ل و الع1الم، فى غذائى محصول أهم رابع و فاكهة محصول أهم الموز يمثل

الم11وز ي11زرع لإلنس11ان. و دواء و كغذاء كبيرة أهمية له و الدولية، التجارة مجال فى كبيرة الف1دان ينتج ف1دان، أل1ف58 مس1احته تتج1اوز حيث مصر محافظات غالبية فى مصر فى

زراع11ة على المزارعين إقبال زيادة األخيرة الفترة فى لوحظ و الثمار، من طنا18 قرابةk الموز من مجموع1ة اإلقب1ال ه1ذا أع1اق و واج1ه لكن و يحقق1ه، الذى المجزى للعائد نظرا

رأس11ها وعلى الموز تصيب التى اآلفات و باألمراض اإلصابة أخطرها الصعاب، و المشاكل الموز تبرقش ومرضBanana Bunch Top Virus القمة تورد )مرض الفيروسية األمراض

Banana Mosaicعن الم11زارعين ب11إقالع هددت و تماما، الموز مزارع على تقضى ( والتى ش1تالت إنت11اج تكنولوجي11ا إلى اللج11وء ه11و األمثل الحل كان الهام. و المحصول هذا زراعة و النباتي11ة األنس11جة زراعة طرق باستخدام ذلك و عالية إنتاجية ذات و األمراض من خالية الم11وز ش1تالت ت11وافر إلى أدت ب11ل ،أجم11ع الع1الم و مص11ر فى الزراع1ة ه11ذه أنقذت التى

بأس1عار و وف1رة أك1ثر الم1وز فاكه1ة أص1بحت و الج1ودة، عالي1ة ص1فات و كب1يرة بكمي1ات األنس11جة مزارع خالل من الموز إكثار عملية العام. و طول و الجميع متناول فى منخفضة

ت11زرع كلها يكن لم إن حاليا الموز مزارع معظم أن لدرجة النظير منقطع انجاح تنجح قداألنسجة. زراعة معامل من ناتجة موز نباتات من

األنسجة زراعة خالل من الموز إكثار من الهدف

األمراض وخاصة النيماتودية و والبكتيرية الفطرية األمراض من خالية نباتات - إنتاج1 لمرض المسبب والفيروس التورد لمرض المسبب )الفيروس مثل الفيروسيةالتبرقش(.

النم11و القوي11ة النبات11ات من ع11دد أك11بر إنت11اج )أي الس11ليمة للنبات11ات العددي11ة - الزي11ادة2األمراض(. من الخالية والسليمة

و- 3 اإلنتاج عالية المواصفات ذات الجديدة األصناف نشر سرعة فى الطريقة تلك تساعدالجودة.

المستخدمة: األصناف

هندى- مثل قص1يرة أصناف وكذلك جراندنان – ويليامز – مغربى مثل طويلة أصناف بصراي.

: األنسجة زراعة خالل من الموز إنتاج بروتوكول

اآلتى:- إتباع يجب

األمراض من خلوة من والتأكد للسوق والمطلوب والمالئم المناسب الصنف - إختيار1الظاهرى. الشكل من أي مورفولوجيا

كل من عينة تؤخذ بأن وذلك(ELISA) اإلليزا تكنيك بإستخدام الفيروسية - اإلختبارات2 فإذا فيرسيا تختبر ثم المزرعة في الشجرة هذه ورقة( وترقم )قطعة موز شجرة هذه تؤخذ الفيروسية اإلصابة من خالية سليمة كانت وإذا تستبعد مصابة كانت

كأم. وتكون منها األنسجة زراعة عملية إلجراء الشجرة

.والجانبية يةالطرف عماالبر تأثرتال حتى شديد بحرص الكورمة قلع – ت3

27

مع الطرفي بالبرعم المحيطة واألغماد األوراق تزال بأن جيدا الكورمة - تنظف4 في وتكون الكورمة على والموجودة األوراق بآباط التي الجانبية بالبراعم اإلحتفاظ

جم.50 إلي10من والوزن سم5x 5 صغيرة قطع

ساعات.6 لمدة فيه وتنقع بالماء جيدا - تغسل5

+ حمض مجم/ لتر150األسكوربيك ) حمض مثل األكسدة مضادات في - تنقع6 ويضافBrowning البنى اللون من للتخلص ( وذلك مجم/ لتر100الستريك

ساعة.12 - 6 لمدة / لتر جم2 بمعدل البنليت

السابقة. األحماض آثار من للتخلص المعقم المقطر بالماء - تغسل7

) الصوديوم هيبوكلوريت الفعالة المادة الكلوروكس محلول في توضع بأن أوال - تعقم8 ببطئ الجارى الماء وجود في ساعة نصف لمدة % كلوروكس30 -20 % (5.25

والتلوث. األتربة من تدريجى تخلص ليحدث

%50 - 30 بإستخدام الهود داخل ويعقم الزراعة لغرفة النباتى الجزء - ينقل9والتقليب. الرج مع دقيقة20 لمدة كلوروكس

مقطر بماء ويغسل النباتى الجزء ويصغر بالكلوروكس تأثرت التي األوراق - تزال10للزراعة. صالحة تصبح وبهذا الكلوروكس آثار من للتخلص مرات5 - 4 من معقم

(. ) الهود األنسجة زراعة كابينة داخل تجرى10 و9 ملحوظة: الخطوات

stage Starting البداية أوال: مرحلة

اآلتية:- الغذائية البيئة على تعقيمة تم الذى النباتى النسيج يزرع وفية

MS + 3 mg /L BAP + 30 gm / L Sucrose + 100 mg /L Inositol + 2 g /L Gelrite.

حرارة درجة على التحضين غرفة إلي النباتية باألنسجة زرعت التي األنابيب - تنقل1127 2الموز أن ساعة. يالحظ16 ضوئية وفترة لوكس1500 ضوئية وكثافة م التضاعف إجراء على األبحاث تجرى وحاليا اإلضاءة بقلة التتأثر التي النباتات من مالحظة يجب المرحلة تلك في أنسيميدول. مجم/ لتر0.1 إضافة مع الظالم في

تلك في عالى يكون أنة حيث الفينولية المواد تكوين يالحظ كما دوريا التلوث نسبةالمرحلة.

والصنف. النسيج شهرحسب2 إلي1البداية مرحلة مدة

Multiplication stage التضاعف : مرحلة ثانيا

يحتوى جديد غذائى وسط إلي وتنقل التلوث من الخالية النموات تختار المرحلة هذه فيعلى:

MS salt+5mg/LBAP + 30 g/L Sucrose + 100 mg/L Inositol + 2g/L Gelrite or 8 g/L Agar

كبيرة كمية ينتج فهذا شهر واآلخر الجيل بين الخامس، الجيل حتى المرحلة هذه ومدةالنباتات. من جدا

يحتوى جديد غذائى وسط على ينقل السابع الجيل أما

MS salt+1mg/LBAP + 30 g/L Sucrose + 100 mg/L Inositol + 2g/L Gelrite or or 8 g/L Agar

Rooting stage التجذير : مرحلة ثالثا

باألنسجة زراعتة خالل من الموز إنتاج مراحل من مرحلة آخر هي المرحلة هذه تعتبر )مرحلة آخر غذائى وسط اإلكثار( إلي )مرحلة السابقة المرحلة من النباتات تنقل حيث

النباتات تنقل سوف المرحلة هذه نجاح بعد ألنة شهر هي المرحلة هذه التجذير( ومدةعلى: تحتوى هذه التجذير األقلمة(. ومرحلة )مرحلة إلي

0.5 MS salt + 2mg/L IBA + 20g/L Sucrose + 100 mg/L Inositol + 8g/L Agar.

التحـضين: ظروف

28

كثافةو أظالم ساعة8+ ساعة16 اءةضإ فترةو م2 27 حرارة تحت التحضين يتم . لوكس4000-3000 ضوئية

األقلمة عملية

الناتج11ة النبات11ات تنقل حيث السابقة الخطوات لجميع النهائية الترجمة هي المرحلة وهذه م11اء هب11 إن11اء في توض11ع ب11أن وتعقم األوعي11ة من النبات11ات تستخرج أي التجذير مرحلة من

+ م11وس بيت من مكونة بيئة الى تنقل % ثم1 بنسبة ريزوركس أو فيتافاكس أو وبنليت:2 بنسب رمل ض1رحت لألمالح آث1ار هن1اك التكون حتى جيدا الرمل غسيل ويتم بالحجم1

ص11غيرة أص11ص في ج11ذور هوب11 كام11ل نبات كل ويزرع اآلجار من النباتات وتنظف النباتات: في بوضعها وذلك النباتات وتحضن ويكيس6 نمرة

لمدة لوكس3000 ضوئية وكثافة م2 27 حرارة درجةو باإلضاءة مزودة - حضانة1 ساعة.16

. لذلك مخصصة نمو - غرفة2. 1 فى ذكرها السابق الظروف نفس تحت لألقلمة - صوب3

في فتحتين ثم واحدة فتحة األول اليوم )في يوميا األكياس ثقبت يتم أسبوع بعد ذلك بعد يزال ثم بأكملة الكيس تثقيب يتم وهكذا( حتى الثالث في ثالثة ثم الثانى اليوم

تمهيدا حجما أكبر ألصص للتدوير صالحة بعدها تكون أسبوعين لمدة النباتات وتترك وذلك الرذاذى الرى ظروف تحت األقلمة تتم أو هب المزارعين وإمداد النمو لزيادة

كل الثانى األسبوع وفي ثوان5 لمدة دقائق5 كل يعمل حيث Timer مؤقت بإستخدام ثانية15 لمدة يعمل دقيقة15 كل الثالث األسبوع وفي ثوان10 لمدة يعمل دقائق10

للمزارعين وتسليمها نموها لزيادة حجما األكبر للألصص النباتات تدور ذلك بعد وهكذا. ثمالمشتل: فى النباتات على اآلتى ويالحظ

اللون - عديم - المتبرقش المتقزم مثل متماثلة الغير النباتات كل إستبعاد - يجب1النباتات. وقاعدة بالورقة القرمزى أو األحمر

علىالنبات الغيرمتماثلة والورقة الشريطية الورقة ذات النباتات إستبعاد - يجب2النمو. في العمالقة والنباتات

النبات. محيط على المتبادلة غير األوراق ذات النباتات إستبعاد - يجب3

الموز: نباتات أقلمة عند يالحظ ما

نجاحها نسبة يكون قوى جذرى بمجموع تتميز الكبيرة األحجام ذات المنقولة - النباتات1األقلمة. في أفضل

مع جدا العالية الضوء شدة أن حيث األقلمة عملية في هاما دورا وشدتة الضوء - يلعب2النباتات. أقلمة على سلبى تأثير تؤثر العالية الحرارة درجة

م14 من أقل وخاصة المنخفضة الحرارة درجة أن حيث فعال تأثير لها الحرارة - درجة3 هذا يالحظ وقد كلية النباتات تموت م4 إلي تصل وعندما النباتات تدهور إلي تؤدى(. - يناير -ديسمبر )نوفمبر شهور في الشتاء فصل في جيدا

إضافة عدم ويجب النباتات أقلمة في الفاعلية شديد أثر لها ومكوناتها المغذية - البيئة4 التسميد يتم ذلك بعد ثم األقلمة أثناء القلب ورقة وتكشف ظهور عند إال مغذيات أي

الثالث حتى األول األسبوع / لتر( في جم1 - 2 /1 - 1/4) النشع طريق عن والرى النباتات مقاومة زيادة أهمية مدى اإلعتبار في األخذ المعمل في العاملين وعلى

نقل قبل اإلضاءة زيادة وكذلك البيئة في اآلجار تركيز زيادة طريق عن للعطش على سئ تأثير المعامالت هذه لمثل يكون قد النباتات بعض في أنة ولو النباتات

- - المبارك الجرانزيت بإستخدام الورقى ) التسميد بالرش التسميد التجذير. كذلكالنباتات. ونمو أقلمة أثناء أهمية ( لها النتروليف

( الضوئية ) الكثافة اإلضاءة شدة وزيادة السكر كمية تقليل يجب األحيان بعض - في5النباتات. أقلمة ويسهل الضوئى البناء إنزيمات تنشط حتى التجذير مرحلة في

29

المباشر الشمس ضوءل التعرض من نقلها أثناء النباتات على المحافظة يجب - كذلك6نموها. اليتأثر حتى

شهر في النباتات زراعة عند ألنة وذلك مارس شهر خالل هي الموز لبيع فترة وأهم ادتز قد النباتات وتكون للنمو المناسبة الحرارة درجة من طويل وقت عليها يمر مارس

النباتات وتثمر وتزهر الشتاء أشهر خالل البرد تحمل على القدرة لها وأصبحت النمو في نظام و المستخدم الصنف على توقفت وهذه األكثر على ونصف سنة إلي سنة خالل

الورقية. والتغذية األرضية التغذية

المراجع

: الكتيب لمحتوى األساسى المرجع

( تقني11ات2002) الش11وبكى ال11رازق عب11د & د. س11مير الرف11اعى توفي11ق ال11رحيم أ.د. عبد لمراج11ع الع11ربى الفك11ر األنس11جة. سلس11لة زراع11ة بإس11تخدام النبات لتحسين21 القرن ص1فحة،601 الص1فحات مص1ر. ع1دد – الق1اهرة – الع1ربى الفك1ر األساسية_ دار العلوماألولى. الطبعة

30